铁皮石斛活树附生实施方案

铁皮石斛活树附生栽培模式下的光合特性及主要药用成分变化研究1铁皮石斛活树附生生长特性1.1材料与方法1.1.1试验地概况试验地位于江西省九江市庐山区莲花镇东城村，在天花井国家森林公园内（E116338”，N29°37,19H）,幽谷深壑众多，森林植被茂密，水源涵养大。该地属中国亚热带东部季风区域，气候温和，雨量充沛，年均降水量为1437mm,年平均气温15-18°C,年平均日照时数1932h,年平均无霜期239-266d,年平均雾日在16d以下。1.1.2试验材料釆用铁皮石斛组培苗，选择无烂茎、烂根、黄叶，生长健壮，无病虫害，叶片4片以上，叶色翠绿的组培苗，在室外环境中炼苗7d后，洗净培养基，经800倍液多菌灵浸泡lmin后，栽植到遮阳度70%的简易大棚内，以细锯末、松树皮、石灰石、泥炭按一定比例混合作基质，株行距为4cmxl0cm,栽后每天定时喷雾3巧次，湿度保持在80%左右，培育6个月后上树栽植。1.1.3试验设计与方法经综合练苗后，选择叶片4片以上、生长健壮、无病虫害的合格苗上树。试验设附生树种4种，分别为樟树、枫香、杉木、马尾松;其中马尾松釆用以下4种不同上树方式：水苔+草绳、草绳、混合基质、木屑。前3种附生树种在树上栽种时，先将经综合练苗后的铁皮石斛种苗在装有混合基质的一次性塑料杯中，再将塑料杯靠树枝的一侧剪开一部分，用钢钉钉在树体上。在附生树种马尾松上栽植时，从上而下进行，间距（行距）为35cm,每8cm（株距）栽植一株（丛）每个处理种植4丛，重复5次。共20个处理。第1种上树方式是，先用草绳缠绕树干一周，将铁皮石斛苗植入绳子内侧，在苗根部用水苔覆盖，再缠绕1圈麻绳，绑牢，以固定石斛须根于植株树干上，使其新根长岀后沿树体紧密攀沿生长。第2种上树方式与第1种上树方式相似，所不同的是苗根部裸露，不加水苔覆盖；第3、第4种上树方式同前三种附生树种，先将经综合练苗后的铁皮石斛种苗在装有混合基质的一次性塑料杯中，再将塑料杯靠树枝的一侧剪开一部分，用钢钉钉在树体上。1.2测定2014年8月中旬种植，分别在8月、10月、12月进行成活率及生长量调查，观测不同处理的植株苗生长情况(茎高、茎粗、节数)。2015年4月调查过冬成活率，5-11月调查分别每月调查生长活跃期的生长情况。2铁皮石斛活树附生光合特性2.1试验材料选用杉木、樟树、马尾松、枫香不同树种以及不同上树方式上的生长健壮，长势基本一致的铁皮石斛，于2015年6T0月分别选取每月的晴朗天气进行光合测定，各项光和指标均选茎条中上部3片功能叶进行测定。2.2光合作用月变化测定选晴天(7：00-17：00),釆用美国生产的Li-6400便携式光合作用系统(Li-cor,USA)进行净光合速率(Pn)日变化的测定，每隔2小时测定一次，中午11点到13点间加测一次。仪器同时记录净光合速率(Pn)，蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Cond)、胞间CO2浓度(Ci)、叶片温度(TL)、空气相对湿度(RH)和光照强度(PAR)o为了消除时间上的误差，每次重复测定时各种质间采取随机测定的方法，因为铁皮石斛的叶片较小，无法充满整个叶室，测定后取回测试叶，在实验室重新测量叶面积之后，输入电脑重新进行数据处理。3铁皮石斛活树附生主要活性成分变化3.1多糖测定实验方法葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液(ml)00.10.20.30.40.60.8蒸懦水(ml)10.90.80.70.60.40.2含量(卩g)0102030406080在每支试管中立即加入蔥酮试剂4.Oml,加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。植物样品中可溶性糖的提取将小麦剪碎至2mm以下，准确称取1克，放入50三角瓶中，加沸水25n】l,在水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2ml置另一50ml容量瓶中，以蒸馅水稀释定容不，摇匀测定。测定吸取1ml已稀释的提取液于大试管中，加入4.0ml蔥酮试剂,以一操作同标准曲线制作。比色波长620nm,记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量(卩g)。查表所得糖含量X稀释倍数结果处理植物样品含糖量(％)=查表所得糖含量(卩g)X稀释倍数/样品重(g)X106X1003.2铁皮石斛总生物碱含量的测定样品处理样品在60C烘箱中烘干，粉碎，过60目筛。取各种样品粗粉0.1g用适量的氨水润湿密塞30min,精密加入氯仿10飢称重，水浴加热回流2h冷却后，氯仿补足失重，过滤，以酸性染料比色法测定含量，试验平行3次。部分样品氯仿稀释后再进行测定。线性试验精密称取碱l.OOmg置100mL量瓶中加氯仿至刻度。精密量取1.0,2.0,3.0,4.0,5.001L分别置分液漏斗中，用氯仿准确稀释10.0mL,加入pH4.5缓冲液5.0mL和0.04%漠甲酚绿溶液l.OmU剧烈振摇3min,静置30min,氯仿层经氯仿浸泡处理并干燥后的药棉滤过，取续滤液5.OmL加0.01mol/L氢氧化钠无水乙