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文档简介

实验八醋酸纤维素薄膜电泳

---分离血清蛋白质

用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳。醋酸纤维素薄膜电泳:

熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及电泳分离血清蛋白质的方法。[目的][原理]一、电泳的基本原理1、电泳

指带电颗粒在电场中向着与其所带相反电荷的电极移动的现象。2、迁移率（泳动度）带电颗粒在单位电场中泳动的速度

在一定的条件下，任何带电颗粒都具有自己的特定泳动度。3、影响电泳速度的因素内在因素:样品自身性质外在因素:电场缓冲液支持介质二、血清蛋白质的分离1、蛋白质的两性电离蛋白质分子两端的氨基和羧基氨基酸残基侧链中某些基团在一定的溶液pH条件下解离成带负电荷或正电荷的基团2、蛋白质的等电点

(isoelectricpoint,pI)

当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。3、血清蛋白质1）依据电泳结果分类清蛋白(69.000)1-球蛋白(200.000)2-球蛋白(300.000)-球蛋白(90.000-150.000)-球蛋白(156.000-950.000)2）各血浆蛋白质的等电点清蛋白1-球蛋白2-球蛋白-球蛋白-球蛋白分类pIpH8.6

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—组成比例56一62％4一7％9一11％11一15％12一16%4.645.065.126.85-7.3A

清蛋白

12清蛋白

12B血清蛋白电泳图谱[操作]1．电泳介质

——醋纤膜的准备醋酸纤维素膜（2×8cm）放入pH8.6的巴比妥缓冲液2．样品1)γ-球蛋白前面分离提纯、浓缩2)血清:对照^3、点样注意：点样量适度

过多：拖尾和扩散过少：则无法检出1.5cm粗糙面点样4、电泳注意

1、薄膜条要绷紧，避免中间下垂

2、缓冲液与醋纤膜之间用滤纸搭桥

3、盖上电泳槽盖平衡

4、接通电源，调整电压到最大，调整电流为0.5-1mA/条醋纤膜）

5、时间：30-40min将点好祥的醋纤膜点样端放进电泳槽架负极（黑色）（四）显色与脱色1、显色氨基黑10B（1-2min）2、脱色5%冰醋酸漂洗3次注意：用干净镊子夹电泳槽中的膜污染镊子用于显色与脱色[结果]白蛋白α1球蛋白

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