肝炎病毒检测课件

肝炎病毒病原学检查概述病毒性肝炎主要有7型：甲、乙、丙、丁、戊、庚型、输血传播病毒肝炎，分别由HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV、TTV所引起。肝炎病毒标志物主要包括各型肝炎病毒相关抗原、抗体及核酸。目前常用的检测方法有：酶联免疫法（EIA、ELISA）、放射免疫法（RIA）、血细胞凝集法（PHA）、聚合酶链反应法（PCR）等。各种病原体发现的时间HAV1973年从大便中分离HBV

1970年由丹娜发现，故又称为丹娜颗粒（Dane）HCV1989年经分子克隆技术发现（美国）HDV1977年在HBsAg阳性血中发现（意）HEV1990年用免疫电镜在病人大便发现HGV1993年TTV(transfusiontransmittedvirus)1997年参考值：抗HAV-IgM和抗HAV-IgA均为阴性，抗HAV-IgG阳性可见于甲肝感染后的人群。临床意义：1、抗HAV-IgM阳性，在发病后2周为100%，以后逐渐减少，12个月可为阴性，是早期诊断甲肝的特异性指标；2、抗HAV-IgA阳性也是早期诊断甲肝的指标之一；3、抗HAV-IgG阳性出现于恢复期且持久存在，是获得免疫力的标志，提示既往感染。（三）HAV-RNA测定：参考值阴性临床意义：HAV-RNA阳性对诊断，特别对早期诊断具有特异性。二、乙型肝炎病毒标志物检测

乙型肝炎病毒（HBV）是一种嗜肝脱氧核糖核酸病毒(DNA)，属于包膜病毒。病毒标志物有：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、HBcAg、抗-HBc、(乙肝病毒表面抗原蛋白前S2)Pre-S2、抗-Pre-S2、乙型肝炎病毒DNA。HBV模式图大表面抗原基因组DNARNA引物中表面抗原核壳体DNA多聚酶被膜小表面抗原HBV基因组结构及编码蛋白模式图（一）乙肝六项测定：正常为阴性临床意义1、HBsAg阳性：见于急性乙肝潜伏期，发病时达高峰，发病后3个月不转阴，则易发展成慢性乙肝或肝硬化。HBsAg是HBV的外壳，不含DNA，故HBsAg本身不具传染性，但其常与HBV同时存在，故常作为传染性标志之一。4、抗-HBe阳性：表示大部分乙肝病毒被清除，复制减少，传染性减低，但并非无传染性。5、HBcAg阳性：存在于Dane颗粒的核心部位，是一种核心蛋白，其外面被HBsAg所包裹，一般情况下血清中不易检测到游离的HBcAg。HBcAg阳性提示病人血清中有感染性的HBV存在，其含量较多，表示复制活跃，传染性强，预后较差。6、抗-HBc阳性：可分为IgM、IgG、IgA三型。一般是检测抗-HBc总抗体。抗-HBc检出率比HBsAg更敏感，可作为HBsAg阴性的HBV感染的敏感指标。在HBsAg阴性者中仍有6%的阳性率。其阳性可持续数年甚至终身。

乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义

sAgsAbcAbcIgMeAgeAb临床意义

+- - -

+-

急性感染早期，HBV复制活跃+- + ++-急慢性感染，HBV复制活跃+- + +-- 急慢性感染，HBV复制中度+- + +-+急慢性感染，HBV复制低度,异型慢乙肝+- + --+ HBV复制停止或极低--+ +--平静HBV携带状态，HBsAg极低测不出HBsAg/抗HBs空白期-- + ---HBV既往感染，未产生抗HBs-- + +-+抗HBs出现前阶段，HBV复制低-+ + --+ HBV感染恢复阶段-+ + --- HBV感染恢复阶段++ + ++- 不同亚型HBV再感染+- - --- HBV·DNA整合-+ - --- 病后或接种疫苗后获得免疫大三阳：HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗-HBc（+）；小三阳：HBsAg（+）、抗-HBe（+）、抗-HBc（+）。（二）乙肝病毒表面抗原蛋白前S1（Pre-S1）和前S1抗体（抗Pre-S1）测定：Pre-S1抗原位于病毒颗粒表面，是HBV识别肝细胞表面特异性受体的主要成分，是HBV复制和活动的标志物。作为病毒复制指标较HBeAg敏感，可反映HBeAg阴性乙肝患者体内的病毒活动状况，避免由于HBeAg阴性造成的误诊和漏检。（四）乙肝病毒DNA（HBV-DNA）测定：HBV-DNA呈双股环状，是HBV的基因物质，也是乙肝的直接诊断证据。临床意义：HBV-DNA阳性是诊断乙肝的佐证，表明HBV复制及有传染性。也用于监测应用HBsAg疫苗后垂直传播的阻断效果，若HBV-DNA阳性表明疫苗阻断效果不佳。（五）乙肝病毒YMDD变异测定：YMDD（酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸）是HBV逆转录酶的活性部分，属高度保守序列。临床意义：YMDD是HBV逆转录酶发挥催化活性所必需的关键结构。拉米夫定等抗HBV药物，作用靶位主要是HBV逆转录酶，通过与底物dNTP竞争结合以抑制HBV的逆转录和复制。当病毒YMDD发生变异时，就可引起HBV对该类药物的药效丧失，从而产生耐药性。乙型肝炎流行病学进展全球60亿人口中，约1/2的人生活在HBV高流行区，约20亿人曾感染过乙肝。3~4亿人为HBV慢性（终生）感染，其中25%~40%最终将死于肝硬化和肝癌；据WHO报告，在全球前10位疾病死因中，乙肝占第7位，每年因乙肝死亡者约为75万例。庄辉05.5中华肝病学会乙型肝炎病毒抗原抗体系统“窗口期”：血清中抗-HBc于HBsAg出现后3~5周开始出现。急性感染HBV者血中HBsAg已消失，抗-HBs尚未出现时，血中只能检测出抗-HBc，此阶段称为窗口期。三、丙肝病毒标志物检测

