以大豆胰蛋白酶抑制因子为研究对象课件

固定化胰蛋白酶壳聚糖床的制备以及在纯化大豆胰蛋白酶抑制因子中的应用报告人：刘冶学号：2012207245固定化胰蛋白酶壳聚糖床的制备以及在纯化大豆胰蛋白酶抑制因子中1大豆产品在东亚来说是很受欢迎的产品，它营养丰富且均衡。但是，豆科植物种子中会包含一些抗营养因子，其中主要的抗营养因子即为胰蛋白酶抑制因子,简称SBTI.大豆产品在东亚来说是很受欢迎的产品，它营养丰富且均衡。但是，2SBTI能够引起被喂食未加工过的大豆蛋白的牲畜产生胰腺膨胀反应，这种现象产生的原因在于小肠表面产生了过多的缩胆囊素，即肠促胰酶肽所致。SBTI能够引起被喂食未加工过的大豆蛋白的牲畜产生胰腺膨胀反3SBTI属于丝氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztrypsininhibitor(KTI)和Bowman-Birktrypsininhibitor(BBTI)两类，前者Mr~20kDa,后者Mr~8-10kDaSBTI属于丝氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztryp4我们从大豆研磨液中分离出来的BBTI是一种强力的胰凝乳蛋白酶抑制剂，纯化的BBTI经研究表明，BBTI还具有杀菌活性，抑制HIV-1的反转录活性。此外，在Sprgue-Dawley鼠中发现，它还能有效抑制乙酰基亚硝基脲引起的神经系统瘤.我们从大豆研磨液中分离出来的BBTI是一种强力的胰凝乳蛋白酶5实验流程交联壳聚糖床的制备环氧氯丙烷对交联壳聚糖床的活化胰蛋白酶的固定化SBTI粗品的制备天然胰蛋白酶酶活鉴定固定化胰蛋白酶酶活鉴定

SBTI的亲和分离

纯化产品效果的SDS鉴定

实验流程交联壳聚糖床的制备环氧氯丙烷对交联壳聚糖床的活化6CrosslinkingofchitosanbyglutaraldehydeScheme1Crosslinkingofchitosanbygl7Scheme2TrypsincouplingreactionbyepichlorohydrinScheme2Trypsincouplingreact8ResultsIsolationandpurificationprotocolforcrudetrypsininhibitorfromsoybeanseedsResultsIsolationandpurificat9FTIRspectraofchitosan(a),chitosanbeads(b),chitosanbeadsactivatedwithepichlorohydrin(c)andtrypsin-immobilisedchitosanbeads(d).FTIRspectraofchitosan(a),10Scanningelectronmicrographsofcrosslinkedchitosanparticles.Scanningelectronmicrographs11ParticlesizedistributionofchitosanbeadsdeterminedbylaserparticlesizeanalyserParticlesizedistributionof12AffinitychromatographyofSBTIbytrypsin-immobilisedchitosanbeads(0.2molL−1borax/borate(pH7.8)asequilibriumandwashingbuffer,HCl/H2Osolutionaseluent,pHgradientelutionatflowrateof30mLh−1,7.5mLpertube).AffinitychromatographyofSBT13SDSofcrudeandpurifiedtrypsininhibitorfromsoybeanseeds(CoomassiebrilliantblueR-250staining):A,crudeSBTIextract;B,purifiedSBTI;C,molecularweightmarkers.SDSofcrudeandpurified14EffectofpHonSBTIadsorptionbyfreeandimmobilisedtrypsin.EffectofpHonSBTIadsorptio15EffectoftemperatureonSBTIadsorptionbyfreeandimmobilisedtrypsin.EffectoftemperatureonSBTI16以大豆胰蛋白酶抑制因子为研究对象，通过胰蛋白酶固定化，利用亲和层析技术，使得从大豆研磨后的粗溶液中提取胰蛋白酶抑制因子的比率达到33.3%。并通过SDS进行鉴定，鉴定显示能够得到一条分子量在8.3kDa的比较单一的蛋白条带.以大豆胰蛋白酶抑制因子为研究对象，通过胰蛋白酶固定化，利用亲17Thankyou!Thankyou!18固定化胰蛋白酶壳聚糖床的制备以及在纯化大豆胰蛋白酶抑制因子中的应用报告人：刘冶学号：2012207245固定化胰蛋白酶壳聚糖床的制备以及在纯化大豆胰蛋白酶抑制因子中19大豆产品在东亚来说是很受欢迎的产品，它营养丰富且均衡。但是，豆科植物种子中会包含一些抗营养因子，其中主要的抗营养因子即为胰蛋白酶抑制因子,简称SBTI.大豆产品在东亚来说是很受欢迎的产品，它营养丰富且均衡。但是，20SBTI能够引起被喂食未加工过的大豆蛋白的牲畜产生胰腺膨胀反应，这种现象产生的原因在于小肠表面产生了过多的缩胆囊素，即肠促胰酶肽所致。SBTI能够引起被喂食未加工过的大豆蛋白的牲畜产生胰腺膨胀反21SBTI属于丝氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztrypsininhibitor(KTI)和Bowman-Birktrypsininhibitor(BBTI)两类，前者Mr~20kDa,后者Mr~8-10kDaSBTI属于丝氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitztryp22我们从大豆研磨液中分离出来的BBTI是一种强力的胰凝乳蛋白酶抑制剂，纯化的BBTI经研究表明，BBTI还具有杀菌活性，抑制HIV-1的反转录活性。此外，在Sprgue-Dawley鼠中发现，它还能有效抑制乙酰基亚硝基脲引起的神经系统瘤.我们从大豆研磨液中分离出来的BBTI是一种强力的胰凝乳蛋白酶23实验流程交联壳聚糖床的制备环氧氯丙烷对交联壳聚糖床的活化胰蛋白酶的固定化SBTI粗品的制备天然胰蛋白酶酶活鉴定固定化胰蛋白酶酶活鉴定

SBTI的亲和分离

纯化产品效果的SDS鉴定

实验流程交联壳聚糖床的制备环氧氯丙烷对交联壳聚糖床的活化24CrosslinkingofchitosanbyglutaraldehydeScheme1Crosslinkingofchitosanbygl25Scheme2TrypsincouplingreactionbyepichlorohydrinScheme2Trypsincouplingreact26ResultsIsolationandpurificationprotocolforcrudetrypsininhibitorfromsoybeanseedsResultsIsolationandpurificat27FTIRspectraofchitosan(a),chitosanbeads(b),chitosanbeadsactivatedwithepichlorohydrin(c)andtrypsin-immobilisedchitosanbeads(d).FTIRspectraofchitosan(a),28Scanningelectronmicrographsofcrosslinkedchitosanparticles.Scanningelectronmicrographs29ParticlesizedistributionofchitosanbeadsdeterminedbylaserparticlesizeanalyserParticlesizedistributionof30AffinitychromatographyofSBTIbytrypsin-immobilisedchitosanbeads(0.2molL−1borax/borate(pH7.8)asequilibriumandwashingbuffer,HCl/H2Osolutionaseluent,pHgradientelutionatflowrateof30mLh−1,7.5mLpertube).AffinitychromatographyofSBT31SDSofcrudeandpurifiedtrypsininhibitorfromsoybeanseeds(CoomassiebrilliantblueR-250staining):A,crudeSBTIextract;B,purifiedSBTI;C,molecularweightmarkers.SDSofcrudeandpurified32EffectofpHonSBTIadsorptionbyfreeandimmobilisedtrypsin.EffectofpHonSBTIadsorptio33EffectoftemperatureonSBTIadsorptionbyfreeand