分子生物学简答题(同名5958)

分子生物学简答题(同名5958)1、如何理解结构决定功能？胸腺嘧啶（，thymin，5尿嘌呤（，Urncil，2,4二氧嘧啶；尿嘌呤（，Urncil，2,4二氧嘧啶；胞嘧啶（，cytosin，2氧-4氨基嘧啶；TU5A发生互补配对，RNADNA的碱基。TU的甲基化，经过进化选择，就留下来了，因为甲基化后确实会稳定一些，DNA负责遗传信息的传递，所RNAC源。CU4GA配对。1、Eachallelehasadifferentphenotype,why(illustratebyexample).如此重复，得到一个相邻片段，等于在染色体上移了一步，称为染色体步移。染色体步移技术是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效地获取与已知序列相邻的未知序列，即侧翼序列。主要应用有：步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列；T-DNA或转座子的插入位点；用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列；、YACBAC的片段搭接。4、Howtoclonegeneforgenome?DNADNADNA的基因文库，通常是用λ噬菌体或柯斯质粒作载体构建的。应用λ噬菌体载体构建基因组文库：第一步是从给体生物制备基因组DNADNA片段同适当的λ最后从转化子克隆群体中挑选出含有目的基因的克隆。应用柯斯质粒载体构建基因组文库：用核酸内切限制酶局部消化基因组DNA使真核基因组DNA克隆的柯斯质粒载体上，然后分离收集分子量为35-45kbDNA包装之后，感染大肠杆菌寄主细胞。在细胞内柯斯质粒载体按质粒特性进行复制扩增，形成基因组文库。5、利用cDNA克隆某基因（举例）cDNA通过一系列的酶促作用转变cDNA群体，并插入到适当的载体分子上，然后再转化到大肠杆菌寄主菌株的细胞内，如此便构成了包含着所有基因编码序列的cDNA要步骤：RNAmRNA的分部；dTcDNAcDNAcDNA；mRNA-DNAcDNA分子；将合成的双链cDNA重组到质粒载体或噬菌体载体上，导入大肠杆菌寄cDNA分子加尾或是将人工cDNA分子的两端，然后再同经适当处理而具有相应末cDNA文库。poly(A)mRNAoligo(dT)成出双链cDNADNA片段。6、蛋白质组学研究中所用的方法及原理①蛋白质组学研究中最常用的方法是二维电泳（2DE。第一维过程中，蛋SDSCoomassieBlue色，让蛋白质显现出来。通过肽段与蛋白质的对应关系，最终推断样品中包含的蛋白质。③随着蛋白质组学的发展，定量蛋白质组学（比较蛋白质组学）也获得了广泛研究。定量蛋白质组学的主要研究内容可以说是蛋白质定量技术，而这种技术是生物标志物发现的重要途径。它不仅检测基因表达的全部蛋白质，而且Label-free理是利用DeCyderMSTM软件对液相色谱串联质谱数据由谱峰形式转化为直观的类似双向凝胶的图谱，谱图上每一个点代表一个肽段，而不是蛋白质，再比较的不同样本上相应肽段的强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。7、RFLP可以作为一种遗传标记RFLP，即DNA限制片段长度多态性，它是指应用特定的核酸内切限制酶切割有关的DNA分子，所产生出来的DNA片段在长度上的简单变化。DNA整的纯合子个体（DNA序列）DNA在同样的位点被准确地切割。DNADNARFLP。RFLPDNA序列上的特定变化（突变）够像其他任何遗传标记一样进行定位，成为一种十分有用的分子标记。RFLP可以作为一种遗传标记，基本上一个RFLPSNPSNP位于一个酶切位点中，它能够与任何其他遗传标记一样，也可以同样用来作为遗传标记。只是它检测的不是一些特征性表型，而是通过检测限制图谱来直接揭示基因型。8、限制性位点能否体现孟德尔遗传的特性德尔定律。