常用的生化反应课件

实验四常用的生化反应实验目的认识染色方法鉴别细菌的局限性掌握几种常用生化反应的原理、方法和结果判断实验菌种产气肠杆菌（Enterobacterarogenes）大肠埃希菌（Escherichiacoli）普通变形杆菌（Proteusvulgaris）铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）O-F试验将实验菌种接种到2支O-F管中在其中1支管中加入无菌液体石蜡，厚度0.5cm左右。35℃培养18-24小时。结果开口管加石蜡管结果黄色黄色发酵型（F）黄色绿色氧化型（O）绿色蓝色产碱型VP试验

产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇被氧化（在碱性溶液中）生成二乙酰，后者可与含胍基的化合物反应生成红色化合物，称VP试验阳性。大肠埃希菌不能生成乙酰甲基甲醇，VP阴性。

VP甲液：5%α－萘酚

VP乙液：40%KOH硫化氢试验

变形杆菌、乙型副伤寒沙门菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。在有醋酸铅或硫酸亚铁存在时，则生成黑色硫化铅或硫化亚铁，可借以鉴别细菌。尿素分解试验

变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培养基呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色。

阳性阴性

尿素酶试验硝酸盐还原试验原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。硝酸盐还原的过程因细菌不同而异:有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸。过氧化氢酶试验(触酶试验)原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。试剂：3％过氧化氢溶液。方法：取待测菌涂在玻片上，然后加3％过氧化氢数滴立即观察结果。结果：有大量气泡产生者为阳性。不产生气泡者为阴性。氧化酶试验原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。试剂：1％盐酸四甲基对苯二胺或1％盐酸二甲基对苯二胺。方法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。葡（－）葡（＋）葡（＋）葡（＋）乳（－）乳（＋）乳（－）H2S（＋）乳（－）

克氏双糖铁琼脂（KIA）原理

以葡萄糖＋，乳糖－为例

葡萄糖是最早利用的单糖，发酵葡萄糖的中间产物丙酮酸为酸性，酚红指示剂为黄色。斜面

1、斜面生长的菌量多，面积大，跟氧分子接触的面积也大

氧化

丙酮酸CO2＋H2O中性，PH不变

2、斜面蛋白质被细菌利用，氨基酸被利用产生NH3，碱性，酚红指示剂为红色。结果高层－黄色斜面－红色如葡萄糖＋，乳糖＋，则高层与斜面均为黄色（24小时内）。如果延长培养时间，高层中的丙酮酸也会进一步氧化，同时细菌利用蛋白质后产碱性物质越来越多，则高层也会变为红色。有些细菌能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢

H2S＋Fe黑色的硫化亚铁问：有无葡萄糖－，乳糖＋的情况？为什么？MIU试验半固体M代表动力I代表吲哚（靛基质）U代表尿素结果观察时先观察有无动力，试验管有无变红（三分之二管变红为尿素阳性），然后加入对二甲基氨基苯甲醛，观察吲哚试验结果。思考题：KIA的试验原理实验内容1、用革兰染色法观察四种试验细菌的形态学特征2、将四种试验细菌接种各种生化反应管：O