动物组织氧化应激活性氧鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒产

--------动组氧应活氧米化发法量测剂产说明（文）主用动物组织氧化应激活性（鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下，植物样品中的活性氧族使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪Luminometer）的帮助下定量检测样品中活性氧族（过氧化氢）的生成和数量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物和人体组织的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。技背超氧自由基阴离子（；O2

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氧化氢（hydrogenperoxide；H2自由基或氢氧基（hydroxyl；OH

氧化基（radical

过氧自由基（；HOO氧自由基alcoxylradical氧基nitricOxideNO

氧亚硝基阴离子peroxynitrite

）次氯酸（；HOCl醌自由基（semiquinoneradical线态氧气（）等细胞内活性氧族（；ROS的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。鲁米诺（luminol称氨基邻苯二甲酰肼（luminol;3-aminophthalichydrazide1,4-phthalazinedione一种脂溶性的发光剂，氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光，具有460nm左右峰值的带状光谱，眼可观察到鲜明的紫蓝色。鲁米诺以单价氧化形式与超氧自由基阴离子反应产生不稳定性内过氧化物或二氧环丁（分解成电激发状态，通过释放光子，回复到基态。鲁米诺作为探针，可以检测植物中过氧化氢、超氧自由基阴离子和羟自由基，其中过氧化氢最强，其发光强度与过氧化氢水平成正相关。产内清理液（Reagent）强化液（ReagentB）发光液（Reagent）

毫升毫升毫升产品说明书

1保方保存强化液（ReagentB和发光液（ReagentC）在－20冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4冰箱里，有效保证月用自15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于去除样品杂质DOUNCE匀浆器：用于裂组织样品超声仪：用于裂解组织样品测试管：用于发光检测用的专用试管化学发光仪：用于检测化学发光实步一、品预处理1．手术取出动物组，并秤重以确定组织重量2．（选择步骤）放预冷的升锥形离心管（200毫克组织）3．（选择步骤）加xx毫升清理液（）4．（选择步骤）小抽去清理液（ReagentA）5．放进一个毫升锥形离心管6．加入置于冰槽里xx毫升清理液（）7．即刻放入预冷的匀浆器8．在冰槽里用研磨匀化组织（约）9．将所有组织匀浆移入升锥形离心管10．强力涡旋震5，充分混匀11．（选择步骤）冰槽里，置于瓦超声仪下，功率50％猝击512．转移到预冷1.5升离心管13．放进℃微型台式离心机离心10分，速度为3000g或6000RPM，例如14．小心移取1毫升上清液到新的预冷的毫离心管15．（选择步骤微升进行蛋白定量测定整蛋白浓度为20毫克/毫意Bradford）16．置于冰槽里继后续操作（1小时内）二、读测读开始前打开化学发光仪设定仪器内温度为37℃预和整合测读秒或15分钟然后关掉实验室的灯光。将－20℃箱里的试剂置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。1．准备好测试管，好标记：阴性对照、样品本底和样品活性2．移取xx微升理液（）阴性对照测试管3．移取400微升上述预处理的待测样品到样品本底测试管4．移取400微升上述预处理的待测样品到样品活性测试管5．分别加入xx微强化液（ReagentB）上述测试管，除样品本底测试管外6．分别加入xx微发光液（Reagent）上述测试管，除样品本底测试管外7．轻轻涡旋混匀8．即刻放进℃化学发光仪里测读9．整合测读秒，获得相对发光单位（relativelightunitRLU10．或者整合测15分钟，获得光电子读数X6CPM（photon意：可以使用液

体闪烁仪替代）11．计算水平：注事1．本产品为次操作2．如果测定体系变，则试剂用量相应变化3．操作时，须戴手4．测试前，动物组须新鲜收集，1小时内为最佳5．组织裂解悬液制后即刻测读，不宜过夜保存6．组织裂解悬液须澈7．测读的所有步骤须在暗室里进行8．根据活性氧值浓高低，用户可以调整样品量9．必要时，例如