作物栽培生理实验指导书

PAGEPAGE12贵州大学高等教育自学考试《作物栽培生理》实验指导书课程代码：02676(农学本科专业)继续教育学院2015前言故要求同学们认真对待.通过实验,增强学生独立工作、解决问题的能力。目录44441······································································4····························································8991011一、实验的性质与目的技能及动手能力的实践过程。通过该以实验教学作为理论联做到理论联系实际，提高毕业生的素质，更好地服务于我国的农业生产和发展，为今后学习和工作奠定良好基础。二、实验的时间分配序实习教学工作内容序实习教学工作内容起止时间教学工作目标、要求号1实验准备工作准备好有关实验的一切材料、工具。2学生分组在实验室实验完成具体安排的有关实验任务3实习成绩评定结束评定并上交成绩。合计6学时四、实验内容安排与要求实验一植物组织水势的测定（长度法和小液流法）一、实验目的1、了解水势的概念及其对植物吸收外界水分的作用。2、熟练掌握长度法和小液流法测定植物组织水势的原理和方法。二、实验内容液发生浓度的变化，进而判断出等渗溶液，计算出水势。三、实验原理、方法和手段从而得知植物组织水势。四、实验组织形式在教师指导下，以学生为主的开放性运行模式五、实验条件1、仪器和试剂试管、毛细滴管、刀片、移液管、镊子、米尺、甲烯蓝、温度计、1mol/L蔗糖溶液2、参考文献（第三版，高等教育出版社。六、实验步骤（一）长度法11mol/L的蔗糖溶液为母液分别在大试管中配制0.50.40.30.20.1M蔗糖液15ml，混匀，编号（实验组。2、取5只中试管，编号，从对应的大试管中各取5ml溶液为对照组。123、每只试管取准确度量的4～5cm0.09cm24为L，置于大试管中，放置30分钟后（摇动数次，取出各管内的土豆条测定总长度，记L。124、比较实验前后土豆条总长度的变化，判断与确定等渗浓度。（二）小液流法1、向每一只实验组大试管中加入甲烯蓝粉末少许，振荡，使溶液变蓝。2、用毛细滴管从实验组各大试管中吸入少许着色液，然后伸入到对应的对照组试管中相等的外界溶液的浓度。s3、计算植物组织水势。ψ＝－RtiCs七、思考题1、试比较两种方法测定的结果是否相同。2、为什么本实验测定的是植物组织的水势而不是植物细胞的渗透势？实验二种子发芽率的快速测定一、实验目的通过本实验让学生掌握基本的测定种子发芽率的方法。二、实验内容种子发芽率是指在最适宜的条件下，在规定的天数内，发芽的种子占供试种子总数的百购买种子，则更是无法知道。快速测定法将在很短时间内获得结果。三、组织运行形式在教师指导下，以学生为主的开放性运行模式。I：氯化三苯四氮唑法（TTC法）一、实验原理凡有生命活力的细胞均具有呼吸作用从而都有氧化还原反映，而死细胞则无此反应。TTC可渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶或NADPH）上的氢还原，此时无色的TTC便转变为红色的三苯基甲TT，并吸附在活细胞的表面，根据活细胞着色的深浅可定性的判断种子活力的有无与大小二、仪器和试剂恒温箱、烧杯、培养皿、镊子、刀片、天平0.5％的TTC0.5gTTC95100ml，棕色瓶中保存。若溶液变为红色，表示已被氧化不能再用。三、实验步骤1、浸种：将待测的种子在30℃温水中浸种数小时，以增强种胚的呼吸强度，使显色迅速。2、显色：取吸涨的种子100粒，用刀片沿着胚的中心线纵切为两半，将一半置于1只培养皿中，加入适量的0.5％的TTC溶液（以浸没种子为度）后，置于30℃恒温箱内。0.5～1小时后，观察现象，判断种子活力的有无与大小。将另一半种子在沸水中煮5min杀死胚，或用微波炉烤死胚，作同样染色，保温处理，作为对照。观察并与活种子比较看现象有何不同。3、计算活种子的百分率。II、溴麝香草酚蓝法（BTB法）一、实验原理酸，碳酸解离成H＋和BTB来测定酸BTB的变色范围为pH6.0～7.6，酸性成黄色，碱性成蓝色，中间经过绿色（色点为pH7.。颜色变化越明显则表明种子活力越强。死细胞没有呼吸作用，也没有BTB的颜色变化。二、仪器和试剂恒温箱、烧杯、培养皿、镊子、天平、漏斗、滤纸、琼脂％的BTB溶液：称取BTB0.1g，溶解于煮沸过后的100ml自来水中，然后用滤纸滤去残渣。溶液若为黄色，可滴加数滴稀氨水或稀NaOH溶液，使之变为蓝色或蓝绿色，棕色瓶中保存。1％BTB0.1％BTB溶液100ml1g层，冷却后备用。三、实验步骤1、浸种：同上述TTC法、显色：吸取吸张的种子1001cm左右。然后将培养皿置于恒温培养箱中30～352h后，观察试验现3、记数种胚附近出现的黄色晕圈的活种子数，计算活种子的百分率。III、红墨水染色法一、实验原理活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，红墨水不能进入细胞；而死的种胚细胞原生质膜失去这种能力，红墨水进入死细胞并染色。二、仪器试剂培养皿、镊子、刀片5％红墨水：以市购红墨水为原液，用自来水配置成5％的红墨水溶液。三、实验步骤1、浸种：同上述TTC法。2、显色：取吸胀的种子1001只培养皿中，加入适量的5％红墨水（以浸没种子为度）10～15min后倒去红墨水，烤死的种子作同样的染色处理。进行对比观察。3、记数种胚不着色或着色浅的活种子数，计算活种子的百分率。四、思考题1、试比较用三种方法测定的种子的发芽率是否一致？并与种子的实际萌发率是否一致？如若有偏差，理论上应为偏高还是偏低？为什么？2、BTB法测定种子发芽率，配置BTB么？用蒸馏水可否配置？3BTB晕圈，为什么？实验三吲哚乙酸氧化酶活性的测定一、实验目的通过本实验让学生了解基本的酶液提取方法，掌握吲哚乙酸氧化酶反应的基本原理。二、实验内容氧化酶通过调节体内吲哚乙酸的水平，间接对植物体产生影响。1、掌握酶的基本提取方法：酶从植物体内提取后很快容易失活，因而需要一定的外界因而需要着重注意，如：冰浴研磨，冷冻离心，离心机的使用和调控等等。2性很低；而含量低的地方，酶活性高。本实验材料运用的是豆芽3、掌握吲哚乙酸氧化酶反应的基本条件（1M22、反应33失去活性，其产物多种多样，因而不能以产物的增加表示。4、新进UV9100分光光度计的使用方法。三、实验原理、方法和手段乙酸减少的速度表示。吲哚乙酸在无机酸存在条件下能与FeCl3

