常用病理技术操作规范文件

学习文档仅供参考学习文档仅供参考一、常用病理学技术操作标准总则〔一〕为提高我院病理学诊断质量，促进临床工作，依据《中华人民共和国执业医师法》的精神，结合我院病理科的实际情况，制定本标准。〔二〕我院病理科的主要临床任务是通过活体组织病理学检查〔简称活检〕、细胞病理学检查〔简称细胞学检查，暂未开展〕等做出疾病的病理学诊断〔或称病理诊断〕。〔三〕病理学诊断是病理医师应用病理学知识、有关技术和个人专业实践经验，对送检的标本〔或称检材，包括活体组织、细胞等〕进行病理学检查，结合有关临床资料，通过分析、综合后，做出的关于该标本病理变化性质的判断和具体疾病的诊断。病理学诊断为临床医师诊断疾病、制定治疗方案、评估疾病预后和总结诊治疾病经验等提供重要的〔有时是决定性的〕依据，并在疾病预防，特别是传染病预防中发挥重要作用。的医师不得签署病理学诊断报告书。〔六〕病理学检查申请单是临床医师向病理医师发出的会诊邀请单。病理学检查申请单的作用是：临床医师向病理医师传递关于患者的主要临床信师〕逐项认真填写并签名。〔七〕临床医师应保证送检标本与相应的病理学检查申请单内容的真实性和一致性，所送检材应具有病变代表性和可检查性，并应是标本的全部。〔八〕患者或患者的授权人应向医师提供有关患者的真实信息〔包括、性别、年龄、病史和可能涉及诊断需要的隐私信息〕。病理医师应尊重和保护患者的隐私。患者或患者的授权人应保证其自送检材的真实性、完整性和可检查性。〔九〕病理科应努力为临床、为患者提供优质服务，遵照本标准的要求加强科室建设，制定完善的科室管理制度，并实施有效的质量监控。色片和可靠的其他相关检测结果，并确保经过技术流程处理的检材真实无误。二、普通活体组织病理学检查操作标准一〕申请单和标本的验收．病理科安排专人验收普通活体组织病理学检查〔常规活检〕申请同时接受同一患者的申请单和标本。认真核对每例申请单与送检标本及其标志〔联号条或其他写明患者认真检查标本的标志是否牢附于放置标本的容器上。在申请单上详细记录患者或患方有关人员的明确地址、 及 码，以便必要时进行联络，并有助于随访患者。．以下情况的申请单和标本不予接收。(8)其他可能影响病理检查可行性和诊断准确性的情况。病理科不能接收的申请单和标本一律当即退回，不予存放。4%5．病理医师只对病理科实际验收标本的病理学诊断负责。．病理科应建立与送检方交接申请单和标本的手续制度．病理科验收人员应在已验收的申请单上注明验收日期，及时、准．标本的病理号按年编序。．同一病例同一次的申请单、活检标本登记簿〔包括电脑录入〕、放置标本的容器、组织的石蜡包埋块〔简称蜡块〕及其切片等的病理号必须标本验收人员对已验收的标本酌情更换适宜的容器，补充足量的固定及时、标准地予以剖开，以便充分固定。三〕组织的固定技术操作标准．凡需要进行病理组织学检查的标本离体后，应尽快浸泡于装有足5．常规固定液为4%l0%418或更久。3食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依标准方法剪开后，然后4%肝、脾：由器官反面，沿其长轴每间隔～纵向平行剖开，切成数片4%4%肾：沿肾外缘中线朝肾门方向做一水平切面〔深达于肾盏〕，再行4%lh2～3mm)，继续固定。骨组织：先锯成小片〔假设是长骨应做横向锯片〕，在4%中性甲24h后，再进行脱钙。4%凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号。．多数固定液对人体有害，需要防护，必须在封闭的通风条件下进．组织块的切取和固定。切取组织块的形状，在充分包括肉眼所见病变的前提下尽量规则些5--10253～24h时间应延长。4%10%中性福尔马林〕固定液对于核验无误的标本，应按照以下程序进行操作：①眼检查标本〔巨检〕检记录单印于活检申请单的反面〕。．巨检和取材必须由病理医师进行，应配备人员负责记录。．巨检和取材过程中，应严防污染工作人员和周围环境。．标本一般应经适当固定后再行取材。已知具有传染性〔例如结核病．病理医师在对每例标本进行巨检和取材前，应与记录人员认真核．病理医师进行巨检和取材时，记录人员应根据病理申请单内容，向巨检医师报告患者的基本临床情况、手术所见、标本情况〔采取部位、数等〕和送检医师的特殊要求等，并如实、清楚地将病理医师的口头描述记录于活检记录单上。