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文档简介
血糖浓度的测定生物化学与分子生物学教研室实验十二血糖浓度的测定生物化学与分子生物学教研室实验十二1
【实验目的】1.巩固复习血糖的相关知识。2.掌握分光光度计的原理及使用。3.掌握测定血糖浓度的方法。【实验目的】2血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水平,即血糖浓度。正常血糖浓度:3.89-6.11mmol/L血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水3血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解
非糖物质糖异生
氧化分解
CO2+H2O糖原合成
肝(肌)糖原磷酸戊糖途径等
其它糖脂类、氨基酸合成代谢
脂肪、氨基酸血糖来源和去路血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解非糖物质4【实验原理】利用物质的光吸收特性进行含量分析与性质鉴定的技术1.分光光度技术(AbsorptionPhotometry)【实验原理】利用物质的光吸收特性进行含量分析与性质鉴定的技术5用颜色进行定量分析颜色浓度颜色如何量化?用颜色进行定量分析颜色浓度颜色如何量化?6同种溶液颜色越深,吸光能力越强溶液的颜色:由于物质的结构不同,会选择性吸收特定波长的单色光溶液的颜色:由于物质的结构不同,会选择性吸收特定波长的单色光7颜色浓度吸光能力浓度如何检测吸光能力?用吸光能力进行定量分析颜色浓度吸光能力浓度如何检测吸光能力?用吸光能力进行8分光光度计工作示意图分光光度计工作示意图9朗伯-比尔定律A
—吸光度(Absorbance)C—溶液浓度L—液层厚度K—吸光系数无色溶液适用吗?朗伯-比尔定律A—吸光度(Absorbance)无色溶10物质的光吸收曲线(吸收光谱)直接反映物质对各单色光的吸收情况间接反映物质的结构特点最大吸收光定性物质的光吸收曲线(吸收光谱)直接反映物质对各单色光的吸收情况11标准溶液法标准溶液与待测溶液的吸光度进行比较标准曲线法测出不同浓度标准溶液的吸光度,绘制标准曲线标准曲线例:未知浓度的测定标准溶液法标准溶液与待测溶液的吸光度进行比较标准曲线法测出不12光源单色器样品池(比色杯)检测系统国产721型分光光度计光源单色器样品池检测系统国产721型分光光度计132.血糖浓度测定的原理葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成葡萄糖基胺,再脱水生成希夫氏(Schiff)碱,然后经分子重排,生成一组蓝绿色化合物,在630nm处有一吸收峰,吸光度大小与血糖浓度成正比。【实验原理】2.血糖浓度测定的原理【实验原理】14【试剂】1.邻甲苯胺试剂:新配试剂应放置24小时后(待老化)使用。此试剂腐蚀性极强,应避免与皮肤接触而造成灼伤。2.葡萄糖标准应用液(5mmol/L)准确吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml,置于100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度。【器材】水浴箱,分光光度计,试管,烧杯,容量瓶。【试剂与器材】【试剂】【试剂与器材】151.选试管3支,分别标以“测定”、“标准”和“空白”,然后按下表操作。加入物(ml)测定管标准管空白管血清葡萄糖标准应用液蒸馏水邻甲苯胺试剂0.1—
—5.0—0.1—5.0——0.15.02.将上述各管分别混匀后,置沸水浴中煮沸12分钟,取出用自来水流水冷却5分钟。3.用分光光度计,在波长630nm下,以空白管调零,读取各管吸光度。【参考值】3.89~6.11mmol/L(70~110mg/dl)【步骤】加入物(ml)测定管标准管空白管血清0.1——2.将上述各161.饭后1~2小时、摄入高糖食物后、情绪紧张导致肾上腺素分泌增加时,均可出现高血糖。此为生理性高血糖。2.饥饿或剧烈运动后可出现生理性低血糖。3.糖尿病、对抗胰岛素的激素分泌过多、颅内压增加时可出现病理性高血糖。4.胰岛β细胞增生或癌瘤、对抗胰岛素的激素分泌不足、严重肝病患者可出现病理性低血糖。【临床意义】【临床意义】17
尿葡萄糖定性实验生物化学与分子生物学教研室实验十三尿葡萄糖定性实验生物化学与分子生物学教研室实验十三18【实验目的】
掌握尿糖的检测方法。【实验原理】葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下形成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的催化作用下形成水和氧,氧可将某种无色化合物氧化成有色的化合物,将上述两种酶和无色化合物固定在纸条上,制成测试尿糖含量的酶试纸。这种酶试纸与尿液相遇时,很快会因为尿液中葡萄糖的含量的少到多而依次呈现浅蓝、浅绿、棕或深棕色。【试剂与器材】目测尿糖试纸、尿杯【实验目的】19【步骤】1.将试纸带浸入尿液中(中段尿液最佳),湿透(约1-2秒钟)后取出;2.在30-60秒内观察试纸带颜色并与比色板对照,测得结果;3.结果判断:(试纸由浅蓝到棕红色变化来表示检测结果)浅蓝色表示没有糖尿病,用“-”表示;颜色愈深“+”号愈多,尿糖愈高。【参考值】正常应为阴性。【注意事项】1.尿液应新鲜,如放置后细菌生长。可分解糖而使结果偏低;2.不要在尿样中加入防腐剂,尿样不可离心。【临床意义】