HCV为黄病毒属，单链正股RNA病毒，主要标志物为HCV-RNA、抗-HCVIgM和抗-HCVIgG。丙型肝炎病毒(HCV)

本病毒经加热100℃10分钟或60℃10小时或甲醛1:100037℃96小时可灭活。HCV细胞培养尚未成功，但HCV克隆已获成功。HCV感染者血中的HCV浓度极低，抗体反应弱而晚，血清抗-HCV在感染后平均18周阳转，至肝功能恢复正常时消退，而慢性患者抗-HCV可持续多年。病原学（一）丙肝病毒RNA测定：参考值为阴性临床意义：HCV-RNA（+）提示HCV复制活跃，传染性强；HCV-RNA转阴提示HCV复制受抑，预后较好。连续观察HCV-RNA，结合抗-HCV的动态变化，可作为丙肝的预后判断和干扰素等药物疗效的评价指标。（二）抗-HCVIgM和抗-HCVIgG测定：参考值为阴性。临床意义：1、抗-HCVIgM阳性主要用于早期诊断，一般在发病的2~4天出现，7~15天达高峰，其持续时间一般为1~3个月。持续阳性可作为慢性肝炎的指标或提示病毒持续存在并有复制。2、抗-HCVIgG阳性表明已有HCV感染但不能作为感染的早期指标。输血后肝炎有80%~90%的患者抗-HCVIgG阳性，经常接受血制品治疗的患者可以合并HCV感染，易使病变转为慢性、肝硬化或肝癌。丙肝的流行病学全球丙型肝炎的流行病学丙型肝炎呈世界性流行，是欧美及日本等国家终末期肝病的最主要原因

WHO统计表明：全球HCV的感染率约为3％，估计约1.7亿人感染了HCV，每年新发病例约3.5万例。世界不同地区丙型肝炎病毒感染的流行状况抗-HCV阳性率（％）我国不同地区丙型肝炎病毒感染的流行状况丙肝的流行病学我国丙型肝炎的流行病学特点抗-HCV阳性率随年龄增长而逐渐上升，由1岁组的2.0%至50～59岁组的3.9%，无明显性别差异。HCV1b和2a基因型较为常见，其中以1b型为主；6型主要见于香港、澳门和南方边境省份。急性丙型肝炎约50%将转变为慢性。我国健康人群中HCV感染率0.7~3.1%,最高10%。

四、丁型肝炎病毒标志物检测HDV是目前已知的动物病毒中唯一具有负单链共价闭环RNA基因组病毒缺陷病毒，需有HBV或其他嗜肝病毒的辅助才能复制和传播。其外壳为HBsAg，内部含HDVAg和HDV基因组。（一）HDVAg测定：参考值均为阴性临床意义：HDVAg出现较早，但仅持续1~2周，HDVAg与HBsAg同时阳性，表示丁型和乙型肝炎病毒同时感染，病情较重，可迅速发展为慢性或急性重症肝炎。（二）抗-HDVIgG和抗-HDVIgM测定：临床意义：抗-HDVIgM出现较早，一般持续2~20周，可用于丁肝的早期诊断；抗-HDVIgG阳性只出现在HBsAg阳性的血清中，是诊断丁肝的可靠指标，即使HDV感染终止后仍可保持多年。（三）HDV-RNA测定：阳性可明确诊断丁型肝炎，HDV与HBV重叠感染的患者易迅速发展成肝硬化或肝癌。五、戊型肝炎病毒标志物检测HEV为单股正链RNA病毒，诊断主要是检测HEVRNA和抗-HEVIgG和抗-HEVIgM。（一）戊肝病毒抗体测定：临床意义：1、抗-HEVIgM阳性：95%的急性期病人呈阳性反应，8个月后全部消失。可作为急性感染的诊断指标。2、抗-HEVIgG阳性：凡戊肝恢复期抗-HEVIgG效价≥4倍急性期者，提示HEV新近感染。（二）HEVRNA测定：临床意义：1、早期诊断感染；2、对抗体检测结果进行确证；3、判断病人排毒期限；4、分子流行病学研究。流行病学

