甲肝疫苗课件

甲肝减毒活疫苗使用12年

--经验与结果

1PicornaviridaeHepatovirus2

一、纯化的甲型肝炎病毒(HAV)3

ThinsectionEMofHAVinfectedcell.HAVcontainingvesiclesareseen.4HAV的结构5二、甲型肝炎大流行由隐性感染为主至显性感染为主。中国第一传染病。90年以前，发病逐年上升年发病率约100/10万。甲肝世纪大流行1988年上海暴发大流行，集中发病32万人。7三、病毒逃脱人类监控的主要机制致病病毒能有效完成生命载体的遗传,循环不息,主要机制有:

隐性感染：HAV

先排毒后发病:HAV

慢性持续感染或长潜伏期:HBV,狂犬病毒，AIDS，SSPE,V-CJD

储存宿主（Zoonuses)和人畜共患:狂犬病，正副粘液病毒，冠状病毒，Toga/Flaviviruses,蚊、蜱、各种鸟类、家禽、家畜、野生动物。

媒介载体：贝类富集与保存，HAV变异:流感.

攻击宿主免疫系统或整入宿主DNA。

有效的传播方式:空气飞沫，性传播，垂直传播。

未知因素:SV40在人间的传播.8四、病毒病的消除/消灭●

全球性●病源性●有利条件一基因组结构稳定

一无动物宿主一发病机理清楚，无垂直传播一免疫机理清楚，中和抗体一安全、有效、免疫持久的疫苗9甲肝有可能被消除/消灭吗？基因组：稳定单一血清型动物宿主：灵长类发病机理与免疫机理：清楚疫苗：安全、有效、持久，能切断经口传播。10中国生产和使用的重要抗病毒疫苗11五、甲型肝炎减毒活疫苗特点:减毒活疫苗基因背景清楚,基因组稳定采用纯净安全的人二倍体细胞生产有后处理工艺----纯化苗12甲肝活疫苗后处理工艺纯化的必要性：细胞内增殖。纯化的方法：物理+化学。纯化的结果：牛血清白蛋白低于规程标准；杂蛋白大幅减少；灭活可能存在的其它病原体。13甲肝活疫苗（H2株）2002–2003年牛血清蛋白含量

(本结果为中国生物制品检定所抽检结果）疫苗批号物理性状无菌试验异常毒性试验感染性滴度LogCCID50/ml(≥6.50)残余牛血清蛋白含量（≤50ng/ml)热稳定性试验鉴别试验水分含量2001年5批合格7.00–7.33<6--6合格2002年6批合格6.50–6.70<6--6合格2003年6批合格6.50–7.50<3–3.13合格合计17批合格7.10≤4.96合格14甲肝减毒活疫苗（H2株）遗传稳定性疫苗的减毒基因表现15基因树分析：Picornaviridae16基因树分析:Hepatovirus17HAV基因组的稳定性全世界各地HAV同源性很高，与Polio相比较：

血清型基因型同源性HAV1Genotype:85.0%Sub-genotype:86-92.5%Polio3Genotype:68-70%HAV:大多数属于Ⅰ型(约80%)；美洲、中国、澳洲、环地中海地区。Polio:Ⅰ型：Ⅱ型＝７０％；Ⅱ型：Ⅲ型＝６８％

18杂交试验：减毒株与有毒株杂交；序列分析。结果：没有出现中间型序列；三个标准段1920六、10年来疫苗广泛应用中安全性评价1、疫苗批间安全性评价：1993-1999年共24批，分别接种儿童，共387名。其中9批疫苗还接种45只恒河猴，均无异常反应。2、1996年-1999年26批疫苗病毒对5’端非编码区的核苷酸序列测定，结果全部无变异。3、1992-2002年由中国药品生物制品检定所每年成品抽检，共53批包括：外源因子(病毒,细菌,支原体等)；异常毒性；残留牛血清；二倍体细胞稳定性等；抽检结果全部合格，均符合2000年国家生物制品规程要求。