必要时，应在活检记录单上〔或另附纸〕绘简图显示巨检所见和标示取材部位。取材者应核对记录内容。．细小标本取材时，可用伊红点染并用软薄纸妥善包裹。．每例标本取材前、后，应用流水彻底清洗取材台面和所有相关器物3--I,--2,-3；A,B,，〕。取材医师和记录人员应相互配合、核查，确保所取组织块及其编号标本巨检和取材后剩余的组织、器官应置入适当容器内，添加适量4%中性甲醛并附有相关病理号和患者等标志，然后按取材日期有序地妥善保存。取材剩余的标本一般保存至病理学诊断报告书发出后两周。病理医师在每批标本巨检和取材后，应与记录人员共同核对取材取材后剩余的病理标本属于污染源，应遵照医疗生物垃圾处理的材、活检申请单／记录单和取材工作单等的交接手续。五〕病理标本的肉眼检查和组织学切片取材技术标准概述1．标本取材可在其固定前或固定后进行。．小标本和不完整的器官组织通常为活检组织，包括：①子宫内膜的刮取物；②浅在或深在部位的穿刺物；③皮肤组织；④浅表的或经由内镜mm或cm少量的小标本，应全部取材制片。4%中性甲醛中妥善保存备用。黏膜和皮肤组织应予“立埋”，即将黏膜面与包埋盒的底面垂直，使用镊子夹取标本时须严防挤压组织。4或cm)(mm或cm)或kg)。检查切面。通常沿标本长径切开或剪开〔囊性标本时〕，描述和记2mm左右〕做多个平行切面，检查有无微小肿物。带有脏器的标本，应描述和记录病变处与有关脏器的毗邻关系特点。的编号，以便镜检时定位。切取组织块的刀具必须锋利，严防挤压组织。2cm3mm〔快速包埋组织块的切面应平整。需要指定组织块的包埋面时，可将其非包标本摄影，必要时酌情进行〔标本固定前或固定后〕。①肿瘤：包括的整体和切面特点及其解剖学关系。②消化道：包括整体标本的浆膜面外观和剪开后的黏膜面外观。新鲜标本摄影后，将剪开、展平的标本用大头针钉在薄木板上，置于4%中性甲醛中漂浮〔标本朝下方〕固定过夜。．切取组织块的编号、数量和取材后是否尚有标本存留等均应在活检记录单的肉眼检查描写栏内和取材工作单中注明，以便镜检时核对切片。例如，①组织较少、全部包埋制片者，可注明“全”字；②针吸、内镜取材．需要重新肉眼检查标本时，应在有关病例活检记录单中补充必要的文字描述；需要补充切取组织块时，应按上述取材操作程序进行，并应在六〕取材顺序的统一规定1盒内可放多块组织。2的正常组织。号以后的蜡块按号顺延，可分别取切缘、周围脂肪、送检淋巴结、送检其余组织〔假设为乳腺组织则取乳头皮肤、切口皮肤、腋区脂肪、送检淋巴结〕。质地、有无出血、坏死、钙化及囊性变等。5本。6CIN/CIS1212HECIN/CIS太少，需要再补取材后发报告。七〕包埋组织切片〔常规切片〕的制备1.制备程序①水洗。②脱水。③透明。④浸蜡。⑤包埋。⑥切片。组织切片制备及其HE2m的通风和消防设施。3.常规切片的手工操作①水洗用流水冲洗已经固定的组织块30min。②脱水〔常温下〕A乙醇一甲醛60～120min。B80%60～120rain。C95%乙醇～120min。D95%乙醇Ⅱ：60～120min。E～60min。F无水乙醇Ⅱ：30～60min无水乙醇Ⅲ：30～60min剂容积应为组织块总体积的5～10500脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水；⑥组织块置于无水乙醇内的时间不宜过长〔以免硬化〕。③透明A二甲苯。B二甲苯Ⅱ：20minC二甲苯Ⅲ：20min5～10更换；④组织块经二甲苯适度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。④浸蜡A石蜡I(4～50：60min。B石蜡Ⅱ(56～58石蜡Ⅲ(56～585～10③组织块经二甲苯适度透明后方可转入浸蜡过程，应尽可能减少将透明后组织块外表的二甲苯带入熔蜡中；④浸蜡时间适宜，过短时浸蜡不充分〔组织过软〕，过长时组织硬脆；⑤熔蜡应及时过滤、更换。⑤包埋A先将熔化的石蜡倾入包埋模具中，再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的组织块，使组织块的最大面或被特别指定处的组织面向下埋入熔蜡中，应将组织块平整地置放于包埋模具底面的中央处。