分瓶细胞株细胞细胞系动物细胞培养过程

动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体制备细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的根底第一页，共四十二页。动物细胞的培养和核移植技术一、动物细胞培养第二页，共四十二页。〔一〕、概念是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。〔二〕、原理细胞分裂增殖第三页，共四十二页。〔三〕过程幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理单个细胞细胞培养第四页，共四十二页。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液接触抑制局部细胞“癌变〞，无限传代10代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系2.动物细胞培养过程：〔大多死少不死〕〔大多死少不死〕第五页，共四十二页。强调一：细胞贴壁过程■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：外表光滑、无毒、易于帖附。第六页，共四十二页。■当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。强调二：接触抑制第七页，共四十二页。有关概念:原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。第八页，共四十二页。有关概念细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大局部细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有局部细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。第九页，共四十二页。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液接触抑制局部细胞“癌变〞，无限传代10代细胞原代培养传代培养细胞贴壁剥离、分瓶细胞株细胞细胞系2.动物细胞培养过程：〔大多死少不死〕〔大多死少不死〕第十页，共四十二页。思考题：1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。第十一页，共四十二页。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能第十二页，共四十二页。6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制

不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近第十三页，共四十二页。3.总结：动物细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液剪碎用胰蛋白酶处理10代细胞转入培养瓶40-50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液稀释传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，局部细胞核型可能发生变化〔遗传物质可能改变〕为什么用胰蛋白酶处理？原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制继续传代培养少局部细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。原代培养第十四页，共四十二页。归纳过程取

的组织、器官细胞悬浮液

酶

细胞贴壁、接触抑制

培养10代细胞

培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加

液遗传物质

改变遗传物质

改变动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养原代传代未已50代细胞第十五页，共四十二页。讨论对于多细胞生物来说，细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，认为体外培养细胞应该需要什么样的条件？第十六页，共四十二页。4.动物细胞培养的条件:1〕无菌无毒的环境：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4液体合成培养基：〔糖、氨基酸〕、促生长因子、〔无机盐、微量元素〕等；通常还需参加血浆、血清等天然成分。4〕气体环境：2〕营养：3〕温度和pH：“95％空气+5％CO2〞的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH。对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以去除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。第十七页，共四十二页。5.动物细胞培养技术的应用病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体、基因工程技术、检测有毒物质、医学应用等。第十八页，共四十二页。植物组织培养和动物细胞培养的比较全能性增殖蔗糖动物血清细胞株、细胞系细胞第十九页，共四十二页。2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是〔〕

A．获得不死性的细胞B．10代以内细胞C．原代细胞D．传代细胞1、动物细胞工程技术的根底是〔〕

A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD课堂反响练习第二十页，共四十二页。3、在动物细胞培养的有关表达中正确的选项是：〔〕A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡过程中D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变B第二十一页，共四十二页。4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件〔〕①无毒的环境②无菌的环境③培养基需要参加血清④温度与动物体温相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调节培养液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D第二十二页，共四十二页。5、动物细胞培养的特点〔〕①细胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传1－10代A、①②④⑥B、②③④⑤C、①③④⑥D、③④⑤⑥A第二十三页，共四十二页。6、以下图是动物细胞培养的根本过程示意图。请据此答复：〔1〕容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。〔2〕容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是。动物胚胎或幼龄动物剪碎胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养第二十四页，共四十二页。〔3〕培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第代。〔4〕为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。`动物血清10胰蛋白酶细胞悬浮液第二十五页，共四十二页。

