2022年医学专题-肠杆菌科鉴定(全)

肠杆菌(gǎnjūn)科南京医科大学临床(línchuánɡ)检验系赵旺胜第一页，共八十七页。一.分布

9版伯杰鉴定细菌手册(shǒucè)分为24个属，108个种

现增加到31个属,常见的15个属

1.占临床分离菌总数50%

2.占G-杆菌总数80%

3.占败血症50%

4.占尿路感染70第二页，共八十七页。二.临床意义

有些菌属对人类有明显的致病作用(zuòyòng)1、鼠疫耶耳森菌--引起烈性传染病2、埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、

耶耳森菌属可导致腹泻、食物中毒.伤寒有些菌属与医院感染有关1、肺炎2、脑膜炎3、菌血症4、各种部位的感染多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌第三页，共八十七页。与人类感染(gǎnrǎn)有关的肠杆菌科细菌有31个菌属，其中临床标本中常见的菌属有15种克雷伯菌属爱德华菌属邻单胞菌属变形杆菌属普罗威登斯菌属沙门菌属耶尔森菌属志贺菌属沙雷菌属肠杆菌属埃希菌属哈夫尼亚菌属枸橼酸杆菌属摩根菌属多源菌属

第四页，共八十七页。三.微生物特性(tèxìng)

1.G-杆菌，多数有鞭毛、菌毛2.发酵葡萄糖，兼性厌氧3.氧化酶阴性4.还原(huányuán)硝酸盐为亚硝酸盐5.触酶（＋）6.营养条件不高，第五页，共八十七页。拉丝(lāsī)试验涂片(túpiàn)：G-b氧化酶试验(shìyàn)非发酵菌、弧菌－+肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌双糖试验FO不动、嗜麦芽肠杆菌科细菌苯丙,葡盐,枸,硝,赖,鸟,氨对,山,肌,侧,,吲哚硝酸盐还原+－嗜麦芽不动四、鉴定流程图第六页，共八十七页。种属鉴定(jiàndìng)科的特征(tèzhēng)硝酸盐还原(huányuán)＋葡萄糖发酵氧化酶－触酶＋属间鉴定特征属内种间鉴定特征血清学分型报告细菌种名报告细菌血清型概述分子生物学鉴定第七页，共八十七页。五、肠杆菌(gǎnjūn)科的初步分群

可用苯丙氨酸和葡萄糖酸盐试验(shìyàn)将肠杆菌科分为四大组第八页，共八十七页。菌属名苯丙氨酸葡萄糖酸盐变形杆菌属+－普鲁维登斯菌属+－摩根氏菌属+－塔特姆菌属+－克雷伯菌属－+肠杆菌属－+多源菌属－+沙雷菌属－+西地西菌属 － +哈夫尼亚菌－+埃希菌属－－志贺菌属－－沙门(shāmén)菌属－－枸橼酸杆菌属－－爱德华菌属－－耶尔森菌属－－克卢瓦菌属 － －兰恩氏菌属++第九页，共八十七页。六.苯丙氨酸阳性(yángxìng)组的各属鉴别

试验变形杆菌属普鲁维登菌属摩根氏菌属塔特姆属H2S+---枸橼酸盐+/-+--靛基质(jīzhì)+/-++-第十页，共八十七页。1.变形杆菌属内各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别

试验普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产粘液(zhānyè)变形杆菌靛基质+---鸟基酸-+--木糖+++-第十一页，共八十七页。2.普鲁维登菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别

试验产碱斯图雷极普鲁维登斯菌普鲁维登斯菌普鲁维登斯菌侧金盏花醇+-+甘露醇+--第十二页，共八十七页。生化反应 雷氏 斯氏 产碱 拉氏 海氏吲哚(yǐnduǒ)产生 + + + + -肌醇 + + - - V海藻糖 - + - - -戊五醇 + - + - +第十三页，共八十七页。

3.摩根菌属种的鉴定(jiàndìng)

试验(shìyàn)

摩根摩根菌摩根菌(生物1群)赖氨酸-+动力+-

第十四页，共八十七页。4.塔特姆菌属的鉴定(jiàndìng)

