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文档简介

实验五琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制生物化学实验之－－山东师范大学生命科学学院【实验目的】

了解丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。【实验原理】

由于丙二酸与琥珀酸结构相似，可以竞争性地抑制琥珀酸脱氢酶对于琥珀酸的脱氢作用。

在生物体内，肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变成延胡索酸，同时放出大量能量供肌体利用。在生物体外，可以人为地提供无氧的条件进行实验，反应中生成的FADH2可使氧化型美蓝（蓝色）转变成还原型美蓝（无色）。因此，可以从美蓝的颜色变化观察琥珀酸脱氢酶的作用。（二）试剂1.0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）2.0.02mol/L丙二酸钠溶液3.0.02mol/L琥珀酸钠溶液4.0.01%美蓝溶液5.生理盐水6.液体石蜡【实验步骤】

1.制备肌提液（酶液）：取新杀死的动物肌肉3～5g，加冷的磷酸缓冲液研磨，过滤，低温保存，备用。试剂试管编号123肌提液（ml）222（煮沸）0.02mol/L丙二酸钠溶液（ml）—1—蒸馏水（ml）1—10.02mol/L琥珀酸钠溶液（ml）2220.01%美蓝溶液（滴）5552.取试管3支，按下表操作。3.将各试管摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加液体石蜡5滴，盖在液面，以隔绝空气。置于370C水浴中保温，随时观察各管中美蓝的褪色情况，并记录时间，解释结果。【要点提示】1.提取酶液需在冰浴中进行，以防酶失活。2.实验过程中，需快速加入试剂，摇匀后迅速加入液体石蜡。3.加液体石蜡的目的是为了使反应液与空气隔绝，因此加液体石蜡时需斜执试管，沿管壁加入，不要产生气泡。4.加

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