概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植〔难度高〕受体细胞减数第二次分裂中期的卵母细胞二、动物体细胞核移植技术和克隆动物胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易第二十六页，共四十二页。卵细胞C母绵羊子宫Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多利羊分娩卵裂融合后的卵细胞细胞拆合技术妊娠多莉羊的培育过程无性生殖第二十七页，共四十二页。克隆羊培育过程黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核细胞核移植重组细胞电脉冲刺激早期胚胎胚胎移植另一头绵羊的子宫妊娠、出生克隆羊多利第二十八页，共四十二页。１、动物的克隆与植物克隆一样吗？２、用动物体细胞进行克隆的过程,其实际操作过程是什么？动物克隆过程的实际是细胞核移植不一样思考题第二十九页，共四十二页。1.体细胞核移植的过程〔以高产奶牛为例〕体细胞培养甲牛乙牛MⅡ卵母细胞去除核去核卵母细胞重组细胞卵裂重组胚胎代孕母牛丙移植体细胞群克隆牛细胞核移植胚胎移植物理或化学方法激活体细胞注入细胞融合第三十页，共四十二页。供体细胞〔供核〕细胞培养体细胞卵巢卵母细胞〔MⅡ中期：供质〕去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传根底相同的犊牛归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状核移植过程细胞培养第三十一页，共四十二页。１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变思考题第三十二页，共四十二页。3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大局部DNA来自供体细胞核，但核外还有少局部DNA〔如线粒体DNA〕来自受体卵母细胞思考题第三十三页，共四十二页。4、比照多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出操作过程的不同点？多莉克隆过程的受体细胞是去核卵细胞，而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母细胞；多莉克隆过程是将供体细胞核注入受体细胞，而高产奶牛的克隆过程是将供体细胞注入受体细胞。5、讨论分析上述哪一种措施更科学？并说明理由？卵母细胞当中的细胞周期蛋白含量、活性比卵细胞高，用它作受体更容易成功，将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更像供体动物，操作也方便。思考题第三十四页，共四十二页。胚胎移植技术试管动物〔婴儿〕培养过程卵细胞精子体外受精受精卵胚胎新个体母体子宫内孕育、产出第三十五页，共四十二页。2.体细胞核移植技术的应用前景1、加速家畜遗传改进进程，促进优良畜群繁育2、保护濒危物种，增加存活数量3、克隆动物作为生物反响器，生产医用蛋白4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植第三十六页，共四十二页。3.体细胞核移植技术存在的问题：〔1〕成功率仍然非常低。〔2〕绝大多数克隆动物还存在健康问题。许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。〔3〕对克隆动物食品的平安性问题存有争议。第三十七页，共四十二页。1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------〔〕A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的根底是----〔〕A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD课堂反响：第三十八页，共四十二页。3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞〔〕

A.容易产生各种变异B．具有更强的全能性C.取材十分方便D．分裂增殖的能力强D第三十九页，共四十二页。4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-------------------------〔〕A.培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A第四十页，共四十二页。5.以下关于细胞工程的表达中，错误的选项是--------------------------------------------〔)

A．植物细胞融合必须先制备原生质体

B．试管婴儿技术包括人工授精和胚胎移植两方面C．经细胞核移植培育出的新个体只具有一个亲本的遗传物质

D．用于培养的植物器官或组织属于外植体C第四十一页，共四十二页。内容总结动物细胞培养。■当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢。传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，局部细胞核型可能发生变化〔遗传物质可能改变〕。适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。培养液中添加抗生素防止培养过程中污染。〔4〕为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用。C第四十二页，共四十二页。ICU病人发热原因的识别、处理思路提要定义启动发热的评估发热的病因分析热度、热型与疾病体温变化与疾病ICU不典型感染病例的诊断ICU内新出现发热的处理指南发热的定义一些文献把发热定义为核心温度>38℃（100.4°F）。另外一种定义则是两次连续的体温>38.3℃（101°F），对于粒细胞减少的病人，发热则指不受外界环境影响时单次口腔温度>38.3℃，或者>38.0℃并且时间超过1小时。通常认为正常体温为37℃（98.6°F）。在健康人群中，这个体温受昼夜变化和月经周期的影响有0.5-1.0℃的波动，干重体力活时，温度可以上升2-3℃。许多ICU将体温>38.3℃看作是发热,在ICU病房中各种环境因素也可以改变体温（专门的床垫、散热的灯、空调、体外循环、腹腔灌洗、透析、持续血液滤过）。体温调节机制同样可受药物、中枢神经或植物神经损害的影响。