反应生成红色的螯合物，可用分光光度法测定其含量来反应吲哚乙酸的含量。四、实验组织形式在教师指导下，以学生为主的开放性运行模式。五、实验条件1、仪器和试剂分光光度计、离心机、恒温水浴锅、天平、研钵、试管、移液管、烧杯0.02M的磷酸缓冲液，pH6.1。1mM2，4-二氯酚：16.3mg定容至100ml。1mMMnCl：19.8mgMnCl.4HO定容至100ml。2 2 21mM吲哚乙酸：17.5mg用少量乙醇溶解，定容至100ml。吲哚乙酸B试剂：0.5M的FeCl3

溶液：1.35g定容至10ml35%过氯酸：250ml过氯酸原液（70％）到500ml，棕色瓶保存。使用前将10mlFeCl3

溶液和500ml35%过氯酸混合，最好现用现配。2、参考文献（第三版，高等教育出版社。六、实验步骤12g，置研钵中，加入5ml磷酸缓冲液，冰浴中研磨，再加15ml的缓冲液混匀后，离心管中离心所得上清液即为粗酶液。2、取试管两只，一只为实验组，加入1mlMnCl，1ml二氯酚，2ml吲哚乙酸，4ml酶22ml磷酸缓冲液（M2和酚，一般是单元酚；另一只为对照组，除了酶液换成磷酸缓冲液外，其余都相同。两只试管一起2530min。31ml2mlB3030min。观察颜色变化，分光光度计测OD值。530420ppmIAA20151050ppm。1ml，按照步骤OD值。以OD5、以被氧化的吲哚乙酸的量表示吲哚乙酸氧化酶活性。七、思考题1、本实验为何取材时除去子叶和胚根，留取下胚轴?2NR活性时我们以产物NO－2的增加来表示酶的活性呢?五、注意事项1、严格按照实验的要求，服从实验指导老师的安排，认真完成各项实验任务。2、严格考勤制度，生病或有事外出需经实验指导人员批准后方能有效，否则按缺旷处理。组长负责考勤，进行登记，如未参加实验要注明原因。3、每人必须作实验日记，记载当日的实验内容及其他有关事项，实验结束后交实验指导老师。4、同学间要团结互助，互相体谅，讲文明礼貌。5、实验经费要节约使用，购置物品限于实验所必须，并要有国家正式发票方能报销。购置的实验用品凡属非消耗品，实验结束后要交回。6、实验结束时写出实验总结交指导实验人员，再根据实验期间的表现由实验负责人作出实验鉴定。7、实验组长是实验具体负责人，对该组实验要全面负责。在指导实验人员的安排下认心协力共同完成实验任务。六、实验方式与基本要求本课程以实验为主，为单独设课，所以开课后，任课教师需向学生讲清验守则及实验室安全制度等。验室进行实验。21引导学生