石蜡切片(三)、染色(四)课件

实验三石蜡切片法(三)

——切片、贴片

一、实验原理

切片就是把包埋好的材料块用切片机切成所需要的厚度的切片带。贴片是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色。二、实验用品

(一)器材切片机，切片刀，磨刀机或磨刀石，单面刀片，展片台，酒精灯，温度计，蜡铲，台木，毛笔，蜡带盘，载玻片，镊子。(二)试剂粘片剂，氯仿。(三)材料已包埋好的蜡块。三、实验程序

(一)切片(二)贴片附：常用的粘片剂1．蛋白甘油亦称为梅氏蛋白(Mayer'salbumen)

蛋白50mL

甘油50mL

水杨酸钠(防腐剂)lg2．郝普特氏明胶粘片剂(Haupt'sgelatinefixative)明胶lg蒸馏水100ml石炭酸2g甘油15mL实验四石蜡切片法(四)

——染色、封藏

一、实验原理1．染色的一般原理细胞和组织的不同结构之所以能被染成各种不同颜色，是由于染料对它们所起的物理或化学的综合作用。(1)物理作用：渗透、吸收、吸附(2)化学作用2．封藏的原理封藏是使已经透明的材料，保存在适合折光率的封藏剂中(如封藏剂加拿大树胶的折光率为1.52，它与玻璃的折光率1.51很接近)，使材料能在显微镜下清晰的显示出来，并能长期保存。下面以海登汉铁矾苏木精染色法为例介绍如下。

(1)将用二甲苯脱蜡的切片放入二甲苯和纯酒精的混合液中浸10min。(2)用纯酒精处理5～10min。(3)放入95％、90％、80％、70％、50％、30％的酒精中各2—5min。(4)水洗1min。(5)用2％或4％铁明矾水溶液媒染0.5—2h。(6)水洗5min。(7)蒸馏水中更换数次约3～5min。(8)0.5％苏木精中染色1-24h。附：常用的染料的性能及其配制方法

生物学上用的染料，按其来源可分为两大类，一类是天然染料，一类是人工染料。天然染料是从动植物体中提取出来的，日常用的有苏木精、洋红、地衣红、靛青等。最早的人工染料是由苯胺制成的，所以常称为苯胺染料。但以后多数的人工染料是由煤焦油中提取出来的。下面介绍常用的染料的性能及其配制方法。常用的苏木精配方有：(1)海登汉(Heidenhain)氏铁苏木精甲液(媒染剂)铁明矾(即硫酸铁铵)2－4g蒸馏水100ml(甲液必须在用时配制，保持新鲜)乙液(染液)苏木精0.5g纯酒精或95％酒精10mL蒸馏水90mL苏木精溶于酒精中，然后加蒸馏水混合，置于广口瓶内，用纱布缚住瓶口，静置使其氧化，4周成熟后使用。(2)埃利希(Ehrlich)氏苏木精：苏木精1g纯酒精(或95％酒精)50ml冰醋酸5ml甘油50ml钾矾(硫酸铝钾)约5g(饱和量)蒸馏水50ml配法：①将苏木精溶于约15mL的纯酒精中，再加冰醋酸后搅拌。②当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的酒精。③将钾矾在研钵中研碎并加热，然后将它溶解于水中。④将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中，并随时搅动。⑤此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来，放在暗处通风的地方成熟时间约3～4周。若加入0．2g碘酸钠，可立刻成熟。此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期贮备无妨。此液可分别与伊红(enosin曙红)，橙黄G，番红进行二重染色。(3)哈里斯(Harris)氏苏木精：甲液：苏木精0.5g95％酒精5ml

乙液：钾矾或铵矾10g蒸馏水100ml氧化汞0.25g冰醋酸几滴配法：①将0.5g苏木精溶解于5ml95%酒精中。②溶解10g钾矾或铵矾于100ml的蒸馏水中，并加热煮沸。③将上述两液混合煮沸0.5min，并加入氧化汞。④移入冷水中冷却。⑤冷却液过夜后用双层滤纸过滤，并加入几滴冰醋酸。2．洋红(Carmine)

洋红又称卡红。是从一种热带昆虫胭脂虫的雌性虫体中提取的。洋红为核的优良染料，染色标本不易褪色，用作切片或组织块染色均适宜，特别适宜于小形材料的整体染色。(2)明矾洋洋红：洋红lg铵明矾(硫酸铝铵)10g蒸馏水100mL先将铵明矾溶于蒸馏水，再将洋红加入铵明矾水中煮沸，用玻棒充分搅和使洋红溶解，冷却过滤后，加入少许防腐剂。(3)醋酸洋红

洋红4～5g冰醋酸45ml蒸馏水55ml将洋红粉加入水及醋酸中，在小火焰上加温，煮沸用玻棒搅和使其溶解，冷却后过滤，用时加入99ml蒸馏水稀释。(2)碱性品红(basicfuchsin)：碱性品红为强力的细胞核染料，对粘液、弹性纤维、轮藻、原球藻及细菌等的染色都有较好的效果。碱性品红可溶于酒精和水，在酒精中的溶解度大。(3)美蓝(亚甲蓝methyleneblue)：美蓝的染色范围很广，是重要的生物染料之一，美蓝可用于神经组织和核仁的活体染色，也是最常用的血液染色剂。

(4)结晶紫(crystalviolet)：结晶紫应用范围较广，动物、植物、微生物方面的材料都可使用。结晶紫溶于水和酒精，配制方法可因用途而异。

(2)酸性品红(acidfuchsin)：酸性品红广泛地应用于动物材料的染色，可染动物细胞的细胞质、细胞核。也可染植物组织，对髓部薄壁细胞的染色具有良好的作用。还可染胚囊、花粉以及寄生于动、植物组织中的霉菌等。

(3)伊红(曙红)(eosin)：伊红是最优良的动物细胞染料，常与苏木精对动物组织进行对比染