启动发热的评估测量体温

不同体温测量方法的准确性

最准确的方法肺动脉导管、膀胱内导管、食道探头、直肠探头可选的方法（依准确性排序）口腔探头、红外线耳内测量其他不可靠的方法颞动脉测温、腋下测温、化学指示剂测温建议：在ICU内不应使用腋下、颞动脉估算、化学指示剂等测温方法(Ⅱ级)。对于中性粒细胞减少的患者，应避免使用直肠体温测量法(Ⅱ级)。确定发热阈值

1.重症监护病人体温>38.3℃就当考虑是发热，并给予足够的关注来判断是否存在感染。然而，对于免疫力低下病人，机体不能像免疫力正常病人那样显示一些感染的迹象，就需要一个比较低的发热阈值。

2.新出现≥38．3℃的体温或<36℃的低体温而无明确的原因，均应进行临床检查，但不一定需要实验室化验或影像学检查寻找感染证据（Ⅲ级）。发热的病因分析

构成发热的最常见的“三大类”疾病分别是感染56.5﹪，结缔组织病约占20﹪，肿瘤占10﹪。

在ICU，Bota等在他们的研究中发现，发热的最常见原因是感染，术后和脑出血。有其它的研究显示住院的病人发热的最常见原因是感染。感染性发热非感染性发热

吸收热体温调节中枢功能失常

药物热

非感染性炎症状态等．罗百灵朱锦棋胡成平发热原因待查102例临床分析[J].中国抗感染化疗杂志，2004，4（4），231－233

．DPeresBota,L.LopesFerreira,etal.Bodytemperaturealterationsinthecriticallyill.〔J〕IntensiveCareMed,2004,30:811-816

．McGowanJE,Jr.,RoseRC,JacobsNF,SchabergDR,HaleyRW(1987)Feverinhospitalizedpatients.Withspecialreferencetothemedicalservice.AmJMed82:580–586

热度、热型与疾病重症监护病房病人的发热可表现有：低热（又称微热，<38℃）中等发热（38℃～39℃）高热（39～41℃）超高热（>41℃）常见热型有:驰张热、稽留热、间歇热、再发热、不规则热等

低热疾病处于恢复状态中

危重病人由于受到疾病的打击机体长时间的处于负氮平衡状态，蛋白质合成严重不足，当机体从低反应状态逐步恢复的过程中可以出现低热中、重度贫血

创伤和严重感染所致的中重度贫血长期住院而缺乏营养支持的病人出现的营养不良性贫血术后一周内出血的吸收合并结核感染近几年，在重症监护病房合并结核感染的病例时有报道，因此在由合并结核发生的高危因素的患者如长期从事采煤采矿等粉尘下作业、以前曾有过结核病史者或慢性肺疾患长期应用抗生素治疗者一旦出现低热就要考虑到其合并结核感染的可能性病人体质衰弱而感染较重一种是患者本身因慢性疾病使得机体长期处于消耗状态而伴有不同程度的营养不良，机体的免疫力极差，机体一旦并发感染后，其自身的免疫系统无法被感染所激活，表现为机体的低反应状态而出现低热；另一种情况是患者的机体在发生感染后一直表现为高热持续不退，在未更改治疗方案的情况下，出现高热骤降至低热水平，在对患者机体的应激状态作出评估后，高度怀疑其免疫系统已处于衰竭状态。

中等度热或高热各种微生物感染（一种或二种以上）

基础疾病多且严重住院时间长反复应用多种抗生素有创性的操作多且频繁据欧洲17个国家ICU危重病患者（10038名）进行的医院感染调查（EPIC）中发现，45％的危重病患者有不同程度的感染，其中21％为在ICU中获得。输液或输血反应恶性肿瘤

恶性肿瘤坏死吸收所致，但也不能排除肿瘤因子释放导致机体的体温调节中枢功能障碍引起的发热药物热临床上主要表现为用药后立即或用药后7～14天出现的无法用当前病症解释的低热至中等热,可伴有皮疹、肝、脾、淋巴结肿大、全身不适等。超高热

