2022-2023学年 苏教版 选择性 必修三 微生物分离、纯化和培养的无菌技术（108张）课件

第2课时微生物分离、纯化和培养的无菌技术课程内容标准核心素养对接(1)概述平板划线法分离和纯化微生物的过程。(2)概述稀释涂布平板法分离和纯化微生物的过程。(3)进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。(1)科学思维——能通过平板划线法和稀释涂布平板法的操作，掌握微生物分离和纯化的基本方法。(2)科学探究——学会配制选择培养基，以分离出能分解尿素的细菌，并对实验结果进行分析和评价。课前自主预习课中合作探究课堂小结课后·分层训练///////1235/////////////////////随堂检测4///////课前自主预习知识点1知识点2知识点1平板划线法分离和纯化微生物1.平板划线法划线稀释单个菌落 “由点到线”的稀释划线单个微生物单个微生物皿底第1第2过火灭菌由点到线倒置菌落2.通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落高压蒸汽

火焰

大于瓶口的缝隙知识点2稀释涂布平板法分离和纯化微生物(1)稀释涂布平板法梯度稀释涂布平板涂布器充分0.1酒精冷却恒温培养箱50℃表面和内部(3)分离土壤中分解尿素的细菌并进行计数3～5无菌水氮源无菌水污染最低3倒置2430～300稀释体积(1)倒平板后，待平板冷凝之后需将其倒置。(

)(2)平板划线法接种时，每一次划线前都要挑取菌体。(

)(3)稀释涂布平板法能分离细菌，也能计数。(

)(4)测定不同微生物数量时，接种的土壤悬液的稀释度相同。(

)(5)采用混合平板法分离和纯化微生物时，仅在培养基的表面长出菌落。(

)(6)通过培养未接种的培养基，可以判断是否存在着杂菌污染。(

)√×√××√1.在利用平板划线法纯化酵母菌的实验中，若纯化培养失败，可能的原因有哪些？

提示

接种环灼烧后未冷却即挑取菌体进行划线，菌体因接触高温接种环而死亡；第1次划线前挑取的菌体过多，划线时不能得到充分稀释而无法获得酵母菌单菌落；第1次划线前未灼烧接种环，因接种环有杂菌而无法获得酵母菌单菌落；第2次、第3次划线前未灼烧接种环，未将残留在接种环上的酵母菌杀死，酵母菌得不到充分稀释而无法获得酵母菌单菌落；第2次划线或第3次划线时未能从上次划线的末端开始，酵母菌得不到充分稀释而无法获得酵母菌单菌落；培养基灭菌不彻底或培养过程受到杂菌污染，无法获得酵母菌单菌落。2.有人说，采用稀释涂布平板法培养和计算得到的微生物的数量比稀释液中实际微生物的数量要少。你同意这样的观点吗？

为什么？

提示

同意这个观点。稀释涂布平板法计数是根据微生物在平板表面上所形成的单个菌落来计数的，一个菌落代表一个单细胞。实际计数时，往往会出现菌落聚合在一起的情况，因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。3.在无菌操作的条件下，为什么能通过稀释涂布平板法对所培养的微生物进行计数？

提示

稀释涂布平板法将待分离的材料做一系列的梯度稀释，再取一定量的某一稀释度的菌液涂布平板，然后用无菌的涂布器将菌液均匀地涂布在整个平板表面，使其中的微生物充分分散，培养后在平板培养基表面形成多个单菌落。如果经稀释涂布平板法培养出的都是单个细胞增殖形成的菌落，那么统计这些菌落数目，即可计算出单位体积样品中的微生物数量。课中合作探究探究点一探究点二探究点一平板划线法分离和纯化微生物1.阅读教材P22有关倒平板的内容，回答下列问题：(1)倒平板时，为什么在酒精灯火焰旁操作？提示

酒精灯火焰旁是无菌区域，可以避免周围环境中的微生物的污染。(2)倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示

通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(3)平板冷凝后为何要倒置？提示

防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快蒸发。2.阅读教材P21有关平板划线法的内容，回答下列问题： (1)平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染？

提示

①接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。②划线操作在酒精灯火焰旁进行。③接种环挑取菌体前后，要将试管口通过火焰。④划线时将培养皿的皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划线，划线后及时盖上皿盖。(2)在琼脂平板表面多次做“由点到线”的稀释划线的目的是什么？提示

