HPV DNA分型与临床(new)课件

HPVDNA分型与临床1内容一览HPV与宫颈癌HPV分型检测与宫颈癌筛查知识要点1234HPVDNA分型检测液芯21234知识要点HPV是宫颈癌发生发展的必要条件HPV亚型众多，不同亚型具有不同致病能力HPVDNA分型检测应用于宫颈癌筛查，能够将宫颈癌早期筛查的检出率提升至98%～100%权威组织推荐：采用细胞学和HPVDNA分型联合检测筛查宫颈癌，HPVDNA分型液芯，26种亚型1次呈现，分型明确，3内容一览HPV与宫颈癌HPV分型检测与宫颈癌筛查知识要点1234HPVDNA分型检测液芯41234HPV与宫颈癌病毒DNA主要衣壳蛋白次要衣壳蛋白无包膜微小DNA病毒二十面体对称结构表面有72个壳体HPV的基本特性51234HPV的基因组特征HPV与宫颈癌71234HPV的基因组特征双链共价闭合的DNA分子，7.9kbE〔早期转录功能区（或称早期基因区）〕E1(病毒DNA复制因子)E2(DNA复制和RNA转录控制因子)E4（与病毒成熟胞质蛋白有关）E5（调节生长控制机制）E6(分解p53)E7(结合pRB)E3、E8并非所有亚型的基因组都有L（晚期转录功能区（或称晚期基因区））L1（主要衣壳蛋白）L2（次要衣壳蛋白）URR〔上游调节区，或长控制区（LCR）或非编码区（NCR）〕干扰细胞增殖周期HPV与宫颈癌81234HPV的感染途径直接性接触传染母婴传染间接物体传染自体接种HPV与宫颈癌101234HPV的繁殖及其致病作用促细胞增殖作用病毒的大量快速增殖良性：疣类疾病病毒DNA与宿主细胞DNA的亲和力恶性：多种癌症HPV与宫颈癌成熟病毒颗粒病毒DNA角质化病毒复制角质层颗粒层棘层基底层释放病毒颗粒成熟基因组复制释放感染111234高危型HPV的致癌过程HPV与宫颈癌121234HPV感染的可能转归HPV与宫颈癌HPV感染其它疣类疾病宫颈炎、宫颈糜烂、CINI潜伏感染亚临床感染显性感染被清除宫颈癌、阴茎癌、外阴癌、肛门癌等高、低危型HPV高危型HPV尖锐湿疣141234HPV感染与宫颈癌的发生发展出现HPV相关的细胞学改变正常宫颈高度鳞状上皮内病变(HSIL,CINII,III/CIS)

宫颈浸润癌HPV

感染高危HPV亚型协同致癌因素约60%在2到3年内自然逆转30%-70%在10年内演变为低度鳞状上皮内病变

(LSIL,CINI)约15%在3-4年内演变为HPV与宫颈癌153阴道镜下宫颈癌前病变各期及宫颈癌的表现HPV与宫颈癌12417内容一览HPV与宫颈癌HPV分型检测与宫颈癌筛查知识要点1234HPVDNA分型检测液芯181234女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌全世界每年近50万宫颈癌新发病例，80%发生在发展中国家我国每年13万新发病例，近2万人死于宫颈癌宫颈癌年轻化趋势宫颈癌发病情况HPV分型检测与宫颈癌筛查191234病程长宫颈解剖位置特殊，便于治疗早诊早治是关键：癌前病变的治愈率可达100%，原位癌的5年生存率为100％，早期癌为90％-92％，而浸润癌的5年生存率仅为67％宫颈癌可防可治有效的筛查方法HPV分型检测与宫颈癌筛查20细胞学传统巴氏细胞学涂片液基细胞学（liquid-basedcytology）细胞学自动阅片系统(PAPNET，AutoPap)肉眼法(visualinspection)醋酸白试验：用3%~5%的冰醋酸染色，简称VIA（visualinspectionwithaceticacid）碘黄试验：用4%~5%的碘液染色，简称VILI(visualinspectionwithLugol’siodine)阴道镜检查(Colposcopy)病原学检测免疫学HPVDNA检测HPV分型检测与宫颈癌筛查宫颈癌筛查方法1234211234HPVDNA检测方法直接核酸探针法原位杂交Southern印迹杂交杂交信号放大法HPVDNA杂交捕获(HCII)目的片段扩增法（基于PCR的检测方法）低通量方法PCR，荧光定量PCR高通量方法膜芯片、液态芯片HPV分型检测与宫颈癌筛查221234HPVDNA检测在宫颈癌筛查中的应用HPV分型检测与宫颈癌筛查ChavelC,etalBrJCancer,2001,84:1616-1623241234权威组织一致推荐：采用细胞学检查和HPVDNA联检进行宫颈癌筛查。HPV分型检测与宫颈癌筛查251234HPV分型检测与宫颈癌筛查引自：宫颈癌筛查及早诊早治方案/乔友林等.2003.7宫颈癌筛查处置流程2712341977年，在宫颈癌活检组织中发现HPV病毒颗粒，提出了HPV感染与宫颈癌关系的假设100%的宫颈癌患者的HPV感染为阳性高度病变（CIN2和CIN3）中约97%为阳性低度病变（CIN1）中的阳性率亦达61.4%HPV感染的相对危险度（比数比，OR）在宫颈上皮内高度病变/癌症(≥CIN2)：254.2低度病变(CIN1)：26.4宫颈癌病因学研究进展HPV分型检测与宫颈癌筛查28宫颈癌病因学研究进展1995年，IARC专题讨论会确定了HPV是女性宫颈癌和宫颈上皮内高度瘤变（CINⅡ/Ⅲ）发生的必要条件HPV检测用于宫颈癌筛查HPV分型检测与宫颈癌筛查1234291234不同HPV亚型与宫颈癌发病之间的关系HPV总感染率与宫颈癌发病率之间的矛盾高危HPV感染率低危HPV亚型仅导致CINI、尖锐湿疣等良性病变高危HPV亚型所致的CINI、尖锐湿疣病变可能演变成CINIII、CIS、CC、阴茎癌、外阴癌、肛门癌、炎喉癌等多种恶性病变不同的高危HPV亚型之间，其致恶性病变能力是不一样的HPV的型别还与宫颈癌的病理类型有关，在宫颈鳞状上皮细胞癌中以HPV16为主（占51%），而在宫颈腺癌和宫颈腺鳞细胞癌中HPV18分别占56%和39%HPV分型检测与宫颈癌筛查301234HPV感染及宫颈癌发病率与年龄的关系引自：宫颈癌筛查及早诊早治方案/乔友林等.2003.7HPV分型检测与宫颈癌筛查311234高危HPV感染率（％）山西省阳城和襄垣两县32~50年龄组妇女高危HPV感染情况引自：宫颈癌筛查及早诊早治方案/乔友林等.2003.7HPV分型检测与宫颈癌筛查321234不同HPV亚型在宫颈癌中的分布HPV分型检测与宫颈癌筛查331234HPV亚型的地域/族群分布特点HPV16、18型感染很普遍部分HPV亚型存在鲜明的地域分布特点