·体温中枢受累

如重症颅脑疾病（包括急性脑梗塞、脑出血、颅脑外伤、脑膜脑炎等）。常伴有明显的意识障碍和其它神经系统定位体征，是预后较差的征兆。对该类患者引起的发热，要求在最短的时间内将体温恢复至正常范围内，否则患者会很快因高热衰竭而死亡。

·脓毒症

脓毒症（sepsis）是严重创（烧、战）伤、休克、感染、外科大手术患者常见的并发症，进一步可导致脓毒性休克、多器官功能障碍综合征，是临床危重患者的最主要死亡原因之一。

·散热障碍

多见于中暑、烧伤、脱水及阿托品中毒等

·产热过多

该种情况多见于内分泌危象（如甲亢危象、肾上腺皮质功能减退危象及垂体前叶功能减退危象等）、恶性高热等。

驰张热

（高热在24小时内波动达2℃以上）。在ICU最常见于败血症或脓毒血症，亦可见于局灶性化脓性感染、支气管肺炎、渗出性胸膜炎、亚急性细菌性心内膜炎病毒感染及结缔组织病等。稽留热

（高热持续于39～40℃上下，达数天或数周之久，24小时内体温波动在1℃以内）。在ICU最常见于大叶性肺炎和一些传染病的极期，如伤寒、副伤寒、斑疹伤寒（早期）、恙虫病等