这样做可以得到较多独立分布的单个微生物增殖而成的菌落。(3)在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？提示

划线末端含有的菌体数目较少，每次从上一次划线的末端开始划线能够使菌体的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的菌体。(4)接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环，其目的分别是什么？提示

每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后残留的菌种。接种结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。(5)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养？未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。如果有菌落生长，说明了什么？提示

培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。1.倒平板成功关键点 (1)待培养基冷却到50℃左右时进行倒平板操作。 (2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰，通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (3)倒平板时，要用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。 (4)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 (5)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。2.平板划线法成功关键点 (1)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。 (2)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束后仍需灼烧接种环。

(3)灼烧接种环之后，要等其冷却后才能挑取菌体，以免温度太高杀死菌种。 (4)在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，使微生物的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细胞繁殖而来的菌落。 (5)多次划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (6)接种和划线操作需要在酒精灯火焰附近进行。[例1]

下列关于制备固体培养基时倒平板的叙述，正确的是(

) A.倒好的培养基和培养皿要进行干热灭菌 B.应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C.为防止微生物侵入培养基，要在酒精灯火焰旁进行操作 D.倒好培养基后，应立即将平板倒过来放置

解析

应该在倒平板之前将培养基进行湿热灭菌，将培养皿进行干热灭菌，A错误；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；为防止微生物侵入培养基，要在酒精灯火焰旁进行操作，C正确；倒好培养基后，等培养基冷凝后再将平板倒过来放置，D错误。C[例2]

(多选)为了获得纯化的酵母菌菌落，在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上进行划线接种，培养结果如图所示。下列叙述正确的是(

)A.为保证无菌操作，接种环使用前必须灭菌B.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整

C.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落D.接种和划线操作需要在酒精灯火焰附近进行ACD解析

为保证无菌操作，接种环使用前必须灭菌，A正确；倒平板后无需间歇晃动，B错误；图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落，C正确；酒精灯火焰附近是无菌区，接种和划线操作需要在酒精灯火焰附近进行，D正确。探究点二稀释涂布平板法分离和纯化微生物1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基的配方如表所示：组分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0gH2O定容至1000mL(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？提示

碳源是葡萄糖，氮源是尿素。(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？提示

该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？提示

分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可催化尿素分解产生NH3，NH3可作为微生物生长的氮源。2.甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 (1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否可靠？为什么？

提示

不可靠。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？提示

不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。(3)某同学在三种稀释度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算1g样品的活菌数。平板菌落数稀释度平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318提示

105的稀释度下取0.1mL的菌液涂布的三个平板上的菌落数在30～300之间，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出1g样品中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108(个)。(4)为什么统计的菌落数往往比活菌的实际数目低？提示

当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。1.稀释涂布平板法 (1)主要操作环节：系列稀释和涂布平板。 (2)系列稀释和涂布平板后培养结果如图所示2.平板划线法和稀释涂布平板法的比较3.两种微生物计数方法的比较[例3]

(多选)某兴趣小组从校园土壤中取样，进行土壤中“分解尿素的细菌的分离与计数”实验。小明将1g土壤制成10－6稀释液，取0.1mL稀释液筛选出约120个菌落，而其他同学只筛选出约40个菌落。下列叙述正确的是(

)A.出现这种结果的原因可能是小明和其他同学取样的土壤不同B.要检查培养基是否受到污染，可将小明配制的培养基不接种进行培养C.稀释倍数太小可能导致计数结果偏小D.其他同学1g土样中分解尿素的细菌约为4×108个ABCD解析

小明筛选出的菌落数明显比其他同学多，出现这种结果的原因可能是小明和其他同学取样的土壤不同，也有可能是培养基中混入其他氮源或培养基被污染，A正确；要检查培养基是否受到污染，可将小明配制的培养基不加土样进行培养，即进行空白对照，B正确；当稀释倍数太小时，两个或两个以上细菌连在一起时，培养基上看到的是一个菌落，即可能导致计数结果偏小，C正确；其他同学筛选出约40个菌落，1g土样中分解尿素的细菌约为40×106÷0.1＝4×108个，D正确。[例4]

环境中的苯酚有害，研究者准备依据下图步骤操作，从处理废水的活性污泥中分离筛选能高效降解苯酚的菌株。相关叙述错误的是(

)DA.苯酚降解菌富集培养基以苯酚为碳源促进目的菌大量增殖B.将采集样品接种培养时苯酚浓度应随转接次数增加而逐渐增加C.可采用稀释涂布平板法获得降解苯酚的单菌落D.平板上长出的菌落就是研究者所需要的目的菌株解析