214.疫苗全面推广应用中临床观察“八五”期间考核疫苗安全性结论：甲肝活疫苗（H2株）安全性好，接种疫苗后只有极少数人在注射局部出现红晕，3日内完全消失，未见严重局部和全身副反应。大规模人体安全性观察(九五攻关项目)，在广西、河北、江苏、浙江等地，对46万儿童进行免疫接种观察，在更大范围内证实了甲肝活疫苗的安全性，疫苗接种后未发现严重局部和全身副反应。在浙江省嵊泗县,椒江市约14万人易感者免疫接种；通过随访，有偿报告等，十五年追踪观察,没有发现与甲肝疫苗接种相关病例.225.全国新发甲肝病例

基因型（Genotype）分析标本：甲肝病人粪便或血清17份HAV阳性标本来自于浙江、江苏、安徽、云南、上海等地。（1996-1999），1998年结果：23全国新发甲肝病例基因型（Genotype）分析

结果：•从甲肝病人分离到的17株HAV株均属基因Ⅰ型；•所有HAV株间核苷酸差异均小于15%；•中国流行或散发的HAV株有基因ⅠA、ⅠB亚型同时存在；•与活疫苗H2减毒株基因不同（无关）。Ⅰ24七、疫苗减毒株的排毒、传播、

口服感染排毒：直接检测（ELISA):人12-30天：0/32；细胞增殖（二代）：低度排毒（3/4）。同班级中传播：小学生：5-11月，0/87。13.7%（昆明）口服感染：猴0/3；人0/101。2526活疫苗接种后同班级学生中无接触传播27疫苗口服不感染人28八、疫苗病毒毒力返祖试验和遗传稳定性1、毒力返祖试验：在人二倍体细胞中于360C传5代;370C传8代;350C传11代;猴体内传3代;疫苗接种者排出病毒等分别接种猴体。结果:（详见下表}无发病和明显肝功能改变无肝脏病理变化疫苗对人对环境无害.29疫苗病毒毒力返祖试验样品来源接种猴体毒力测定症状血清肝功能肝脏病理改变疫苗接种者排出---KMB17细胞传代:---360C传5代---370C传8代---350C传11代---猴体内传3代---302.H2株甲肝减毒活疫苗的遗传稳定性

---核苷酸序列测定病毒样品来源核苷酸序列测定部位与疫苗株同源性%疫苗接种者排出P1和P2连接区(2930–3272)99.7–100%(氨基酸无改变)KMB17细胞传代370C8代5’–VP2(54–1232)99.8%(氨基酸无改变)VP1–2A(2447–3164)100%KMB17细胞传代350C11代5’–VP2(54–1232)99.3%(1个氨基酸改变)VP1–2A(2447–3164)99.9%(氨基酸无改变)313.提示：活疫苗接种后由于极低的排毒，口服感染能力很弱，疫苗病毒在人群中的传播可能性很小，有利于安全。病毒繁殖部位有改变，应进一步研究。324.结论：HAV基因组十分稳定；活疫苗病毒的排毒能力低，无接触传播，口服感染能力丧失；大规模使用12年来，未发现有与疫苗相关甲肝病例因此：H2株毒力是稳定的，预计不会出现毒力回升或新的变异株。甲肝减毒活疫苗是最安全的病毒性疫苗。33九、甲肝减毒活疫苗的免疫持久性

十五年总结抗体阳转率及抗体水平：一针免疫：抗体阳转率：83.3-100%；免后10年：80.2%，GMT:80–210mIU/ml.二针免疫（0、6月或0、12月）：抗体阳转率95-100%免后5年：96.5%GMT:336-540mIU/ml.免疫保护效果达：97.7%（95%CI：90–100%）疫苗接种率与甲肝发病率呈高度负相关。活疫苗有良好的免疫回忆反应34AsignificantlynegativecorrelationofregressionbetweenvaccinecoverageandhepatitisAmorbidity

(inShengshicounty,1-15ychildren)

35BasicallyControlofhepatitisAepidemicinacounty36BasicallyeliminationofhepatitisAinahigh-risk(aged1-15)group37DeclineofHAVmorbidityindifferentagegroupinWuhanCityin199438

DecreaseofprevalenceofhepatitisAinsomeprovincesofChina(1/100,000)39TheprevalenceofhepatitisA&BinChina

(From1990to2000,1/100,000)

40甲肝活疫苗（H2株）使用

可基本消除甲肝流行•椒江：1-15岁普种，该年龄组1994年始甲肝发病率连续9年为“0”。

•嵊泗县：从甲肝高发县到基