包埋于同一蜡块内的多块细小组织应彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮肤和黏膜组织必须垂直包埋〔立埋〕。将与组织块相关的病理号小条置入包埋模具内熔蜡的一侧。待包埋模具内的熔蜡外表凝固后，即将模具移入冷水中加速凝固。D周围的过多石蜡〔组织块周围保留1～2mm成为规则的正方形或长方形。E将病理号小条牢固地烙贴在蜡块一侧〔编号应清晰可见〕。F把修整好的蜡块烙贴在支持器上，以备切片。G使用包埋机的方法按有关厂商的说明书操作。H注意事项。联系，及时处置。其是硬质异物〕埋人蜡块内。包埋过程要操作迅速，以免组织块尚未埋妥前熔蜡凝固。45～5056～58包埋用熔蜡使用前应先静置沉淀、过滤。f熔蜡时不得使用明火，以防燃烧。包埋用熔蜡的温度应<65℃；包埋用的镊子不可加温过高，以免烫伤组织。⑥切片A切片刀或一次性切片刀片必须锋利低倍显微镜下确认刀刃无缺口〕；使用一次性切片刀片时，应及时更新。载玻片必须洁净、光亮。15。为宜〕。5。夹角〕。持器。15-20m［注意：对于医嘱再次深切片〔特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片〕，应尽46m连续成带状，完整无缺，厚度适宜〔3～5m〕、均匀，无刀痕、颤痕、皱褶、开裂、缺损、松解等。45IHE右)i/3的位置用于贴附标签。蜡片与载玻片之间无气泡。J45(60～6230～60min)注意事项。中遇到的困难首先应注意从切片前的上述各环节中寻找原因。标准地切片，精心维护切片机。少制备6步骤的次序和各步骤的持续时间，总计需要14h。①乙醇一甲醛(AF)固定液2×60min。②95%o乙醇工2③95%乙醇Ⅱ2④无水乙醇I60min。⑤无水乙醇Ⅱ60min。⑥二甲苯I30min。⑦二甲苯Ⅱ30min。⑧石蜡I30min。60min。90min。⑾注意事项A必须按有关说明书的规定，使用和维护自动组织处理机。必须及时向病理科主任报告，尽快采取应急措施妥善处置。>305～10理时间。八〕脱钙方法骨和其他钙化组织，通常需要脱去钙盐后进行切片。骨组织脱钙前须先行固定。⒈常规脱钙法① lcm② 在AF4%6～12h③ 5%37刺可进入时为止，需12～24h(2～3h)，其间可2—3④ 1～2h⑤ 移入5%～4h⑥ 2～3h⑦ 按常规脱水。⑧ 石蜡包埋。85%lO%5%3.注意事项① 骨片等脱钙组织的厚度适宜。② I：30③ 脱钙过程中应不时摇动，多次更换脱钙液。④ 脱钙时间不可过长。⑤ 微波处理可加速脱钙过程。⑥ 脱钙后的组织必须用流水充分冲洗。⑦ HEHE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。1.石蜡切片HE染色程序〔常规HE染色〕二甲苯Ⅰ： 5～10min。二甲苯Ⅱ： 5～10min。无水乙醇Ⅰ： 。无水乙醇Ⅱ： 1～3min。(5)95%乙醇Ⅰ：l～3min。(6)95%乙醇Ⅱ：l～3min。(7)80%乙醇：1min。(8)蒸馏水：1min。(9)苏木精液染色：5～10min。(10)流水洗去苏木精液：1min。(11)1%盐酸一乙醇： 稍水洗: 。返蓝〔用温水1%氨水等〕：5～10s。流水冲洗： 1～2min蒸馏水洗： 。0.5%伊红液染色： 1～3min。蒸馏水稍洗： 。(18)80%乙醇：l～2s。(19)95%乙醇Ⅰ：2～3min。(20)95%乙醇Ⅱ：2～3min。无水乙醇Ⅰ： 3～5min。无水乙醇Ⅱ： 3～5min。二甲苯工： 3～5min。二甲苯Ⅱ： 3～5min。二甲苯Ⅲ： 3～5min中性树胶封固上述10～15min〔细胞核显示更清晰〕；②项可用无水乙醇代替，北方地区可省略。2.染色结果钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。3.染色注意事项：⑴切片染色前，应彻底脱蜡。⑵严格执行HE染色流程，用显微镜控制细胞核的苏木精染色质量。HE染片应着色鲜艳，红、蓝分明，比照清晰。人员和局部环境的二甲苯污染防护。不应将组织切片烤干或风干后再行封片。⑷必须在载玻片的一端牢贴标签。标签上应印有病理科所在的医院名误，无涂改。