欲分离筛选能高效降解苯酚的菌株，在培养基中以苯酚为唯一碳源富集培养，可促进目的菌的大量增殖，A正确；图示方法为稀释涂布平板法，将采集样品接种培养时苯酚浓度应随转接次数增加而逐渐增加，B正确；当稀释倍数足够大时，平板上可获得降解苯酚的单菌落，C正确；由于活性污泥中含有多种微生物，则在平板上长出的菌落不全是研究者所需要的目的菌株，D错误。课堂小结思维导图晨读必背1.由单个微生物增殖形成的菌落，就是这种微生物的纯种菌落。2.平板划线法和稀释涂布平板法都可用于菌种的分离和纯化，只有稀释涂布平板法才可用于微生物的计数。随堂检测1.如图为纯培养酵母菌的一个操作环节，下列相关叙述中，错误的是(

)DA.该操作步骤是接种，方法是平板划线法B.除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端C.图中酵母菌密度最小的是5处D.该接种方法适用于酵母菌的计数解析

该操作步骤是接种，方法是平板划线法，A正确；除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是将聚集的菌种逐渐稀释，从而得到单菌落，B正确；图中5为最后一次划线，菌种密度最低，C正确；平板划线法只能用于微生物的分离、培养，不能用于计数，D错误。C2.某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。下列关于土壤中分解尿素细菌的分离和计数的叙述，正确的是(

) A.分解尿素的细菌是以尿素的分解产物CO2作为碳源的 B.倒平板时应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C.培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定 D.若实验组菌落平均数为57个/平板，空白对照平板上有3个菌落，则本组菌落数的平均值为54个/平板解析

分解尿素的细菌是异养型，不能以CO2作为碳源，A错误；倒平板时，不能将打开的培养皿盖放到一边，以免微生物污染，正确的做法是：用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；无机盐可以作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定，所以培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定，C正确；在完全正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。若空白对照组出现菌落，说明操作过程中存在微生物污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用，D错误。A3.为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48h，结果如图所示。下列说法错误的是(

)A.配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，还要调节pH才能用于接种B.待高温灭菌后的培养基冷却至50℃左右后，再进行倒平板C.在超净工作台上和酒精灯火焰旁进行操作，是为了防止杂菌污染D.手掌上的某些微生物在该培养基上并没有生长繁殖形成菌落解析

配制牛肉膏蛋白胨培养基时，先调节pH，再进行高压蒸汽灭菌，A错误；待高温灭菌后的培养基冷却至50℃左右后，再进行倒平板，此温度下培养基不烫手，便于后续操作，且培养基尚未凝固，容易倒出，B正确；超净工作台在使用前经紫外线消毒，而酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了防止杂菌污染，要在超净工作台上和酒精灯火焰附近进行操作，C正确；牛肉膏蛋白胨培养基虽然营养齐全，但并非所有微生物均可在其上生存，如病毒则无法在该培养基上生长繁殖，D正确。ACD4.(多选)下列关于稀释涂布平板法和平板划线法的操作，正确的是(

)A.两次划线之间灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种B.不同浓度的菌液经涂布后均可在固体培养基表面形成单菌落C.在获取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰D.同一浓度的稀释液应至少涂布三个平板用来计数解析

两次划线之间灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使得下次划线的菌种来自上次划线的末端，A正确；若菌液浓度过大，形成的菌落就连在一起，则得不到单个的菌落，当菌液稀释度足够高的情况下，菌液经涂布后可在固体培养基表面形成单菌落，B错误；在获取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰，进行灼烧灭菌，目的是防止杂菌污染，C正确；同一浓度的稀释液应至少涂布三个平板，取平均值，以减小误差，D正确。5.尿素是一种重要的氮肥，但是不能被农作物直接吸收，只有被土壤中的细菌分解成氨后才能被植物利用。某实验小组要完成课题“从土壤中分离出能分解尿素的细菌”，回答下列问题： (1)在该实验中，配制培养基需要以________为唯一氮源。该培养基中________(填“需要”或“不需要”)添加葡萄糖，原因是__________________ ________________________________。若要验证该培养基具有选择作用，需要设置_____________________________________________________________作为对照，当_____________________________________________________