HPV45型在非洲西部很常见HPV39和59型仅在美洲的中部和南部出现，HPV52，58在中国妇女中检出率较高HPV分型检测与宫颈癌筛查34不同HPV亚型的地域分布HPV分型检测与宫颈癌筛查1234

351234HPV分型检测与宫颈癌筛查2005年2月，IARC确定了13种导致宫颈癌的高危HPV亚型，并明确提出在将HPV检测用于宫颈癌筛查时必须考虑不同高危亚型间的致癌能力差异宫颈癌病因学研究进展HPV分型检测36内容一览HPV与宫颈癌HPV分型检测与宫颈癌筛查知识要点1234HPVDNA分型检测液芯371234如此众多的HPV亚型，如何准确检测并分型？HPVDNA分型检测液芯381234HPVDNA分型检测液芯液态芯片DCAEHBFIG391234HPVDNA分型检测液芯液态芯片Luminex100TM多功能流式点阵仪401234HPVDNA分型检测液芯液态芯片1234567891012345678910411234HPVDNA分型检测液芯液态芯片421234HPVDNA分型检测液芯液态芯片431234低危型:7种

6、11

40、42、44、53、54高危型:19种

16、18

31、33、35、39、45、52、 58、26、51、55、56、59、 61、66、68、73、83HPVDNA分型检测液芯26种亚型，一次呈现44HPVDNA分型检测液芯的操作步骤

多重PCR

杂交

抽提DNA30-40min2.5hr15min40sec/sample

xMAPTM检测

标本采集收集检测部位的脱落细胞或病变组织细胞.女性宫颈口样品采样时，用棉拭子将宫颈口或尿道口过多的分泌物轻轻擦拭干净，然后取出取样器，插入宫颈,紧贴宫颈口，用力转动五周，以取得足够的脱落细胞供检测,将取样器放入装有标本保存液的瓶内振荡洗涤几次,尽量将细胞洗脱下来。盖紧瓶盖,做好标记。尿道口或其它可疑感染部位的样品

皮损或切除的病变组织HPVDNA分型检测液芯123445透景HPV分型液芯检测原理

采用X-Map技术，液态芯片平台，一次反应同时检测26种HPV亚型。26种编码微球分别交联相应探针PCR扩增待检测样品PCR产物和微球上交联的探针杂交Luminex100多功能流式点阵分析仪上检测荧光信号。

461234HPVDNA分型检测液芯的适用人群人群普查:有三年以上性行为或21岁以上有性行为的妇女高危人群筛查:宫颈细胞学检测异常或可疑的患者宫颈炎、宫颈糜烂患者尖锐湿疣患者男性尖锐湿疣患者的配偶有不洁性生活史的患者“特殊职业”妇女人群免疫功能低下者：如HIV阳性、器官移植、化疗患者HPVDNA分型检测液芯47HPVDNA分型检测液芯的临床意义HPV感染早于细胞学异常，早发现可指导医生更早地预警宫颈癌不同型别的HPV致病能力可能不同宫颈癌患者年轻化趋势明显，低龄患者宫颈癌的发生可能与多重感染有关与疫苗的使用和开发密切相关HPV16和18是感染比例最高的2种亚型，目前已有针对HPV16和18的疫苗，弄清是何种亚型感染对治疗致关重要HPVDNA分型检测液芯123448HPV分型检测液芯的优点囊括经WHO认定导致宫颈癌的全部13种高危HPV亚型收录其它13种常见对生殖道致病的HPV亚型病例覆盖面达99%以上HPVDNA分型检测液芯1234491234HPV分