再发热

高热期与无热期各持续若干天，周期的互相交替。可见于回归热、鼠咬热等。间歇热

体温突然上升至39℃以上，常常伴有恶寒或寒战，历时数小时后降至正常，大汗淋漓，过一至数天后体温又突然升高，如此反复发作，此热型最常见于化脓性局灶性感染。不规则热

发热持续时间不定，变动无规律，该类发热在ICU较常见于呼吸机相关性肺炎（VAP）、支气管肺炎、渗出性胸膜炎、亚急性细菌性心内膜炎及风湿热等。

体温变化与疾病病人体温平稳后，近期突然上升需考虑？有效抗生素停用过早

感染处出现局部脓肿形成如肺炎合并肺脓肿、胆囊炎合并胆道脓肿等。

合并二重感染由于应用抗生素或病人免疫力受抑发生霉菌感染。

新发菌株感染常见于置入引流管的病人或ICU存在交叉感染。

药物热常表现为体温平稳数日后，再次上升。

发热持续不退时需考虑？

由菌血症转为脓毒症感染微生物对药物不敏感或抗生素应用单一或抗生素剂量不足

感染基础上合并药物热，或合并二重感染

系中枢性高热系非感染性疾病

体温在近日内突然骤降或体温不升？

疾病本身在接受治疗过程中的应有表现如大叶性肺炎经抗感染治疗后，大多数病人体温有骤降现象

脓肿切开彻底引流后

应用非甾体类药物或肾上腺皮质激素

疾病突然加重，机体缺乏应有的防御反应

合并休克的存在

测量体温处置冰袋感染部位与致病菌的评估

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2008美国重症学会和感染协会成年重症患者新发热的评估指南血培养—菌血症/真菌血症血管内导管与发热肺部感染和ICU获得性肺炎大便检查泌尿道感染鼻窦炎手术部位感染中枢神经系统感染其他感染血培养(1)在发热开始的24h内留取3—4份血标本进行培养。尽力保证在抗感染治疗前获得首份血培养标本。血标本可以连续或同时抽取，但对怀疑血管内的感染，则应该间隔一段时间取不同部位的静脉穿刺抽血，有助于诊断连续的菌血症(Ⅱ级)。(2)如果临床怀疑有持续的或复发的细菌／真菌血症，或者在进行适当的抗细菌／真菌治疗48—96h后为评估治疗效果，才考虑再次进行血培养。再次血培养不能单取1份标本，必须同时抽取2份标本(Ⅱ级)。(3)如果患者没有留置血管内导管，则需要至少从2处独立的外周静脉穿刺抽血。每次操作必须先进行皮肤消毒，严格按照无菌技术来操作(Ⅱ级)。(4)进行皮肤消毒，首选2％葡萄糖酸氯已定和70％异丙醇配置的溶液，使用碘酊也有同样效果。两者都需要在穿刺取样前干燥30s以上。也可以使用聚维酮碘，但必须干燥2min以上(I级)。血培养(5)将血标本注入培养瓶前，要用70％～90％的酒精擦拭培养瓶的瓶塞，以减少污染的可能(Ⅲ级)。(6)若患者留置血管内导管，则其中1份血培养标本必须由外周静脉穿刺获得，并且至少从血管导管内抽取l份血标本。单纯从血管导管抽出标本的培养结果，不如经外周静脉穿刺取得的培养结果更有临床意义(Ⅱ级)。(7)每个培养标本要标明获取的确切时间、日期和具体的部位(Ⅱ级)。(8)每个培养标本需要抽取20～30mL的血液(Ⅱ级)。(9)同时经2个部位抽取血标本进行培养，所得结果要比单一部位的血培养结果更有临床意义。除外新生儿．不建议只进行单个血标本的培养(II级)。(10)一旦患者新出现发热并已送检血培养，如果临床怀疑有持续的或再发的细菌／真菌感染，应该再次进行血培养(Ⅱ级)。血管内导管与发热由血管内留置物引起的血行感染的相对危险因素众多，风险最大的是短期无套囊的中心静脉导管，每天每千个导管中有2-5个发生感染。相对而言，外周静脉导管引起的感染的风险较小，每天发生率不到千分之0.1。一直以来，拔除导管并行导管培养已成为导管相关性血行感染诊断的金标准，对于留置时间短的导管更是如此。研究表明，导管尖部的半定量或定量培养对于导管相关菌血症的诊断是可靠的。至少每日一次检查病人的导管口处或皮下隧道是否出现炎症或化脓，并且评估病人是否出现静脉血栓形成或栓子脱落等征象（Ⅱ级）。插管部位的任何脓液都应行革兰染色和培养（Ⅱ级）。如果考虑到病人可能出现导管相关性的脓毒症，此时应拔去导管并行导管培养。同时应行血培养（I级）。至少应同时进行两个血培养。这两个标本分别来自外周和导管（I级）。没有必要对ICU患者拔除的所有血管导管都常规进行培养，仅需对可疑是感染源的导管进行培养（Ⅱ级）。肺部感染和ICU获得性肺炎肺炎是ICU内病人获得性感染的第二种常见病因，也是发热的普遍原因，大多数病人都是在机械通气的情况下发生。如果ICU内发热患者通过临床或影像学检查怀疑有下呼吸道感染，要遵循下列原则：(1)需进行胸部影像学检查。大多数情况下，床边直立的前后位胸片是最方便的检查。如果临床需要，尤其是对免疫缺陷的患者需要排除机会性感染时，则要进行胸部正侧位摄片或CT检查(I级)。(2)在应用或更换抗生素之前，需取得l份下呼吸道分泌物的标本进行直接涂片检查并送培养。若体格检查和影像学检查提示肺炎，则需根据患者情况和当地医疗条件决定是否进行气管镜或其他有创的检查(Ⅱ级)。