苯丙氨酸H2S枸橼酸盐鸟氨酸靛基质(jīzhì)+----第十五页，共八十七页。+_－+－+－+－+－+－+苯丙氨酸+H2S枸橼酸盐靛基质鸟氨酸靛基质侧金盏花醇甘露醇普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产碱普鲁维登斯菌雷极普鲁维登斯菌斯图普鲁维登斯菌摩根菌塔特姆菌.苯丙氨酸阳性(yángxìng)组菌属鉴别索引图5-第十六页，共八十七页。七.葡萄糖酸盐阳性(yángxìng)组各属鉴别

试验克雷伯菌属沙雷菌属肠杆菌属

哈夫尼亚菌属

多源菌属

动力-++++DNA酶

-+---鸟氨酸

-+++-枸橼酸盐

+++-+第十七页，共八十七页。原克雷伯菌属（klebsiella）有5个种，2个亚种肺炎(fèiyán)克雷伯菌（K.pneumoniae）产酸克雷伯菌（K.oxytoca）解鸟氨酸克雷伯菌（K.ornithinolytica）植生克雷伯菌（K.planticola）土生克雷伯菌（K.terrigena）

分类克雷伯菌属臭鼻亚种鼻硬结(yìngjié)亚种解鸟氨酸柔特勒(tèlè)菌（R.ornithinolytica）植生柔特勒菌（R.planticola）土生柔特勒菌（R.terrigena）

柔特勒菌属(Raoultella)Thisproposalisbaseon16SrDNAandrpoBgenesequencingandcarbonassimilationstudies.第十八页，共八十七页。培养(péiyǎng)特征

血琼脂上菌落较大，呈黏液状，以接种环挑取时易拉成丝在肠道培养基上呈发酵乳糖小菌落在液体培养基内生长混浊、浓厚、可见(kějiàn)菌膜，管底有粘性沉淀物

K.pneumoniae菌落(jūnluò)（血平板）

克雷伯菌属第十九页，共八十七页。1.克雷伯菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别试验产酸克雷伯菌肺炎克雷伯菌臭鼻克雷伯菌鼻硬结克雷伯菌靛基质+－－－甲基红－－++丙二酸盐

++－

+第二十页，共八十七页。克雷伯菌和柔特勒(tèlè)菌种间鉴定表生化反应肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌解鸟氨酸柔特勒菌植生柔特勒菌肺炎克雷伯菌臭鼻亚种肺炎克雷伯菌鼻硬结亚种土生柔特勒菌脲酶++++---吲哚产生-++--(-)-鸟氨酸--+---(-)甲基红-(-)++++VV-P++V+--+丙二酸盐++++-++枸橼酸盐++++V-V克雷伯菌属第二十一页，共八十七页。

S.marcescens菌落特征（普通营养(yíngyǎng)平板）

沙雷菌属第二十二页，共八十七页。

S.marcescens菌落特征(tèzhēng)（普通营养平板）

沙雷菌属第二十三页，共八十七页。2.沙雷菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别

试验粘质沙雷菌液化沙雷菌红色沙雷菌鸟氨酸++－阿拉伯糖－++第二十四页，共八十七页。分类：现有(xiànyǒu)13个种2个生物型原有7个种2个生物(shēngwù)型产气肠杆菌(E.aerogenes)阴沟肠杆菌(E.cloacae)杰高维肠杆菌坂崎肠杆菌泰洛肠杆菌中间肠杆菌聚团肠杆菌河生肠杆菌生物群1河生肠杆菌生物群2后增加(zēngjiā)7个菌阿氏肠杆菌何氏肠杆菌溶解肠杆菌超压肠杆菌克沃尼肠杆菌考伯肠杆菌帕瑞勒肠杆菌