时，即可说明该培养基具有选择作用。尿素需要

尿素分解菌为异养生物，需要葡萄糖为其提供碳源在相同稀释度下接种等量的相同样品的牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落明显多于该培养基上的菌落(2)在接种前需要对样品进行稀释处理，以保证获得菌落数在________范围、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板培养，若测定放线菌数量，则需要采用与此不一样的稀释倍数，原因是________________________________________________________。(3)在进行实验时，甲同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约200个菌落，但是其他同学在同样稀释度下只筛选出大约90个菌落，若甲同学的结果有问题，则可能的原因是：_____________________________________________________________________________________________________________________。30～300土壤中各类微生物的数量是不同的

培养基被杂菌污染或培养基中混入了其他含氮物质或土壤样品不同基础对点综合提升D知识点1平板划线法分离和纯化微生物1.下列有关用平板划线法接种的操作，错误的是(

)A.将接种环放在火焰上灼烧B.用已冷却的接种环挑取菌体C.挑取菌体和划线都要在火焰旁进行D.接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连解析

划线时，不能将最后一区的划线与第一区的划线相连，D错误。BD2.(多选)微生物接种方法有很多，平板划线法是最常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。下列操作方法正确的是(

)A.划线操作时，如接种环不慎划破培养基，可以继续正常操作B.对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记C.可以将第④区域的划线与第①区域的划线相连D.在该操作过程中需要灼烧接种环5次解析

划线操作时，如接种环不慎划破培养基，则该培养基将不能继续使用，A错误；培养时需要倒置培养，对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记，B正确；第④区域的划线不能与第①区域的划线相连，C错误；接种前和接种后接种环均需要灼烧，在该操作过程中需要灼烧接种环5次，D正确。A3.下列关于微生物的培养相关叙述中，正确的是(

)A.扩大培养酵母菌应该使用液体培养基并使用摇床振荡培养B.琼脂在培养基中不仅可以作为凝固剂，还可以作为碳源C.划线分离操作过程，若划线4次，则接种环需要灼烧4次D.待培养基冷却至室温后，在酒精灯火焰附近倒平板解析

酵母菌是异养兼性厌氧微生物，在有氧条件下能大量繁殖，液体培养基能增大菌体与营养物质的接触，使用摇床振荡培养能增加溶氧量，故扩大培养酵母菌应该使用液体培养基并使用摇床振荡培养，A正确；琼脂不能提供碳源，只能作为凝固剂，B错误；每次划线前后均需要对接种环灼烧，所以若划线4次，则接种环需要灼烧5次，C错误；待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，D错误。AD4.(多选)下列关于微生物的分离与培养实验的叙述，正确的是(

)A.干热灭菌可以使用专门的干热灭菌箱或酒精灯火焰的充分燃烧层B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.微生物纯培养是指获得由单一个体繁殖而形成的微生物群体的过程解析

干热灭菌法包括干热空气灭菌法和火焰灼烧法，前者可以使用专门的干热无菌箱，后者可以使用酒精灯火焰的充分燃烧层，A正确；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；接种环经火焰灭菌后待其冷却再挑取菌落，防止温度过高烧死微生物，C错误；在微生物培养过程中，由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，D正确。BCD知识点2稀释涂布平板法分离和纯化微生物5.(多选)下列就“分离土壤中分解尿素的细菌并进行计数”实验的有关叙述，正确的是(

) A.尿素是一种重要的农业氮肥，农作物直接吸收利用 B.经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置 C.同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数 D.在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长说明培养基没有被杂菌污染解析

尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氨和CO2后才能被农作物利用，A错误；经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置，以防止冷凝水污染培养基，B正确；为使实验结果更准确，同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数，并求其平均数，C正确；证明选择培养基没有被杂菌污染的方法是对培养基进行空白培养，即选取未接种的培养基与接种样品的培养基同时培养，在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染，D正确。A6.如图是从土壤中筛选具有较强降解磷能力菌株过程中的一些操作。下列相关叙述错误的是(

)A.倒平板后的培养皿需进行灭菌B.培养时培养皿的放置应如图乙中a所示C.在火焰旁操作，可以防止杂菌污染D.进行菌落计数时，一般选择菌落数在30～300的平板解析

培养基灭菌后倒平板，倒平板后的培养皿不再进行灭菌，A错误；等待平板冷却凝固后，应将平板倒过来放置，如图a所示，B正确；操作时为避免杂菌污染，应在火焰旁操作，C正确；进行菌落计数时，应选择菌落数在30～300之间的平板进行计数，D正确。C7.如图为“分离土壤中分解尿素的细菌并进行计数”实验中样品稀释示意图。据图分析错误的是(