祖孙三代的限制性多态家谱证明了限制位点多态性的遗传规律符合孟德尔定律，从图谱中可以看到在所有可能的配对重组中，某个限制标记的4条等位基因都能找到，并且它们都可以在每一代中独立地分离，表明了DNA分子标记片段的孟德尔遗传定律。9、目前遗传研究中所用的4类遗传标记形态学标记（Morphologicalmarkers）细胞学标记（Cytologicalmarkers）生化标记（Biochemicalmarkers）分子标记（Molecularmarkers）10、人类基因组数目、蛋白质组的成员，为什么后者远多于前者？25%白质组包括组织或细胞中所有的蛋白质，人类蛋白质组成员数大大多于人类基60%RNA有剪接的作用，在后转译修饰时蛋白质特殊部位会有磷酸化或糖基化，使得人类蛋白质组增加的程度大于基因组增加的程度，所以基因的总数比潜在的蛋白质数目少。11、人类线粒体基因组与酿酒酵母线粒体基因组间的异同DNAtRNA、rRNA和蛋白质的基因。DNADNA含有较长的内含子。12、Toillustratethedevelopmentalcontrolviaglobin.会执行相同的功能。在成体细胞中，珠蛋白四聚体有两条相同的α链和β胞包含的每个珠蛋白四聚体包含两条相同的类α和类β成体中的肽链相关，并在稍后被其取代。13、动物可以从植物中得到营养的原因？Rubisco1,5了光合作用以外，植物在自然界中的另一大作用就是碳的固定化。从二氧化碳的形态转变成有机物，比如说葡萄糖等形态。RubiscoCO2转变为磷酸甘油酸的形式，然后在被其他酶变成蔗糖等有机物，供动物使用。因此动物可以通过食用植物而得到有机物。14、Unequalcrossing-overcanresultinwhatresults?不等交换可以改变基因数目，使基因簇发生重排：如果一条染色体上的基12间的重组就产生了一条有单一基因拷贝的染色体（重组）和一条有三份基因拷贝的染色体（父本、母本、重组。不等交换还会有质的改变：如果交换发生在基因内部而不是基因间，其结果将决定于发生交换的基因序列完全相同还是只是相近。如果非等位基因的拷12相近时，也可以发生不等交换，这时形成的两条重组基因与任一条亲本基因都不相同。15、DNA fingerprinting.DNADNADNA指纹分析技术，即使用限制性内切酶切割每个个体的、含有短串联重的遗传关系。因为这些片段对于每个个体都是唯一的，任何两个个体之间所存在的这样的特殊片段可以用来定义它们之间的遗传关系，如父子之间的遗传关系。16、The“adaper”istransferRNA,why?mRNA中的每个核苷酸三联体代表一个氨基酸。由于核苷酸三联体与氨基酸的结构不同其中的“适配器”是tRNA,它有两个关键性质：1.它代表唯一的氨基酸，并与它包含了一个三核苷酸序列，即反密码子，它与代表氨基酸的密tRNA能够通过碱基互补配对原则识别密码子。17、比较三种RNA的结构及功能种类种类结构功能mRNAmRNA53DNA遗端的尾结构；原核生物mRNA子上游存在SD序列；分子量远大于tRNA。 白质的模板二级结构三叶草结构，三级结构倒L型结构；三叶转运氨基tRNA 草带有4个恒定臂在更长的tRNA中另有一个侧酸，识别臂；由74-95个碱基组成。 码子具有广泛的二级结构并且和蛋白质结合形成核糖 核糖体的组rRNA 体；有大小两种亚基：真核60S亚基，原核30S小亚基和50S大亚基）；相对分子质量最大。 合成18、Howtoproducethecapandthepoly(A)foreukaryoticmRNA?①mRNA5'5'-5'G过程是由鸟苷转移酶催化完成的。随后，1-31-3类型。-7-7位加上一个甲基，仅仅拥有这样单一甲基的帽0。下一步是在第二位碱基(在没有任何修饰之前的转录物真正的第一个起始碱基)2′-O2′-O-甲基-带有上述两个甲基的称为帽子1mRNA2′-O2类型，该反应的底物是已经带有两个甲基的1mRNA2mRNA210%-15%。②mRNA3poly(A)尾部，有这种特征的mRNApoly(A)+。