肠杆菌属第二十五页，共八十七页。3.肠杆菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别

试验坂崎杆菌阴沟杆菌产气杆菌格高菲杆菌赖氨酸－－++山梨醇－++－本菌属的细菌生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统(xìtǒng)很难达到90％以上的鉴定正确率第二十六页，共八十七页。肠杆菌属种间鉴定(jiàndìng)表生化反应产气杰高维帕瑞勒聚团河生，生物群1癌生阪崎何氏阴沟克沃尼中间考伯阿氏河生，生物群2溶解超压赖氨酸脱羧酶+++-------------山梨醇+--V----++++++++VP试验++VV+++++++--+++七叶苷+++V+++-V++V++++蜜二糖++VV+-+-++++-+++蔗糖+++V+-++++V++-+-精氨酸脱氢酶-----++V+--+VV+-鸟氨酸脱羧酶+++-V++++-V+++++核糖醇+-------V-------鼠李糖+++V++++++++-+++α-甲基-D-葡萄糖苷+---V-+VV-++++++黄色素---V--+--V------肠杆菌属第二十七页，共八十七页。4.哈夫尼亚菌属鉴定(jiàndìng)葡萄糖酸盐枸橼酸盐棉子糖+－－5.多源菌属种的鉴定试验(shìyàn)聚团多源菌弥散多源菌赖氨酸--鸟氨酸--水扬苷+-

第二十八页，共八十七页。5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别(jiànbié)双岐索引图

－－－+－－++－+－－++－－++－+－++--－－++－+葡萄糖酸盐+侧金盏花醇赖氨酸鸟氨酸赖氨酸鸟氨酸靛基质枸橼酸盐山梨醇丙二酸盐阴沟肠杆菌产酸克雷伯菌山梨醇肺炎克雷伯菌产气肠杆菌红色沙雷菌多源肠杆菌鼻硬结克雷伯菌臭鼻克雷伯菌哈夫尼亚菌山梨醇格高菲肠杆菌阿拉伯糖贩崎肠杆菌阴沟肠杆菌粘质沙雷菌液化沙雷菌第二十九页，共八十七页。八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性(yīnxìng)组的各属鉴别

试验沙门菌属志贺菌属埃希菌属枸橼酸杆菌属耶尔森菌属爱德华菌属甘露醇+++++－ONPG－－+++－动力+－++++枸橼酸盐+/－－－+－－赖氨酸+－+－－+第三十页，共八十七页。枸橼酸杆菌属分类枸橼酸杆菌属（Citrobacter）包括(bāokuò)11个种弗劳地枸橼酸杆菌(gǎnjūn)(C.freundii)

差异枸橼酸杆菌（C.diversus）库斯枸橼酸杆菌无丙二酸盐枸橼酸杆菌(C.amalonaticus)（C.koseri）

布拉吉枸橼酸杆菌（C.braakii）雷登枸橼酸杆菌（C.rodentium）塞拉克枸橼酸杆菌（C.sedlakii）魏克曼枸橼酸杆菌（C.werkmanii）扬哥枸橼酸杆菌（C.youngae）吉乐枸橼酸杆菌（C.gillenii）穆利枸橼酸杆菌（C.murliniae）法玛丽枸橼酸杆菌（C.farmeri）

第三十一页，共八十七页。1.枸橼酸杆菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别

试验费劳地枸橼酸杆菌异型枸橼酸杆菌丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌鸟氨酸－++侧金盏花醇－+－注意：很多鉴定系统(xìtǒng)的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料第三十二页，共八十七页。枸橼酸杆菌(gǎnjūn)种间鉴定表生化反应弗劳地穆利杨格吉乐魏克曼无丙二酸盐法玛丽布拉吉库斯赛拉克雷登鸟氨酸脱羧酶-----++++++丙二酸盐利用---++---+++尿素水解VV+-++VVV++卫矛醇发酵-++----VV+-KCN生长++++++++-+-蔗糖发酵+V-V--+-V--D－阿拉伯醇发酵--------+--蜜二糖发酵+V-V--++-+-枸橼酸杆菌属第三十三页，共八十七页。2.爱德华菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别

试验迟缓爱德华菌保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌H2S+－－甲基红++－第三十四页，共八十七页。3.埃希菌属种的鉴别(jiànbié)

试验大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）葡萄糖产气+－动力+－第三十五页，共八十七页。致泻性E.coli分为(fēnwéi)5类：肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)肠致病性大肠埃希菌(EPEC)肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)肠出血型大肠埃希菌(EHEC)肠凝聚型大肠埃希菌(EAggEC)埃希菌属临床意义

(ClinicalSignificance)E.coli以肠道外感染(gǎnrǎn)多见，主要有泌尿系统感染(gǎnrǎn)