(3)进行微生物检查的气道分泌物必须在2h内送至实验室并及时处理(Ⅱ级)。(4)经实验室确认合格的气道分泌物标本，需进行革兰氏染色、常规需氧及兼性厌氧菌培养。根据流行病学需要，决定是否进行其他染色、快速检测、培养等裣查(Ⅱ级)。(5)呼吸道标本定量培养这项技术还没有被列为常规的检查项目(Ⅱ级)。(6)如果患者存在胸腔积液，并且临近肺组织有浸润或者有其他依据怀疑胸腔感染，而且也能安全的抽取，则应该在超声引导下抽取胸水进行革兰氏染色和常规培养(Ⅱ级)。ICU发热患者的大便检查许多ICU病人会有由肠内营养或药物引起的腹泻，绝大多数肠源性发热是由梭菌属引起，对腹泻开始前的60天内接受抗生素治疗或化疗的病人出现发热或白细胞增多时都要怀疑肠源性发热。胃肠道感染评估的推荐意见：(1)送1份粪便标本进行艰难梭菌共同抗原的检查，EIA法检测艰难梭菌毒素A和B，或进行组织培养法检查(Ⅱ级)。(2)如果第1份粪便标本经EIA法检测艰难梭菌的结果是阴性，则需再送一次进行EIA法检测。若第1份标本的共同抗原检测结果阴性，则不需要送第2份标本(Ⅱ级)。(3)如果患者病情危重，不能进行艰难梭菌的快速检测或检测结果阴性，需要考虑进行纤维乙状结肠镜检查(Ⅲ级)。4)如果患者病情危重，在获得检查结果之前可经验性应用万古霉素治疗。若两次较可靠的粪便检查结果均为阴性，则不建议经验性治疗(Ⅱ级)。(5)对予来院时没有腹泻以及非HIV感染的患者，很少需要进行其他肠道病原菌的粪便培养。只有在流行病学需要或者针对免疫缺陷的患者时，才需要进行其他肠道病原菌的粪便培养和虫卵、寄生虫的检查级(Ⅱ级)

。泌尿道感染(1)对于发生尿路感染高危因素的患者(肾移植、粒细胞减少或近期有尿路手术／尿路梗阻的患者)，如果有尿路感染的临床征象，有必要进行相应的实验室检查。取尿液进行镜检、革兰氏染色和培养(Ⅱ级)。(2)对于留置导尿管的患者，不能从引流袋中取尿液，而应该由导尿管口留取(Ⅱ级)

。(3)为防止细菌的繁殖，尿样须在1h内送楚至实验室进行检验。如果送检时间大于1h，尿样需要冷藏处理。也可以使用防腐剂，但更推荐冷藏处理(Ⅱ级)。(4)对于留置导尿的患者，如果尿液培养的菌量大于103cfu／mL，就可确诊为菌尿或念珠菌尿。但即使培养出更多的菌量或者存在脓尿，也不能肯定导管相关性菌尿或念珠菌尿是引起患者发热的原因。通常情况下这不会引起发热(I级)。(5)如果怀疑患者存在尿管相关的尿路源性的脓毒症，将尿样进行离心和革兰氏染色，有助于识别病原菌和选择相应的抗感染治疗(I级)。(6)对于留置导尿者，不推荐使用快速试纸法来评估可能的导尿管相关的感染(I级)。鼻窦炎病因：解剖结构异常致引流不畅（最常见）、经鼻插管至胃或气管（经鼻气管插管7天后鼻窦炎的发生率约33%）、上颌面部的创伤等。细菌性窦炎的诊断标准为：两项主要标准：咳嗽，脓性鼻腔分泌物持续7天以上；或一项主要标准加两项次要标准：头痛或耳痛，面部痛或牙齿痛，发热，咽喉痛，呼吸气味臭或呼吸困难持续7天以上。推荐意见：

