督脉灸对衰老模型大鼠竖脊肌形态学的影响

督脉灸对衰老模型大鼠竖脊肌形态学的影响〔〕:

摘要：目的观察督脉灸对衰老大鼠骨骼肌形态与质量的影响。方法将30只SD大鼠随机分为空白组10只、模型组10只、督脉灸组10只。

空白组与模型组均未予干预；督脉灸组予以督脉灸干预，每天1次，每次20min，共20d；完毕后处死大鼠，剥离双侧竖脊肌并称重，分析骨骼肌SI〔SarcopeniaIndex肌萎缩指数〕值，进展HE染色观察形态学变化。结果模型组的肌肉湿度和SI值较空白组明显的降低〔P

1材料与方法

1.1实验动物及分组

30只SPF级安康雄性SD大鼠，12周龄，体重约〔27030〕g，合格证号：SYXK〔闽〕2022-0001，研究动物由福建中医药大学动物实验中心负责购置及喂养。

1.2试验药物与试剂

D-半乳糖〔上海信裕生物科技〕；苏木素伊红染色液〔碧云天生物技术〕；中性树胶〔福州迈新生物技术公司〕。

1.3主要实验设备及试剂

倒置显微镜〔德国徕卡公司〕；低温高速离心机〔美国Thermo公司〕；金属恒温箱〔上海精宏实验设备〕；石蜡包埋机〔湖北省孝感市亚光医用电子技术〕；切片机德国徕卡公司〕；电子天平〔上海奥美斯仪器公司〕。

2实验方法

2.1造模

采用随机数字表30只SD大鼠随机分为空白组、模型组、督脉灸组各10只。模型组和督脉灸组采取同样的方式造模[5-6]：按照125mg/(kg-d)的剂量，从大鼠颈背部〔C5-C7〕皮下注射D-半乳糖，每天1次，连续6周。空白组大鼠在颈背部同一位置注射等量的生理盐水，作为对照，每天1次，连续6周。

2.2干预

造模后对督脉灸组大鼠行督脉灸干预治疗。详细操作步骤：大鼠俯卧位固定，沿背部脊柱部位剪去宽度约为0.5cm的毛发，将6根艾条用竹签并排串连起来，选择大椎、至阳、命门、腰阳关、腰俞、长强等6个穴位，使艾条最低点间隔大鼠皮肤4~5cm行温和灸，每日1次，每次20min，连续20天。

2.3动物取材与标本制备

干预完毕后，大鼠进展称重，然后用3%戊巴比妥钠溶液〔25mg/kg〕腹腔注射方式处死。将大鼠取俯卧位固定，于大鼠背部后正中线沿着整个脊柱切开皮肤，剔除皮毛、筋膜，暴露别离出脊柱周围肌肉，剥离双侧竖脊肌并称湿重，然后将取下的竖脊肌组织放入提早准备好的标记的离心管中。取竖脊肌颈段组织放入4%多聚甲醛溶液中固定，用于HE染色进展形态学观察。

2.4大鼠的SI〔sarcopeniaindex〕值

取材后，在电子天平上迅速称量肌肉重量并记录，然后通过竖脊肌与最终体重的比值得到SI值。

2.5HE染色观察形态学变化

将取材后剪下的竖脊肌组织放入提早准备好的装有4%多聚甲醛的50mLEP管中，室温固定48h。而后水洗、常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，HE染色，显微镜下利用无偏体视学(unbiasedstereology)技术，每张切片随机取3个不同视野(100x)骨骼肌片。

2.6统计学分析

研究数据采用SPSS18.0进展统计处理，计量数据都采用均值标准差来表示。假设数据均符合正态性和方差齐性那么采用单因素方差分析分析组间差异；假设不满足正态性及方差齐性那么用非参数检验。P

3.2竖脊肌的肌肉湿重及SI值比拟见表2

3.3肌肉HE染色的形态学观察

空白组大鼠的肌纤维细胞排列整齐，呈多边形，大小根本一致，细胞核大局部分布在肌细胞边缘，极少位于细胞的中心部位；模型组大鼠肌纤维细胞表现出不同程度的萎缩或者退行性改变，肌细胞呈现圆形化，大小不等，排列紊乱不齐，各个细胞间隙增大，细胞直径的差异增大；督脉灸组大鼠的骨骼肌在形态学上萎缩退变程度较模型组轻，表现为：肌细胞呈现圆形化，大小不等，排列趋于整齐，细胞间隙相对减小，细胞直径差异相对减小。如图1所示。结果提示：6周D-Gal皮下注射复制亚急性骨骼肌衰老模型，可以造成大鼠骨骼肌细胞出现萎缩和退行性改变等衰老的现象，督脉灸可以从一定程度上减轻萎缩和退行性改变的程度。