poly(A)DNA编码，它是在转录之后被加到RNApoly(A)poly(A)mRNA200RNAmRNApoly(A)poly(A)结合蛋白相结合，许多真核生物内部有相关类型的蛋白质。1Whasitsfunctionofpoly(A)andhowtouseitinexperiment？大多数RNA群体缺少poly(Apoly(A的mRNA占RNAmRNApoly(A)。poly（A）被特异的蛋白质PABP结合，有助于稳定mRNA，防止降解，作为核糖体的识别信号，使mRNA分子有效翻译。poly(A)的存在有重要的应用价值，它可用于分离mRNAmRNA的poly(A)区域可以与oligo(dT)oligo(dT)将poly(A)+mRNA从其他RNA中分离出来。20、5-FU抗癌机理5-FU5-5位上的氢被氟取代的衍生物。5-FU5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸，而抑制脱氧胸苷酸合成酶，阻止脱氧尿苷酸甲基化转变为脱氧胸苷酸，从而影响DNA外，5-FU5-RNA中干扰蛋白质的合成，故对其它各期细胞也有作用。21、Tocomparetheprocessofproteinsynthesisforprokaryoticandeukaryotic.真核生物蛋白质合成与原核生物相比，密码相同，各种组分相似，亦有核糖体，tRNA及各种蛋白质因子。总的合成途径也相似，有起始、延伸及终止阶段，但也有不同之处。原核生物边转录边翻译，而真核生物的翻译与转录是分开的。真核mRNAmRNA译；真核生物蛋白质合成机构比原核生物复杂，起始步骤涉及起始因子众tRNA物不同；起始复合物形成所需的起始因子不同；终止释放因子不同。真核生物蛋白质合成的调控复杂；真核生物与原核生物的蛋白质合成可为不同的抑制剂所抑制。22、WhatisTu-Tscycle?EF-Tu-GTP将氨肽-tRNAEF-Tu-GDPEF-TsGTPGDPGTP，释放GDP。唯一不EF-Tu-GTPfMet-tRNAf，两者无法结合可保证后者不能AUGGUG密码子。23、Howtodemonstratethatinhibitingonestepinproteinsynthesisblocksthenextstepforkirromycin?(黄色霉素对第一步的阻断会使下一步合成被阻断)黄色霉素是抑制EF-Tu起作用的抗生素，当EF-Tu被黄色霉素结合后，它仍可使氨酰-tRNAAEF-Tu*GDP复合体不能从核糖体中释放。该复合体的持续存在会阻止肽酰-tRNA与氨酸-tRNAmRNA上，使蛋白质合成终止。黄色霉素的这种效果说明抑制蛋白质合成的其中一步就会阻碍后续步骤。EF-Tu的持续存在阻止了氨酰-tRNA50SA所以，EF-Tu*GDP的释放时形成肽键所必需的。在蛋白质合成的其它阶段可以看到同样的规律：前一步反应必须完成后才能发生后续反应。24Howtorevealthenatureofthetransferreactionviatheantibioticpuromycin?(嘌呤霉素是如何抑制蛋白质的合成)该转移反应的本质是通过抗生素嘌呤霉素抑制蛋白质合成而揭示出来。嘌tRNANOtRNA结合。该抗生素可以同氨酰-tRNA一样进入核糖体，然后肽酰-tRNA的肽键将被转移到嘌呤霉素的氨基基因上。25、Howtoform48Scomplex?一些起始因子与核糖体小亚基结合形成 43S复合体（=40S亚基+因子+tRN，当43S复合体与mRNA结合，它搜寻起始密码子，并可以48S体的形式被分离到。48S复合体在起始密码（AUG）处形成。26、Howtoinhibittheprocessoftheproteinsynthesisatparticularstagesbyusingantibiotics?（制其合成？）蛋白质及rRNA组成的复合体提供了一些影响GTP酶活性的抗生素结合位GTP用于单一的核糖体蛋白将蛋白质合成反应抑制在某个特定阶段。