经核对无误后，办理移交签字手续。⑹石蜡切片-HE染色的优良率〔甲、乙级切片所占的比率〕应≥90%。⑺制片工作一般应在取材后2需要特殊处理的标本〕。⑻制片过程出现意外情况时，技术室人员应及时向病理医师和病理科主任报告，设法予以补救。十〕切片的光学显微镜检查和病理学诊断1病例〕，应向有关临床医师了解更多的临床信息。2．病理医师应了解患者既往病理学检查情况〔包括切片的病理学诊断和有关文字记录〕，包括：①本病理科既往受理者，必须及时调阅相关切．病理医师应在活检记录单上签署“医嘱”，告知技术人员进行必．病理医师应全面、细致地阅片，注意各种有意义的病变。必要时可提请上级医师会诊或进行科内读片讨论〔会诊〕，或与有于签发病理学诊断报告书前进行科外病理会诊〔诊断报告前病理会者的活检记录单中备查。必要时，建议临床医师重复活检，或密切随查。10考。对打印的病理学诊断报告书，病理医师应与活检记录单上的病理病理医师可借助于组织化学染色〔包括特殊染色〕、免疫组织化学病理学诊断。十一〕病理学诊断报告书及其签发1.病理学诊断表述的基本类型Ⅰ类：检材部位、疾病名称、病变性质明确和基本明确的病理学诊断。Ⅱ类：不能完全肯定疾病名称、病变性质，或是对于拟诊的疾病名称、病变性质有所保留的病理学诊断意向，可在拟诊疾病／病变名称之前冠以诸如病变“符合为”、“考虑为”、“倾向为”、“提示为”、“可能为”、“疑为”、“不能排除〔除外〕”之类的词语。Ⅲ类：检材切片所显示的病变不足以诊断为某种疾病〔即不能做出工类或Ⅱ类病理学诊断〕，只能进行病变的形态描述。Ⅳ类：送检标本因过于细小、破碎、固定不当、自溶、严重受挤压〔变形〕、被烧灼、干涸等，无法做出病理学诊断。病理学诊断报告书的基本内容⑴患者的基本情况，包括病理号、、性别、年龄、送检医院或科室〔住院或门诊〕、住院号或门诊号、送检和收验日期等。⑵巨检病变和镜下病变要点描述〔一般性病变和细小标本可酌情简述或省略〕。⑶与病理学诊断相关技术的检查结果。⑷病理学诊断的表述，参见上文“〔一〕病理学诊断表述的基本类型”。⑸对于疑难病例或做出Ⅱ、Ⅲ类病理学诊断的病例，可酌情就病理学诊断及其相关问题附加：①建议〔例如进行其他有关检查、再做活检、科外病理学会诊、密切随诊或随访等〕；②注释和〔或〕讨论。⑹经过本病理科和〔或〕科外病理会诊的病例，可将各方病理会诊意见列于该例患者的病理学诊断报告书中。病理学诊断报告书的书写要求⑴病理学诊断报告书的文字表述力求严谨、恰当、精练，条理和层次清楚。⑵病理学诊断报告书应为一式二份，一份交予送检方，另一份随同患者的病理学检查申请单和病理学检查记录单一并存档。主检病理医师必须在每一份病理学诊断报告书上签名，不能以个人印章代替签名，不能由他人代为签名。主检病理医师签名的字迹应能识别。⑶手书的病理学诊断报告书必须二联复写，必须文字标准、字迹清楚，不得潦草、涂改。⑷手书和电脑打印的病理学诊断报告书中的关键性文字，例如“癌”、“瘤”、“阳性”、“阴性”和数字等，要认真核对，不得有误。⑸电脑打印的图文病理学诊断报告书提供的病变图像要准确，具有典型〔代表〕性，放大倍数适当。⑹患者的基本情况项目必须严格按照送检临床医师填写的文字抄写或师和病理科的其他人员都不得改动。⑺病理医师不得签发虚假的病理学诊断报告书，不得向临床医师和患方人员提供有病理医师签名的空白病理学诊断报告书。4.病理学诊断报告书的发送⑴病理科自接受送检标本至签发该例病理学诊断报告书的时间，一般情况下为5个工作日以内。⑵由于某些原因〔包括深切片、补取材制片、特殊染色、免疫组织化学或是进行其他相关技术检测，不能如期签发病理学诊断报告书时，应以口头或书面形式告知有关临床医师或患方，说明迟发病理学诊断报告书的原因。诊送检医师处。⑷病理学诊断报告书的经收人员〔包括患方人员〕必须履行签收手续。经病理科主任同意可以抄件形式补发。三、手术中快速活体组织病理学检查操作标准一〕概述．手术中快速活体组织病理学检查〔简称快速活检〕是临床医师在．快速活检要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片〔或快速石蜡切片〕的观察，向手术医师提供的参考性进一步明确诊断。因此，应向临床医师说明快速活检的：①局限性；②适用范围；③慎用范围；④不宜应用范围。．