选3.2.2.1动物细胞培养和核移植技术课件

2.2动物细胞工程动物细胞工程技术手段：基础：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、单克隆抗体动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础动物细胞培养1、概念：2、原理：3、目的：从动物机体中取出相关的组织或器官，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖动物细胞培养移植修复细胞增殖(有丝分裂)获得细胞或细胞产物4、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液1、P50“思考与探究”1思考：幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说，幼年动物的组织细胞比老年动物的易于培养。

同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。3.用胰蛋白酶分散细胞会不会伤害细胞？改用胃蛋白酶可不可以？

胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。

胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。在此环境中胰蛋白酶活性高，适宜细胞培养时的消化。4、原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。（动物组织消化后的初次培养）培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。4、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液动物细胞的培养过程幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞5.细胞在培养瓶中生长具有哪些特点？细胞悬液原代培养(初次装瓶培养)培养瓶中培养—细胞生长特点贴壁生长含义：要求：细胞要能贴附于底物上才能增殖培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒、易贴附接触抑制传代培养(分瓶继续培养)胰蛋白酶处理贴壁细胞，分散成单个细胞，制成细胞悬液6.分散的单个细胞要用什么状态的培养基来培养，你认为培养基中应加入哪些物质？单个细胞细胞悬液培养基作用：状态：成分液体培养基营养物质为细胞提供营养无机物：有机物：水、无机盐氨基酸、糖类、促生长因子等血清、血浆合成培养基+血清、血浆=半合成培养基1、无菌、无毒的环境动物细胞培养的条件培养液和培养器具—无菌处理培养液中添加抗生素—目的：防止培养过程中杂菌污染定期更换培养液—目的：清除代谢产物，防止细胞代谢积累对细胞造成伤害2、营养：合成培养基+血清、血浆

3、温度和PH：36.5+0.5℃,7.2-7.4

4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2混合气体培养箱）O2是细胞代谢所必需的CO2维持培养液的PH细胞的全能性培养瓶锥形瓶培养器皿获得细胞或细胞产物获得完整个体或细胞产物培养目的葡萄糖、动物血清或血浆蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较应用生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）作为基因工程中的受体细胞检测有毒物质，判断某种物质的毒性用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据动物细胞是否具有全能性？

动物细胞也是有全能性的，但是随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。

动物细胞主要是细胞核具有全能性，但是必须要有卵细胞的细胞质才能将其全能性激发出来动物体细胞核移植技术和克隆动物动物细胞核移植的概念：

是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。克隆动物：用核移植的方法得到的动物核移植胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性相对容易体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性十分困难分类动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植核移植技术1.克隆羊培育过程黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核细胞核移植重组细胞电脉冲刺激早期胚胎胚胎移植另一头绵羊的子宫妊娠、出生克隆羊多利为什么要去掉受体卵母细胞的细胞核？为了使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自供体细胞，从而保证得到与供体一样有利用价值的个体。通过核移植得到的奶牛与供体奶牛完全一样吗？不会完全一样。虽然克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，其主要性状与供体动物相同。但是核外还有少量DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与环境有很大关系，因此，不会完全相同体细胞核移植技术的应用前景

1、在畜牧