(1)如果临床征象提示患者发热可能由鼻窦炎所致，需要行鼻窦CT检查(Ⅱ级)。

(2)如果经验性治疗无效，则需要在无菌条件下进行相应鼻窦的穿刺抽液检查(Ⅱ级)。

(3)抽出的鼻窦积液应做革兰氏染色，进行需氧、厌氧菌和真菌的培养以明确致病菌，并作相应的药敏试验(I级)。手术部位感染(1)至少每日一次检查发热患者的手术切口，注意有无红肿、化脓、压痛等症状(Ⅱ级)。(2)如果怀疑有切口感染，需要敞开切口，并送标本培养(Ⅱ级)。(3)如果存在手术部位的感染，需要从切口最深处或手术器官处取得分泌物进行革兰氏染色和培养。组织活检或抽吸法取标本优于拭子法(Ⅲ级)。(4)浅表手术切口感染的分泌物并不需要进行革兰氏染色和培养，因为敞开后引流以及局部切口的处理就已足够，并不一定需要抗生素治疗。不推荐进行浅表分泌物的拭子检查，因为经常会被皮肤表面的细菌所污染(Ⅱ级)。(5)烧伤创面的感染需要按照相应的指南来确定(Ⅲ级)。中枢神经系统感染(1)对于新出现发热的患者，如果出现难以解释的意识改变或局部神经体征，在没有禁忌证的情况下，需要考虑进行腰穿检查(Ⅲ级)。(2)如果新近发热的患者出现新的局部神经体征。并提示有枕骨大孔以上水平的病变，在腰穿检查前常需要进行影像学检查。如果发现有肿块存在，需要请神经内科／神经外科会诊以确定最佳的诊断方法(Ⅱ级)。(3)对于有颅内植入物的发热患者，需要从脑脊液池中抽取脑脊液检查。如果脑脊液流向蛛网膜下腔被阻断，此时仍然从腰大池抽取脑脊液要谨慎考虑(Ⅲ级)。(4)如果脑室置管的患者出现昏迷或脑膜炎体征，应拔除引流管并进行导管尖端的培养(Ⅲ级)。(5)脑脊液需进行革兰氏染色和细菌培养，检测葡萄糖、蛋白质以及进行细胞计数和分类。根据患者病情决定是否进行结核、病毒、真菌和脑瘤等相关的检查(Ⅱ级)。其他感染输血后单核细胞增多症输注含有白细胞的血产品可能导致巨细胞病毒的传播而引起感染或由输血引起的抗原刺激导致巨细胞病毒CMV活化。症状通常出现于输血后一个月。尽管体温可高达40℃，但一般无临床中毒症状.当病人出现峰型热且对抗生素治疗不敏感，或当病人的病原微生物培养为阴性时，应想到病人可能为单核细胞增多症。非典型性淋巴细胞增多而全血象降低和轻微的肝功能测试升高时，也是此综合症的一个表征。潜在的感染源包括非局限性的中耳炎，骶尾部或背部或头部的褥疮，会阴或肛周脓肿，以及不易察觉的但需要仔细排除的卫生绵塞。

DrewWLMinerRC:Transfusion-relatedcyto­megalovirusinfectionfollowingnoncardiacsur­gery.JW11982:247:2389-2391LernerPI,SamplinerJE:Transfusion-associatedcytomegalovirusmononucleosis.AnnSurg1977;185:406-410不典型感染病例的诊断相当一部分感染病人是不发热的：如老年人，腹部开放伤的病人，大面积烧伤的病人，接受体外模式人工氧合的病人和持续性肾脏替代治疗的病人，充血性心力衰竭的病人，终末期肝病病人，或慢性肾衰竭病人，服用抗炎药和退烧药的病人。体温过低或过高的病人可能有危及生命的感染提示感染的症状和体征：比如用其它方法无法解释的血压过低，心动过速，呼吸急促，精神错乱，寒战，皮肤损伤，呼吸系统表现，少尿，乳酸酸中毒，白细胞增多，白细胞减少，未成熟中性粒细胞（如带状细胞）大于10%，或血小板减少等。血清降钙素原和内毒素活性检测：可用作鉴别发热是否由感染引起的辅助手段(Ⅱ级)。病毒感染、近期手术和慢性炎症状态不会引起降钙素原浓度升高；内毒素阴性结果可较特异性的排除革兰阴性菌感染（98.6%）。肿瘤坏死因子a，白介素6，c反应蛋白，髓系触发受体：已经通过测试可以用来鉴定感染和其他炎性反应。

UgarteH.SilvaE.MercanD,etal:Procal-citoninusedasamarkerofinfectionintheintensivecareunit.CrifCareMed1999;27:498-504SuprinE.CamusC,GacouinA.etal:Pro-calcitonin:Avaluableindicatorofinfectioninamedical1CU?IntensiveCareMed2000;26:1232-1238.

MarshallJC.WalkerPM.FosterDM,etal:Measurementofendotoxinactivityincriti­callyillpatientsusingwholebloodneutro­phildependentchemiluminescence.Crit