免疫组化相关

抗原的定义外来非该种属物质：物质(如细菌、

)花粉由于其能导致免疫反应，所以又被称为免疫原外来物质的表面部分应具有一定的大小一般由蛋白或糖类构成抗原的定义抗体不能识别整个抗原与抗原表面的物理和化学结构特异性的反应通过“锁匙”耦连的关系连接到这些结构之上结合的强度取决于抗原和抗体的化学和结构相互作用抗原能够被抗体结合的部位称为抗原表位或抗原决定簇与抗原表位特异性结合的抗体表位或结构称为表位（idiotype）抗原结合位点抗原结合区域的三维构象和化学属性决定了能够与抗体结合的物质。Antigen

bindingFragment

(Fab

)抗体可以是多克隆(识别多种表位)单克隆(仅识别一个表位)“鸡尾酒“(含有多种抗体的混合物，能够识别多个抗原表位)可以来自于不同动物种属，如多克隆–兔、

、大鼠、猪、马等。单克隆–小鼠、大鼠、兔等。可以是整个分子或片段可以通过多种方式提供（浓缩液、工作液、冻干粉）多克隆抗体直接与很多表位（靶结合位点）反应来源于动物产生免疫应答反应收集血液从

中提取多用途S-100Herceptin测试+人抗原注射到动物体内收集动物血液，并获取含抗体的通过产生免疫反应产生抗体多克隆抗体多克隆抗体使用易生产用途广直接针对多个抗原位点，因此敏感度高易于筛选或组合抗体缺点特异性低易产生较高背景批间差异较大–

其稳定性依靠同一个动物目前更倾向于使用单克隆抗体单克隆抗体直接针对单个抗原表位高特异性低灵敏度例如，大部分的CD标志物来源于来源于动物的免疫反应收集B细胞将B细胞与骨髓瘤细胞融合培养增殖细胞从培养液中收集

的抗体人抗原注射入动物体内产生免疫反应生产多克隆抗体单克隆抗体收获脾细胞淋巴细胞增殖免疫反应使激活的细胞增殖单克隆抗体将B细胞与骨髓瘤细胞融合

(杂交瘤)并在培养基中生长:++++单克隆抗体抗表位A抗表位C抗表位B抗表位D分离克隆单独培养每个克隆被分离到独立的试管中单克隆抗体抗表位A抗表位C抗表位B抗表位D单克隆抗体:不同克隆特异性针对不同的表位单克隆抗体单克隆抗体小鼠是生产单克隆抗体最常用的宿主动物价格低廉的宿主成本效应能够与骨髓瘤融合易操作为大多数生物技术所采用用途可以定位特定的抗原表位–特异性更高的精确度增强降低背景培养可批间差异小缺点需要

的技术

操作不如多克隆抗体灵敏低亲和力(结合靶单被的能力弱)一般需要非常的前处理方法或特殊的缓冲液/稀释液来修饰抗体的靶位一般需要更高的浓度LCA–淋巴瘤抗体:CD45显色剂:DAB阳性部位:膜Stains

all

theepitheliallayersStains

theducts

andglandsAnti-Pankeratin–正常对照组织抗体:Pancytokeratin显色剂:DAB阳性部位:细胞质Vimentin–正常对照组织抗体:Vimentin显色剂:DAB阳性部位:细胞质抗黑色素–黑色素瘤抗体:lanosome显色剂:碱性磷酸酶阳性部位:细胞质TumorPigment兔单克隆抗体兔单克隆抗体直接与单个表位反应生产方式为多克隆与单克隆方法的结合：多克隆组分鉴定抗原(蛋白、多肽、cDNA、小分子)靶分子(抗原)免疫兔子测试 滴度单克隆组分选择含有最佳滴度的兔子进行融合*收集能够结合抗原的杂交瘤克隆选择最好的杂交瘤(理想的杂交瘤)对理想的杂交瘤再进行克隆，并从中获得单克隆抗体*第4步中提到的使用炎症肿瘤细胞（类似杂交瘤）融合为专利技术兔单克隆抗体Ventana

c-KIT灵敏度特异性干净的背景专有的克隆(9.7)可靠的供应由Ventana验证由Ventana生产Orig.

polyclonal

-

normalOrig.

polyclonal

-

GISTRabbit

Monoclonal

-GISTRabbit

Monoclonal

-

normalER克隆:SP1显色剂:DAB阳性部位:胞核免疫组化抗体组什么样的治疗方案会有效?Her2

–HerceptinER,

PR

-

Tamoxifen肿瘤生长速度?Ki-67

–

Protein雌激素受体(ER)•雌激素受体?–

雌激素是一种正常的类固醇激素，能够刺激乳腺内皮生长–

激素受 于细胞核中染色的成份?ER

直接与位于细胞核中的正常细胞和成瘤细胞结合为什么重要?受体 的肿瘤复发率高受体阳性的肿瘤可以通过激素治疗，如它

（Tamoxifen）和Aromatase抑制剂边注：Tamoxifen能够与雌激素受体结合，达到组织激素与受体结合的目的。是一种竞争抑制。Aromatase阻止和肝脏雌激素。大多数采用Aromatase治疗的妇女都已过了绝经期。孕激素受体(PR)•孕激素受体?–孕激素是体内正常的类固醇激素，能够加快导管成熟，并切其受体由雌激素介导（没有ER就不会有PR）。染色靶分子?PR直接与正常细胞和瘤细胞核里的

PR蛋白反应为什么重要?受体 的肿瘤复发率高–

受体阳性的肿瘤可以应用激素治疗，如如它

（Tamoxifen）和Aromatase抑制剂。边注：通过使用如它（Tamoxifen）和Aromatase抑制剂抑制雌激素，不会再产生孕激素Ki-67染色目标?增殖细胞：细胞增殖速度过快为什么重要?该抗原在细胞中的高表达意味着肿瘤的侵袭性更强。好的Ki-67

克隆染的是细胞核NucleoliHER-2/neu•HER-2/neu?又称为ErbB2

or

c-erbB-2属于EGFR该蛋白加速癌细胞生长染色靶标?–

癌细胞表面大量增生的HER-2/neu蛋白为什么重要?高水平的HER-2/neu

存活率低HER-2/neu

阳性表明

采用Herceptin™治疗有效。边注：Herceptin是人单克隆抗体，嫩构结合HER-2蛋白并激活免疫系统使细胞的生长停止在低水平，并且下调细胞表面的HER-2，它的工作原理与抗体的染色原理类似。兔多克隆抗体的优点兔识别的抗原及表位与小鼠或大鼠不同源更高的特异性更高的灵敏度广阔的应用范围治疗–药物开发筛选标志表皮结构皮肤及皮肤附属神经结构感觉神经大脑颅神经眼脊髓脊髓动感神经间叶细胞来源的组织骨组织肌肉组织循环组织肾组织内皮或腺上皮组织.食道和咽胰腺甲状腺副甲状腺胸腺正常组织癌神经肿瘤肉瘤淋巴瘤相关肿瘤HMW

cytokeratinS-100VimentinMSADesminLCALMW

cytokeratin抗体阳性