)A.3号试管中样品液的稀释倍数为104倍B.对4号试管中的稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能恰为5号试管的10倍C.5号试管的结果表明每克土壤样品中的活菌数为1.7×108D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低解析

5号试管的结果表明每克土壤样品中细菌数为(168＋175＋167)÷3×106÷0.1＝1.7×109，C错误；用这种计数方法得到的结果往往比活菌的实际数目低，因为有可能多个细菌形成一个菌落，D正确。BD8.(多选)在分离、纯化酵母菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图所示，且甲、乙的对应位置不变。下列有关叙述错误的是(

)A.配制培养基时需进行湿热灭菌B.甲中a区域为划线的起始位置C.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落D.图示接种过程中接种环灼烧了4次解析

为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行湿热灭菌，A正确；起始划线的区域长出的菌落多且密，甲中d区域为划线的起始位置，a区域为划线的结束位置，B错误；连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落，C正确；由于每次使用接种环前后都要灼烧灭菌，图示甲中共有4次划线接种，接种过程中接种环灼烧了5次，D错误。B9.下图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该实验相关的叙述中不正确的是(

)A.实验中所用的培养基①②③④均属于选择培养基B.图中Ⅰ、Ⅱ过程实现了对目标微生物的稀释C.统计⑤处培养基中的菌落数并不一定代表接种到④上的活菌数D.在⑤处培养基上形成菌落的微生物同化作用类型为异养型解析

该实验的目的是从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物，所以使用的培养基为选择培养基，A正确；图中Ⅰ、Ⅱ过程为选择培养，目的是增大所分离的微生物的浓度，B错误；⑤处的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，C正确；所分离的微生物利用现成的有机物生长繁殖，所以该微生物的同化作用类型为异养型，D正确。AC10.(多选)硝化细菌可将氨或铵盐氧化为易被植物吸收的硝酸盐，释放的能量可用于将二氧化碳和水转化成有机物。下图为从土壤中分离硝化细菌菌株的过程示意图。下列有关说法错误的是(

)A.制作该固体培养基时应先灭菌再调pHB.Ⅰ号培养基在功能上属于选择培养基C.要筛选硝化细菌，Ⅰ号培养基的成分应不含碳源、氮源D.接种后的Ⅱ号培养基在恒温箱中通常需要倒置培养解析

为了防止杂菌污染，配制培养基时，应该先调节pH，然后灭菌，A错误；Ⅰ号培养基在功能上属于选择培养基，可通过选择培养基增加该菌的浓度，B正确；硝化细菌可将氨或铵盐氧化为易被植物吸收的硝酸盐，该培养基应加入氮源，硝化细菌利用氧化氮源获得化学能合成有机物，C错误；操作完后，将培养皿倒置于恒温箱中培养，D正确。11.分解尿素的细菌广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的细菌进行分离与计数，请回答下列问题： (1)为筛选出能分解尿素的细菌，配制培养基时应以__________作为唯一氮源，因此该培养基属于______培养基。 (2)常用来统计样品中活菌数目的方法是___________________________。尿素选择稀释涂布平板法(3)该小组对分解尿素的细菌进行计数时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是__________________________。将1mL样液稀释104倍，在3个平板上分别涂布0.1mL稀释液；经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取______________________作为结果。如果3个平板的菌落数分别为39、42和45，据此可得出每毫升样液中活菌数为________。检验平板灭菌是否彻底菌落数目稳定时的记录4.2×106解析

(1)要筛选出能分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的选择培养基。(2)接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于活菌计数；显微直接计数法用于统计活菌和死菌的数目。(3)该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，用于检测平板灭菌是否彻底。经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。3个平板的菌落数分别为39、42和45，据此可得出每毫升样液中活菌数＝(39＋42＋45)÷3×104÷0.1＝4.2×106。12.研究人员欲从土壤中筛选高淀粉酶活性的细菌(目标菌)，并对其进行研究。回答下列问题： (1)在细菌筛选过程中，将土壤样品稀释液接种至以________为唯一碳源的固体培养基上进行培养，除碳源外，该培养基还含有氮源、水、无机盐和____________。 (2)进行微生物菌种纯化时，为得到单菌落，最常用的两种接