4讨论

骨骼肌衰老伴随着衰老的发生，是人体最先衰老的组织之一，表现为肌肉质量减少和肌力减退【1】。大量研究[12-14]说明，随着年龄增大机体衰老，衰老性肌萎缩的流行率及发病率逐步增高。骨骼肌具备一定的质量和力量是脊柱发挥正常生理功能的根底。衰老性肌肉萎缩不仅可以引起质量减少，也会不可防止的造成椎旁肌肌肉功能下降，尤其是竖脊肌的功能降低可以引起一系列的脊柱退行性病变，表现为腰背部沉重僵硬酸痛，老年性驼背，身高变矮等【2】。据研究统计，80%的成年人在一生之中会出现腰背部疼痛，多与脊柱退行性病有关【3】，发病率仅次于普通感冒【4】。腰背痛的致病原因有很多，在很大程度上和竖脊肌老化萎缩及其导致的收缩功能下降有着互为因果的关系[18]。竖脊肌等脊椎旁肌群衰退降低了骨骼肌质量及力量，影响了脊柱稳定性及活动范围，导致机体维持平衡的才能降低，姿势控制才能下降，使机体易于跌倒，闪挫腰，导致骨折，脊柱佝偻变形等脊柱退行性疾患的发生。因此，延缓衰老性肌肉萎缩对改善脊柱疾病，进步脊柱功能有很大作用，对进步老年人的生活质量和安康程度，有着重要的社会学意义。

?黄帝内经?提到"灸那么强食产肉";。督脉循行在背部正中脊柱中央，"循脊";，督脉为阳脉之纲，"总督诸阳";，为阳脉之海，可调节全身阳气。有医家结合历代医家的经典论著，认为脊柱退行性病变的根本为督脉阳气虚，"通督强脊，扶阳固本";，可以改善脊柱退行性病变。因此本研究的中医理论根底为督脉灸可以通督强脊，强壮保健，扶阳固本，延缓衰老性肌肉萎缩，改善脊柱退行性病变。在临床上督脉灸也是常用疗法，对加强肌肉功能，改善脊柱病变有显著效果。临床上采用督脉灸治疗脊柱退行性病变的疗效已经得到肯定。章慎磊等[19]对76例慢性非特异性腰痛患者进展分析，中药内服加熏蒸加督灸治疗慢性非特异性腰痛，不仅可以进步治疗效果，改善腰部部分和整体肌肉群的恢复，还能有利于患者生活质量的进步。林海波等[20]将脾肾阳虚型绝经后PMOP腰背痛患者共70例随机分为对照组和治疗组两组，对照组采用常规钙剂进展治疗，治疗组那么配合督灸疗法。结果发现督灸能减轻患者腰背痛的程度，并能由此改善患者腰部肌肉功能障碍，有利于老年人生活质量的进步。

衰老过程中随着骨骼肌质量发生下降，却并没有引起体重的明显下降，这是由于在机体的衰老进程中，伴随着骨骼肌质量明显下降的同时，脂肪组织也会逐渐增加[21]。这与本实验的研究结果相一致，各组大鼠的体重在实验开始前无明显差异，实验完毕后各组称量体重发现最终体重无明显差异，各组大鼠的最终体重都较原始体重有所增加。大量研究通过CT扫描、超声影像等发现[22-24]，老年人的骨骼肌横截面积与年轻人相比明显变小，骨骼肌密度明显减小，同时机体非肌肉组织，如脂肪和其它组织等的含量要明显高于年轻人。Takahashi等[25]为了研究由于衰老导致的肌肉质量的变化，采用核磁共振方法扫描测试年龄在20岁至79岁之间的女性腰部竖脊肌的横断面积，发现女性腰部竖脊肌在20岁时最大，随着年龄增大，会呈现减小趋势。根据Baumgartner等人提出的根本断定标准，可以通过计算靶骨骼肌的湿重和体重的比值，来求得SarcopeniaIndex，即SI值，用它作为衰老性肌萎缩的间接断定标准[26]。结合本研究的实验结果发现，与空白组相比，模型组大鼠的SI值出现了明显的降低，说明衰老造模后模型组大鼠出现了骨骼肌衰老的改变。与模型组大鼠相比，督脉灸干预大鼠的SI值出现了升高，说明督脉灸可以改善大鼠的骨骼肌衰老，延缓大鼠衰老性肌萎缩。

本实验采用HE染色法，可以很直观地观察到空白组、模型组、督脉灸干预组三组大鼠骨骼肌组织的形态学变化，以此来判断造模后骨骼肌的形态学以及督脉灸干预后大鼠骨骼肌的形态学变化。通过HE染色，我们观察到空白组大鼠为正常骨骼肌组织形态学特征，而模型组与督脉灸干预组都有明显的萎缩退变，其中模型组的程度较督脉灸干预组更为严重。在显微镜下可观察到空白组大鼠骨骼肌表现为肌纤维集合成肌束，每一个肌纤维排列整齐，略呈现多角形，大小根本一致，细胞核大多位于肌纤维细胞边缘，极少位于细胞体的中心部。说明空白组大鼠骨骼肌组织为大致正常。模型组大鼠骨骼肌形态学表现为肌细胞呈现圆形化，大小不等，排列紊乱不齐，细胞间隙增大，细胞直径的差异增大。说明模型组大鼠经过衰老造模后，衰老骨骼肌有一定程度的萎缩退变。督脉灸组大鼠的骨骼肌与模型组相比在形态学上萎缩退变程度相对较轻表现为：肌细胞呈现圆形化，大小不等，排列趋于整齐，细胞间隙相对减小，细胞直径差异相对减小。说明督脉灸组大鼠经督脉灸干预处理后，骨骼肌形态学表现较模型组有所改善，说明督脉灸干预对骨骼肌衰老有改善作用。

综上所述，督脉灸可以改善衰老大鼠骨骼肌形态，增加骨骼肌质量，延缓骨骼肌衰老，其确切的作用机制，需要进一步研究。

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