E.coli中的致病菌株能引起(yǐnqǐ)各种类型的腹泻，根据其不同的血清型别、毒力和临床症状第三十六页，共八十七页。鉴定(jiàndìng)要点不活跃大肠埃希菌与志贺菌易混淆，需相互(xiānghù)鉴别

醋酸钠葡萄糖铵利用粘质酸盐产酸试验大肠埃希菌＋＋＋志贺菌属－－－埃希菌属大肠埃希菌在中国兰平板上为蓝色菌落(jūnluò)大肠埃希菌

在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落大肠埃希菌在麦康凯和SS平板上为红色菌落第三十七页，共八十七页。第三十八页，共八十七页。第三十九页，共八十七页。培养(péiyǎng)特征

兼性厌氧菌营养要求不高菌落(jūnluò)呈中等大小、无色、半透明、光滑在SS平板上，因产生H2S可形成黑色中心的菌落伤寒(shānghán)沙门菌菌落形态（SS平板）四沙门菌属第四十页，共八十七页。常用血清：O多价血清（含A～F群）O、H、Vi抗原(kàngyuán)因子血清

方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门菌属生物学特性，则

采用A-F多价血清初步确定是否为Salmonella1.如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型2.如阴性：应考虑是否有Vi抗原?

血清学分型加热(jiārè)或传代去除(qùchú)Vi抗原凝集：做O多价和单价凝集不凝集：可能为A～F以外沙门菌属第四十一页，共八十七页。第四十二页，共八十七页。

③如是双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查(jiǎnchá)第2相抗原。

群菌型Ｏ抗原Ｈ1相Ｈ2相A甲型副伤寒1,2,12a－B乙型副伤寒1,4,12b1.2

鼠伤寒1,4,12i1.2C1丙型副伤寒6,7(Vi)C1.5

C1猪霍乱6,7<c>1.5D伤寒1,9(Vi)d－

肠炎1,9,12g,m－

都柏林1,9,12(Vi)g,p－E火鸡3,10e,h1.w

山夫顿3,15e,h1.bF河伯丁1,3,19g,t－第四十三页，共八十七页。兼性厌氧菌营养要求不高普通平板：中等(zhōngděng)大小、半透明、光滑鉴别培养基：乳糖不发酵的菌落培养(péiyǎng)特性菌落形态(xíngtài)（麦康凯平板）

志贺菌属第四十四页，共八十七页。种属鉴定(jiàndìng)菌属特征发酵(fājiào)葡萄糖产酸不产气赖氨酸（－）H2S（－）尿素（—）动力（—）志贺菌属第四十五页，共八十七页。5.志贺菌属的鉴定(jiàndìng)先用志贺多价血清与菌种凝集，如多价血清凝集为志贺菌，多价里不包含(bāohán)鲍氏C16-20再进一步用因子血清凝集而定群。亚群和种血清型痢疾A1－10福氏B1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5,6鲍氏C1－C15宋氏D第四十六页，共八十七页。6.耶尔森菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别试验鼠疫耶耳森菌假结核耶耳森菌小肠耶耳森菌弗氏耶耳森菌中间耶耳森菌鸟氨酸--+++鼠李糖-+-++密二糖-+--+第四十七页，共八十七页。第四十八页，共八十七页。7、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性组菌属鉴别(jiànbié)

双歧索引图

+－－－++－++－－++－－+－－+－++苯丙氨酸、葡萄糖酸盐－-甘露醇ONPG枸橼酸盐动力H2S侧金盏花醇赖氨酸沙门菌属志贺菌属迟缓爱德华菌甲基红异型枸橼酸杆菌鸟氨酸葡萄糖产气耶尔森菌属丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌费劳地枸橼酸杆菌大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌第四十九页，共八十七页。第五十页，共八十七页。肠杆菌鉴定(jiàndìng)选用多少生化反应管为好：

苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸盐、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、ONPG、靛基质、双糖（H2S）第五十一页，共八十七页。九、兰恩氏菌属的鉴定(jiàndìng)

