二、动物细胞融合与单克隆抗体(上传)课件

欢迎您的光临！植物细胞杂交技术

的过程是怎样的？提问？植物体细胞杂交过程示意图植物A细胞植物B细胞去壁原生质体A原生质体B原生质体融合融合体再生壁杂种细胞愈伤组织杂种植株细胞融合植物组织培养1.为什么灭活的病毒能作为诱导剂？

2.不灭活的病毒能作为诱导剂吗？思考题：灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面

灭活的病毒使细胞膜上蛋白质和脂质重新排布，细胞膜打开被融合细胞的细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞

灭活的病毒使细胞膜上蛋白质和脂质重新排布，细胞膜打开生物种类细胞来源成功年代酵母菌—鸡原生质体—血红细胞1975年人—胡萝卜腹水癌细胞—原生质体1976年人—小鼠纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞1978年动物细胞融合已成功的实例思考题：

1.传统的抗体生产方法及缺陷是什么？

2.B淋巴细胞产生抗体有何特点？要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞结论：探索原因：动物体内经免疫反应产生的抗体可多达百万种以上每一个B细胞只分泌一种特异性抗体新难题：在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的制备单克隆抗体的技术获新技术：将淋巴B细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，进而获得大量特异性强的抗体奇思妙想：难题：医疗实践中遇到的难题抗体的特异性差获得大量抗体困难纯度低制备单克隆抗体新技术的获得过程：制备单克隆抗体流程图获取B淋巴细胞和骨髓瘤细胞细胞融合、筛选

杂交瘤细胞细胞培养、筛选产生特定抗体杂交瘤细胞大量单克隆抗体生产抗体步骤：

怎样筛选出杂交瘤细胞？

怎样获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞？选择培养基筛选法：

1.HAT培养基：H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤。A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断DNA合成主要途径。T(Thymidine)：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成DNA。2.HAT选择作用：

淋巴细胞、骨髓瘤细胞和融合的具有同种核的细胞：不能生长，都会死亡。

杂交瘤细胞:不会死亡、都能生长。

常用“有限稀释法”来选择：将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每个孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔中的细胞继续进行有限稀释，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。

怎样利用杂交瘤细胞来生产抗体？制备单克隆抗体流程动物免疫分离脾细胞制备骨髓瘤细胞细胞融合HAT培养基选择杂交瘤细胞阳性孔克隆化并扩大培养再次克隆克隆扩大培养扩大培养收集上清液动物接种收集腹水单克隆抗体纯化保存ELISA测血清单克隆抗体的概念：

通过用单个的杂交瘤细胞克隆形成细胞群，由这些细胞产生出化学性质单一、特异性强的抗体，即为单克隆抗体。单克隆抗体的有关应用

⑴作为诊断试剂：

准确识别各种抗原物质，与抗原的特异性结合具有准确、高效、简易、快速的特点。⑵用于治疗疾病和运载药物：

主要用于治疗癌症。单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。二、动物细胞融合与单克隆抗体（一）动物细胞融合（二）单克隆抗体1.概念