例如链霉素能S12蛋白结合从而抑制蛋白质的合成。27、Howtoprocessthe3endandthethe5endofatRNA?tRNA3端通过切割、修整，再加上CCA而成。过程为：核酸内切酶首先引发前体下游的裂解反应，几个核酸外切酶随之沿35方向降解前体，修3CCAtRNA。28、InosinecanpairwithanyofU,C,andA，why?A、C、UG(I)通常出现在反密码子的第一位。在U、CA中的任何一种碱基配对。29Toillustratemissensesuppressorscompletedwith明错义抑制子具有野生型功能）错义抑制子指编码的tRNA已经发生突变以便识别不同密码子，通过在突变密码子处插入氨基酸，这个tRNA又会抑制最初的突变效应。即改变密码子所对应的氨酰-tRNA则是错义抑制子。错义抑制发生在tRNA反义密码子突变后，他识别错误的密码子，因为野生型tRNA和抑制子tRNA都可以识别AGA，所以抑制仅仅是部分的抑制。30、How to prevent random aggregation of proteins chaperones?(分子伴侣如何阻止蛋白质聚集)蛋白质进行折叠。31、Whytheyarenamed“hsp”?这些蛋白质之所以称为热激蛋白（heatshockprotein,hsp)温度升高时，它们会大量产生，以尽量减少热变性对蛋白质的损害。32Thesignalsequenceprovideswhatbetweentheribosomesandmembrane.信号序列提供给核糖体能结合在膜上的必要联系。游离的核糖体与膜结合的结合。33、Explainthenuclearporesareusedforbothimportandexportofmaterial.细胞核与细胞质间的运输是双向进行的。由于所有的蛋白质都在细胞质中合成，所以细胞核内需要的蛋白质必须从细胞质中转运；因为所有的RNA都在细胞核内合成，所以细胞质所有的RNA质的输入及输出。34、Thefunctionandmechanismofubiquitin?泛素是一种存在于大多数真核细胞中的小蛋白，是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链，存在于所有真核细胞和人体内的细胞中，因其广泛分布于各类细胞而得名。上除去。35Whatisitsmeaningforresearchubiquitin?质代谢对于生命的正常功能至关重要。的、被严密调控的过程，此过程在细胞疾病和健康状态、生存和死亡的一系列基本过程中扮演重要角色，蛋白质降解异常与许多疾病的发生密切相关。制如能被阐明将对解释多种疾病的发生机制和遗传信息的调控表达有重要意义。36、Howdoesrhofactorwork?ρ6个相同亚基275kDa。亚基具有一个NRNAATP水解域。ρRNA终止子上游一个伸展的单链区；ρRNAATPRNA上滑动的能量，RNA聚合酶在终止子处停止，ρRNA-DNA链区域；终止：ρ因子发挥解旋酶活性，使双链体结构解开。37、Toillustratecontrolcircuitscanbedesignedtoallowpositiveornegativecontrolofinductionorrepression(with、lactosearabinoseetc.，CRPproteinhastobeused).当阻遏蛋白从操纵基因上脱离后，激活蛋白与启动子结合以及和RNA聚合酶的相互作用，帮助结构基因的转录起始，促进相应蛋白的合成。负调控是指阻遏蛋白与操纵基因的结合，阻止了RNA聚合酶对操纵子结构基因的转录。RNA启动子处起始转录。会影响其与操纵基因的亲和力，这些小分子化合物称为效应物。阻遏物：即阻遏蛋白，是一种变构蛋白。下面以乳糖操纵子的正负调控为例进行阐述：（1）大肠杆菌乳糖操纵子负向调控：大肠杆菌乳糖操纵子Lac操纵子)上依次排列着启动子(P)、操纵基因(O)lacZlacYlacAlacZ编码分解乳糖的β-编码吸收乳糖的半乳糖苷透性酶，lacA编码半乳糖苷乙酰基转移酶。