SEREX技术 肿瘤相关抗原的筛选方法课件

SEREX技术

----肿瘤相关抗原的筛选方法------李巧玲2012.02.14目录SEREX的概况SEREX的原理SEREX的基本流程SEREX发现的抗原SEREX的优点与缺点SEREX的改进展望SEREX概况中文名称：重组表达cDNA克隆的血清学分析技术英文名称：serologicalanalysisofrecombinantlyexpressedcDNAclone(SEREX)定义：用肿瘤患者血清从肿瘤细胞cDNA表达文库中筛选和寻找肿瘤抗原基因的方法。SEREX，是1995年由德国血清学家Sahin等建立的从分子水平鉴定肿瘤抗原的方法，开创了血清学检测肿瘤抗原的新时代。SEREX技术基本路线SEREX技术具体方法cDNA表达文库的构建

从新鲜肿瘤标本或肿瘤细胞株抽提总RNA，逆转录合成cDNA后重组到噬菌体λZAP表达载体中，经体外包装后转染大肠杆菌，收集噬菌体即为cDNA表达文库。cDNA文库的免疫筛选

从构建的cDNA文库抽取少量噬菌体，转染大肠杆菌，铺入LB培养皿，孵育过夜，次日将噬菌斑转印至硝酸纤维素膜（NC膜），接着5%脱脂奶粉（NFDM）于室温封闭NC膜1h，后用TBS液冲洗干净，用1：200经预处理的自体血清与NC膜室温孵育5-6h，再用TBS冲洗，将膜同1：3000稀释的碱性磷酸酶（AKP）标记羊抗人IgG抗体孵育1h，最后进行显色反应。挑取阳性克隆，阳性克隆再次扩增进行第2轮、第3轮筛选纯化。SEREX技术具体方法对阳性克隆进行DNA序列分析在Genbank中用BLAST进行对比分析，判定该基因序列是已知还是未知，还可根据人类基因组图谱对阳性cDNA序列进行染色体基因定位。采用Southernblot或RT-PCR检测阳性克隆cDNA在正常组织组织及肿瘤中的表达情况。采用Northernblot检测肿瘤抗原mRNA的表达，确定肿瘤抗原的组织表达谱。采用Westernblot分析各种组织中肿瘤抗原的表达。用已知抗原检测体内相应抗体的浓度，定量分析肿瘤特异性抗体及其临床意义。SEREX鉴定肿瘤抗原的分类通过SEREX方法已经在黑色素瘤、胃癌、卵巢癌、小细胞肺癌、等恶性肿瘤中找到了约1500种抗原，用该方法鉴定出来的抗原按来源和性质可分为以下几类：CT抗原分化抗原突变抗原过表达抗原剪切变异体抗原

应用SEREX发现的抗原结肠癌：Scanlan等在结肠癌中发现17个新基因大肠癌：何敬东等筛选获得16个阳性克隆,代表12个不同抗原基因肺癌：Gure等发现8个抗原，以NY-LU-12抗原最重要胰腺癌：Nakatsura等发现5个新基因高表达白血病：Itoh等在成人T淋巴白血病中发现3个抗原胃癌：王运伟等筛选出14个胃癌肿瘤相关抗原编码基因SEREX技术的缺点SEREX技术必须构建cDNA基因表达文库，并且仅局限于对一个或者很少几个病人血清的筛选，代表性差SEREX技术不能检测肿瘤表达的所有抗原。因为在SEREX方法中，抗原在细菌-噬菌体系统中表达后，不能正确折叠和翻译后修饰，所以不适用于鉴定具有翻译后修饰功能的肿瘤相关抗原对某些在肿瘤发展的不同阶段表达的抗原，若取新鲜组织标本的时间与该抗原表达的阶段不一致也将被漏检SEREX展望SEREX&MDV=？重组cDNA表达文库血清学分析技术在腰椎间盘突出症自身抗原筛选中的应用前景；2010应用SEREX技术筛选和鉴定肺癌相关抗原的研究进展广西医科大学研究生院；2009应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原

北京市结核病胸部肿瘤研究所；2009

SEREX方法在肿瘤相关抗原筛选中的应用河南中医学院基础医学院；2009卵巢上皮性癌相关抗原筛选中SEREX技术的应用

广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科；2008SEREX技术在筛选疾病相关抗原中的应用

河北大学生命科学学院生物芯片研究室；