苯丙氨酸葡萄糖酸盐枸橼酸盐靛基质+++－

第五十二页，共八十七页。十.西地西菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别试验戴氏西地西菌拉氏西地西菌奈氏西地西菌鸟氨酸+--山梨醇--+第五十三页，共八十七页。十一.克卢瓦菌属各种(ɡèzhǒnɡ)的鉴别试验抗坏血酸克卢瓦菌冷半月克卢瓦菌赖氨酸+-第五十四页，共八十七页。十二.API鉴定(jiàndìng)系统(20E)菌液制成0.5麦氏浊度(zhuódù),加入20E板条,第五十五页，共八十七页。第五十六页，共八十七页。火一样(yīyàng)的热情浪一样(yīyàng)的冲劲第五十七页，共八十七页。十三肠杆菌科某些(mǒuxiē)菌株的特殊性质第五十八页，共八十七页。1.变形杆菌菌落呈迁延(qiānyán)性生长第五十九页，共八十七页。2.克雷伯菌自身(zìshēn)菌落可拉出丝来第六十页，共八十七页。3.多源聚团菌在M-H平板上产生(chǎnshēng)黄色第六十一页，共八十七页。4.沙雷菌M-H平板上产生铁锈(tiěxiù)红色第六十二页，共八十七页。5.宋内志贺菌无色不透明菌落第六十三页，共八十七页。6.菌落溶血(rónɡxuè)的大肠杆菌第六十四页，共八十七页。7.能产生(chǎnshēng)H2S的菌株变形杆菌爱德华菌伤寒(shānghán)沙门菌费劳地枸橼酸杆菌大肠杆菌第六十五页，共八十七页。8.如是(rúshì)大肠杆菌就应该是赖氨酸阳性枸橼酸阴性靛基质(jīzhì)阳性侧金花醇阴性第六十六页，共八十七页。9.如是(rúshì)二类菌95%枸橼酸试验(shìyàn)阳性靛基质阴性第六十七页，共八十七页。10.超广谱β-内酰胺酶（ESBLS）

1983年世界首例报道，最初在肺炎克雷伯菌中检出。

长期大量使用第三代头孢菌素后产生(chǎnshēng)此酶，

由β-内酰胺酶突变（CTM，SHV）而来。

可通过质粒传导，主要由大肠杆菌和克雷伯菌属产生

第六十八页，共八十七页。ESBL的筛选与确证(quèzhènɡ)试验第六十九页，共八十七页。、第七十页，共八十七页。邻单胞菌属(Plesiomonas)只有(zhǐyǒu)一个菌种，即类志贺邻单胞菌(P.shigelloides)该菌属以前归属于弧菌科，后根据基因特征认为与肠杆菌科细菌有更密切的关系，而归属于肠杆菌科邻单胞菌属分类第七十一页，共八十七页。与气单胞菌属、弧菌(hújūn)属鉴别

菌种氧化酶鸟氨酸脱羧酶纤维二糖TCBS生长O/129敏感试验邻单胞菌+++-+气单胞菌属+----弧菌属++-++邻单胞菌属第七十二页，共八十七页。同志们好第七十三页，共八十七页。十四.大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)的特点1.侵袭力K抗原菌毛2.肠毒素LT引起(yǐnqǐ)腹泻ST第七十四页，共八十七页。大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)的特点引起腹泻(fùxiè)的五类菌:肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)---旅行者腹泻,水样便肠致病性大肠埃希菌(EPEC)---婴儿腹泻,水泻粘液便肠侵袭性型大肠埃希菌(EIEC)--类似菌痢,脓血粘液便肠出血型大肠埃希菌(EHEC)---水源食源性污染,血便,典型的是O157:H7,引起溶血性尿毒综合症肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)---慢性腹泻,水样便,无LT和ST第七十五页，共八十七页。大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)的特点对多种糖产酸产气,吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐(IMVC)++--五种致病性大肠杆菌要用特异性血清凝集加以(jiāyǐ)鉴别第七十六页，共八十七页。十五.沙门(shāmén)菌属的特点所有动物可分离到沙门菌,有2000多血清可引起人类(rénlèi)胃肠炎、败血症、伤寒第七十七页，共八十七页。沙门(shāmén)菌属的特点伤寒菌口小肠淋巴结血液(肝脾骨髓)

胆囊(dǎnnáng)肠腔Ag+Ab)排出体外第七十八页，共八十七页。S-R变异:菌落(jūnluò)光滑---粗糙H-O变异:失去鞭毛位相变异:H抗原双相----一相V-W变异:失去Vi抗原沙门(shāmén