甲型和戊型肝炎：共同点传染源均为急性期感染者和亚临床感染者；传播途径主要为粪－口途径；季节性流行于发展中国家；可引起爆发流行，不转变为慢性。流行病学

甲型和戊型肝炎：不同点甲肝儿童高发，戊肝青壮年高发；孕妇患戊肝后较易发展为重型肝炎；甲肝可获持久免疫力，戊肝免疫持续时间较短。六、庚型肝炎病毒标志物检测庚肝病毒（HGV）的检测包括抗-HGV和HGVRNA。HGV与GBV-C极相似，是黄病毒家族的不同分离株。（一）庚肝病毒抗体测定：临床意义：抗-HGV阳性表示曾感染过HGV，多见于输血后肝炎或使用血液制品引起HGV合并HCV感染的患者。（二）庚肝病毒RNA测定：临床意义：1、

HGVRNA阳性表明有HGV存在；2、HGV可能是人类肝炎的一种病原体，且在重肝中起一定作用；3、HGV的主要复制地可能不在肝脏；4、HGV感染多缺乏或仅有轻微肝损害；5、HGVRNA毒血症虽可持续多年但并不导致慢性肝损害，表明HGV可能并非嗜肝病毒。七、输血传播病毒（TTV）检测TTV病毒是单股环状DNA病毒。临床意义：1、TTV阳性表明有TTV存在；2、ELISA和PCR检测结果不一致；3、在临床工作中必须根据研究的目的和要求采用适宜的检测方法，或将两种方法联合运用，以准确了解人群中TTV的流行情况。

传染源

HAV起病前2周~黄疸出现2周后HBV起病前数周始至整个病期HCV起病前12日始至整个病期HDV/HBV病毒血症持续5~25日HEV起病28~45日病毒性肝炎标志物检测

抗原、抗体检测：

酶联免疫法（ＥＩＡ、ELISA法）放射免疫法（ＲＩＡ）血细胞凝集法（ＲＰＨＡ，ＰＨＡ）

核酸：斑点杂交、聚合酶链反应（ＰＣＲ）

补充一、慢性乙肝患者为什么需要治疗？1、慢性乙肝患者若未得到积极有效治疗，将进一步发展为肝硬化、肝癌或肝功能衰竭，这是医学界的共识。有研究数据表明，目前全球感染乙肝的人数超过了3亿五千万，如果未经治疗、干预，其中的15%到40%将发展为肝硬化、肝癌或肝衰竭。2、乙肝是一种传染性疾病，而其传染性高低，主要取决于血液中HBVDNA水平，与ALT或胆红素水平无关。因此在适当的时机积极治疗，最大限度地快速降低HBVDNA水平，可降低疾病的传染性，有助于患者人际沟通，提高生活质量。二、大三阳实现e抗原血清学转换后会变成更难治的小三阳，这种说法对吗？这是一种误解。俗话说的“小三阳”分为三种情况：1、如果HBVDNA检测呈阴性，肝功能、B超等均长期正常，说明病毒复制不活跃，传染性很低，无需隔离与治疗，这种情况约占“小三阳”患者总数的60%~70%。2、肝功能正常或轻度异常，腹部B超脾稍厚，残留少量HBV。这种情况约占“小三阳”患者总数的20%。3、HBVDNA高水平复制，肝功能不正常，称为“e抗原阴性的慢性乙肝”，此为病毒变异所致，这种情况约占“小三阳”患者总数的10%，其特点为病毒复制活跃，传染性强。这类患者应该积极随访HBVDNA水平，如果不积极治疗，任其发展，可导致肝硬化、肝癌。三、慢性乙肝治疗的总体目标：最大限度地长期抑制或消除乙肝病毒，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化，延缓和阻止疾病进展，减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、肝癌及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。---<<中国慢性乙肝防治指南>>

实际上即使经过抗病毒治疗，一年内也只有不到5%的患者可以实现表面抗原转换（即表面抗原转阴而表面抗体阳转，乙肝治愈）。而临床上如果能够达到e抗原的血清学转换和乙肝病毒的DNA检测不到，实际上已经实现了乙肝治疗总体目标之中的“最大限度地长期抑制或消除乙肝病毒，减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化”。四、理想抗病毒药物应该具备哪些条件？1、抑制病毒力强：替比夫定、恩替卡韦属于强效抑制病毒的药物。2、HBeAg血清学转换率高：较高干扰素及核酸类似物中替比夫定的e抗原血清转换率。3、HBsAg血清学转换率高：即使经过抗病毒治疗，一年内也只有不到5%的患者可以实现表面抗原转换。

4、可预测临床疗效：全球最大的注册临床试验—GLOBE研究证实，应用替比夫定治疗6个月，根据乙肝病毒抑制情况，可以判断有无疗效，并有助于及时调整治疗方案，从