有关临床医师应于手术前向患者和〔或〕患者授权人说明快速活检的意义和局限性等，取得患者和〔或〕患方的知情和理解。患者和〔或〕．手术中快速活检应由经过该项工作训练的主治医师以上的病理医．负责快速活检的主检病理医师应了解患者的①临床情况；②手术二〕适用范围．需要确定病变性质〔如肿瘤或非肿瘤、良性肿瘤或恶性肿瘤等〕．了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区．确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。．确认切除的组织，例如甲状旁腺、输卵管、输精管及异位组织涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。四〕不宜应用的范围12cm．术前易于进行常规活检者。．脂肪组织、骨组织和钙化组织。．需要依据核分裂象计数判断良、恶性的软组织肿瘤。．主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性．已知具有传染性的标本〔例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病应用恒冷箱切片机制备切片是目前最适用方法。恒冷箱切片机种类．恒冷箱切片机制片：至少应于切片前开机预冷，冷室温度一般为－15～－2024h注意事项①制作冷冻切片所需的试剂和设备等应处于随时可供使用状态。②切取的组织块大小适宜(厚度<2mm)，并尽快置于冷冻组织切片机上制备切片。③调节冷冻程度，试切合适时便迅速切片。冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎。HE20～25min4HE(1)冷冻切片固定：10～30s(2)稍水洗：l～2s。(3)苏木精液染色(60℃):30～60s(4)流水洗去苏木精液：5～10s(5)1%盐酸一乙醇：l～3s。(6)稍水洗：1～2min(7)返蓝〔用温水或1%氨水等〕：5～10s(8)流水冲洗：15～30s(9)0.5%伊红液染色：1～2min。(10)蒸馏水稍洗：l～2min。(11)80%乙醇：l～2min。(12)95%乙醇：1～2min。(13)无水乙醇Ⅰ：1～2min。(14)无水乙醇Ⅱ：l～2min。(15)二甲苯Ⅰ：2～3min。二甲苯Ⅱ：中性树胶封固。2～3min上述10～15min显示更清晰〕。六〕手术中快速活检会诊意见及其签发．有条件的病理科宜由两位具有中、高级职称的病理医师共同签署快速活检的病理学诊断意见。对于病变疑难、手术切除范围广泛和会严重致主检病理医师签名的字迹应能识别。．快速活检诊断意见一般在收到送检标本后40min内发出；同一时．对于难以即时快速诊断的病变〔例如病变不典型、交界性肿瘤病变或送检组织不足以明确诊断等〕，主检病理医师应向手术医师说明情况，七〕冷冻切片后剩余组织的处理．冷冻切片后剩余的冷冻组织〔简称“冻对”〕和冷冻切片取材后剩以便与冷冻切片进行对照观察。．“冻对”、“冻剩”组织的蜡块和切片须与同一病例手术后送检-HE-HE四、病理科常用试剂的配制一〕HE染色试剂苏木精染液〕的配苏木精 1g无水乙醇 10ml硫酸铝钾 20g蒸馏水 200ml氧化汞冰醋酸 8ml先用无水乙醇溶解苏木精，用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后将该两液合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌溶液至深紫色，随即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。使用前加入冰醋酸并混匀、过滤。二〕盐酸—乙醇分化液浓盐酸 1ml2.70%乙醇 99ml三〕伊红液10.25%～0.5%Y水溶液：⑴伊Y ～⑵蒸馏水 100ml⑶冰醋酸 1滴20.5%Y⑴伊红Y⑵蒸馏水 lOOml⑶无水氯化钙30.25%～0.5%Y⑴伊Y O.25～g⑵80%乙醇 lOOml四〕石炭酸－二甲苯混合液石炭酸 1份二甲苯 3份五、病理科常用仪器操作规程〔一〕脱水机操作标准