操纵基因lacOlacI所编码的阻遏蛋白的结合部位。有乳糖时，阻遏蛋白与之结合，结果使阻遏蛋白的构象发生改变而不能结lacO无乳糖时，阻遏蛋白就结合在lacO上，阻止结合在启动子上的RNA聚合酶向前移动，转录不能进行下去。IRNAPIβ-半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。生成的半乳糖作为诱导物，可以形成阻遏蛋白-诱导物复合物。诱导物的结合改变了阻遏蛋白的构象，降低了它与操纵基因的亲和力。当阻遏蛋白不与操纵基因结合时，有利于RNA聚合酶RNADNA模板移动，最终促成结构基因的转录。（2）大肠杆菌乳糖操纵子正向调控：ATP不能转化为cAMPCR（cAMP受体蛋白CRP-cAMP复合体（为正调控因子，可增强转录。CRP-cAMPlacODNADNARNARNA聚合酶与启动子结合，从而增强了转录。当乳糖作为能源时，激活了腺苷酸环化酶活性，导致cAMP大量存在，促进了CRP-cAMP复合体形成，有利于乳糖结构基因的转录，进而产生分解乳糖的酶。当葡萄糖为能源时，抑制了CRP-cAMP复合体形成，使得乳糖结构基因不能被转录。38、TheE.colitryptophanoperoniscontrolledbyattenuation，describeitsmechanismplease.大肠杆菌色氨酸衰减子调节机制为：色氨酸的前导肽存在两种碱基配对结构，即1区和2区互补，3区和4区互补，2区同时可以和3区互补。当1区和区可以与4夹结构就无法形成。mRNA的前导区开12UGA234区配RNA聚合酶就会在衰减子处停止。11区就被核2234区还未被转录之前进行配对，于是4区只能保持单链状态，由于无法形成终止子发夹结构，RNA聚合酶就能继续转录越过衰减子。39、AntisenseRNAoffersapowerfulapproachforturningoffgenesatwill，giveanexampleplease.反义基因是相对于启动子的方向，将基因反向从而转录出“反义”链，编码反义RNA。反义RNA事实上是一种合成的调节因子RNA，无论是在原核生物细胞还是真核生物细胞中，合成的反义RNA都能抑制靶RNA的表达。反义RNA有与另外一种RNA(RNA是反义RNA的靶标)RNA引入真核生物细胞时，可以阻断其靶基因的表达。RNARNARNA的产物量来控制靶基因的开和关，使得我们进而可以研究靶基因表达时的某一调控基因的重要性。例如反义胸苷激酶可以抑制内源胸苷激酶的合成。40、What’sRNAi?Giveanexampleplease.RNAi：RNA干扰，双链RNA性。利用与双链RNAmRNA降解。RNAsilencing：RNA沉默，描述双链RNA在植物中的双链RNA系统抑制相关基因的表达。RNAiRNAisiRNAsiRNA达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以已经成为探索基因功能的重要研究手段。41、Trytoexplainphagelyticdevelopmentproceedsbyaregulatorycascade.被开启（或被关闭。在噬菌体感染细菌后，通过宿主RNA了用于噬菌体中期基因表达必需的调节因子，这些中期基因又包括了用于晚期基因转录的调节因子。这样就形成了一个级联反应，使得噬菌体感染过程中的各组基因有序表达。42ThecⅡandcⅢgenesareneededtoestablish为cⅢ是建立溶源态所必须的？）RNAPRECCCCⅡ蛋白不被降解。PREcro的转录。43、Crobindstothesameoperatorsasrepressorbutwithdifferentaffinities，whichresultinwhatresult.Cro

R3 R2Cro蛋白分子量很小该二聚体与