尿糖阳性见于糖尿病、肾性糖尿、甲亢等。内服、注射大量葡萄糖及精神激动等也可致阳性反应。【步骤】20THANKYOU
THANKYOU21
血糖浓度的测定生物化学与分子生物学教研室实验十二血糖浓度的测定生物化学与分子生物学教研室实验十二22
【实验目的】1.巩固复习血糖的相关知识。2.掌握分光光度计的原理及使用。3.掌握测定血糖浓度的方法。【实验目的】23血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水平,即血糖浓度。正常血糖浓度:3.89-6.11mmol/L血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水24血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解
非糖物质糖异生
氧化分解
CO2+H2O糖原合成
肝(肌)糖原磷酸戊糖途径等
其它糖脂类、氨基酸合成代谢
脂肪、氨基酸血糖来源和去路血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解非糖物质25【实验原理】利用物质的光吸收特性进行含量分析与性质鉴定的技术1.分光光度技术(AbsorptionPhotometry)【实验原理】利用物质的光吸收特性进行含量分析与性质鉴定的技术26用颜色进行定量分析颜色浓度颜色如何量化?用颜色进行定量分析颜色浓度颜色如何量化?27同种溶液颜色越深,吸光能力越强溶液的颜色:由于物质的结构不同,会选择性吸收特定波长的单色光溶液的颜色:由于物质的结构不同,会选择性吸收特定波长的单色光28颜色浓度吸光能力浓度如何检测吸光能力?用吸光能力进行定量分析颜色浓度吸光能力浓度如何检测吸光能力?用吸光能力进行29分光光度计工作示意图分光光度计工作示意图30朗伯-比尔定律A
—吸光度(Absorbance)C—溶液浓度L—液层厚度K—吸光系数无色溶液适用吗?朗伯-比尔定律A—吸光度(Absorbance)无色溶31物质的光吸收曲线(吸收光谱)直接反映物质对各单色光的吸收情况间接反映物质的结构特点最大吸收光定性物质的光吸收曲线(吸收光谱)直接反映物质对各单色光的吸收情况32标准溶液法标准溶液与待测溶液的吸光度进行比较标准曲线法测出不同浓度标准溶液的吸光度,绘制标准曲线标准曲线例:未知浓度的测定标准溶液法标准溶液与待测溶液的吸光度进行比较标准曲线法测出不33光源单色器样品池(比色杯)检测系统国产721型分光光度计光源单色器样品池检测系统国产721型分光光度计342.血糖浓度测定的原理葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成葡萄糖基胺,再脱水生成希夫氏(Schiff)碱,然后经分子重排,生成一组蓝绿色化合物,在630nm处有一吸收峰,吸光度大小与血糖浓度成正比。【实验原理】2.血糖浓度测定的原理【实验原理】35【试剂】1.邻甲苯胺试剂:新配试剂应放置24小时后(待老化)使用。此试剂腐蚀性极强,应避免与皮肤接触而造成灼伤。2.葡萄糖标准应用液(5mmol/L)准确吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml,置于100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度。【器材】水浴箱,分光光度计,试管,烧杯,容量瓶。【试剂与器材】【试剂】【试剂与器材】361.选试管3支,分别标以“测定”、“标准”和“空白”,然后按下表操作。加入物(ml)测定管标准管空白管血清葡萄糖标准应用液蒸馏水邻甲苯胺试剂0.1—
—5.0—0.1—5.0——0.15.02.将上述各管分别混匀后,置沸水浴中煮沸12分钟,取出用自来水流水冷却5分钟。3.用分光光度计,在波长630nm下,以空白管调零,读取各管吸光度。【参考值】3.89~6.11mmol/L(70~110mg/dl)【步骤】加入物(ml)测定管标准管空白管血清0.1——2.将上述各371.饭后1~2小时、摄入高糖食物后、情绪紧张导致肾上腺素分泌增加时,均可出现高血糖。此为生理性高血糖。2.饥饿或剧烈运动后可出现生理性低血糖。3.糖尿病、对抗胰岛素的激素分泌过多、颅内压增加时可出现病理性高血糖。4.胰岛β细胞增生或癌瘤、对抗胰岛素的激素分泌不足、严重肝病患者可出现病理性低血糖。【临床意义】【临床意义】38
尿葡萄糖定性实验生物化学与分子生物学教研室实验十三尿葡萄糖定性实验生物化学与分子生物学教研室实验十三39【实验目的】
掌握尿糖的检测方法。【实验原理】葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下形成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的催化作用下形成水和氧,氧可将某种无色化合物氧化成有色的化合物,将上述两种酶和无色化合物固定在纸条上,制成测试尿糖含量的酶试纸。这种酶试纸与尿液相遇时,很快会因为尿液中葡萄糖的含量的少到多而依次呈现浅蓝、浅绿、棕或深棕色。【试剂与器材】目测尿糖试纸、尿杯【实验目的】40【步骤】1.将试纸带浸入尿液中(中段尿液最佳),湿透(约1-2秒钟)后取出;2.在30-60秒内观察试
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