DB33-T 2300-2020单胞藻规模化培养技术规范

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DB33浙 江 省 地 方 标 准DB33/T2300—2020单胞藻规模化培养技术规范Technicalspecificationforlarge-scalecultivationofmicroalgae2020-12-30发布 2021-01-30实施浙江省市场监督管理局 发布DB33/T2300DB33/T2300—2020II前 言本标准按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本标准由浙江省农业农村厅提出。本标准由浙江省水产标准化技术委员会归口。本标准起草单位：浙江省海洋水产养殖研究所，浙江永兴水产种业有限公司，宁波大学。本标准主要起草人：柯爱英、徐继林、周朝生、肖国强、蔡景波、黄振华、曾国权、胡园、朱洁、吴越、王瑶华。PAGEPAGE7单胞藻规模化培养技术规范范围本标准规定了单胞藻规模化培养的培养条件和设施、培养方法、日常管理、收获和保存等内容。本标准适用于水产苗种培育和养殖生产中的单胞藻培养。（GB11607渔业水质标准NY5051无公害食品淡水养殖用水水质NY5052无害品 水养用水质下列术语和定义适用于本标准。3.1指数生长期细胞迅速生长繁殖，藻细胞数量随着培养时间的延长呈几何级数递增的时期。3.2一级培养以0.3L～5.0L广口瓶或三角烧瓶作培养容器，严格消毒，用滤纸封口的培养方式。3.3二级培养用容积为50L～100L白塑料桶、尼龙袋、光生物反应器等作为培养容器，严格消毒，连续充气的培养方式。3.4三级培养采用育苗场现有的水泥培养池、帆布池等作为培养容器，消毒，连续充气的培养方式。海水应符合GB11607、NY5052规定。淡水应符合GB11607、NY5051规定。0.3L～5.0L10L～20L50L～100A。。5～102505～1050L～100L20mg/L～50mg/L8015mg/L～30mg/L50mg/L～100mg/L1000mg/L+250mg/L接种藻种应无污染，无杂藻、藻细胞无附壁。接种时间宜在早上6：00～10：00进行，藻种在指数生长后期，一级培养接种浓度为1：5～1：10；二级培养接种浓度1：10～1：50；三级培养根据天气、生产需要来接种，接种浓度1：15～1：30。水产养殖常用微藻种类生态条件参数见附录B。培养液常用培养液配方见附录C、附录D。观察空调控温，光照用日光灯调节，每天摇晃藻种瓶4次～6次，培养用的消毒水应在5天～7天用完。控温，用遮光帘或遮阳布等设施，调节光照，充气微沸。收获保存培养的单胞藻利用500目尼龙筛网富集、暗沉淀、加0.5g/L～1.0g/L明矾或氢氧化钙收集藻类，冷藏或冷冻保存，以备随时投喂使用。单胞藻规模化培养技术模式图见附录E。附 录 A（资料性）单胞藻培养常用消毒方法单胞藻培养常用消毒方法见表A.1表A.1 胞培常毒方法项目名称煮沸烘箱干燥高压灭菌高锰酸钾漂白粉或漂白片盐酸玻璃容器5分钟～10分钟120℃恒温2小时121℃，维持20分钟浓度10mg/L～20mg/L浸泡5分钟～10分钟浓度10mg/L～100mg/L浸泡12小时盐酸：水1：1～1：5金属工具5分钟～10分钟120℃恒温2小时121℃，维持20分钟///塑料容器///浓度10mg/L～20mg/L浸泡5分钟～10分钟浓度10mg/L～100mg/L浸泡12小时盐酸：水1：1～1：5充气管散气石5分钟～10分钟//浓度10mg/L～20mg/L浸泡5分钟～10分钟浓度10mg/L～100mg/L浸泡12小时/水泥池玻璃缸///浓度10mg/L～20mg/L浸泡5分钟～10分钟浓度10mg/L～100mg/L浸泡12小时盐酸：水1：1～1：5光生物反应器、管道///浓度10mg/L～20mg/L浸泡5分钟～10分钟浓度10mg/L～100mg/L浸泡12小时盐酸：水1：1～1：5附 录 B（资料性）水产养殖常用微藻种类生态条件参数水产养殖常用微藻种类生态条件参数见表B.1。表B.1水产养殖常用微藻种类生态条件参数品种隶属PH适温范围（℃）盐度范围（‰）光照强度（ｌｘ）三角褐指藻硅藻门7.0～10.05～2515～351000～8000小新月菱形藻7.0～10.05～2820～351000～8000纤细角毛藻6.5～9.510～4010～305000～15000牟氏角毛藻6.5～9.510～4010～305000～15000假微型海连藻7.0～10.020～3015～351000～10000威氏海连藻7.0～10.020～3015～353000～10000中肋骨条藻7.0～10.010～2510～403000～7000等鞭金藻金藻门7.0～9.515～3510～503000～9000球等鞭金藻7.0～10.010～3510～503000～10000叉鞭金藻7.0～9.59～3510～503000～15000绿色巴夫藻7.0～9.510～355～803000～15000亚心形扁藻绿藻门7.0～10.07～3010～401000～20000青岛大扁藻7.0～10.010～3510～401000～10000塔胞藻7.0～10.07～3010～401000～20000小球藻6.0～8.510～360～451000～20000微绿球藻7.0～9.510～364～363000～20000栅藻5.0-7.510～3501000-10000附 录 C（资料性）常用海洋微藻培养液配方常用海洋微藻培养液配方见表C.1。表C.1常用海洋微藻培养液配方隶属培养液配方成分一级培养mg二级培养mg三级培养mg金藻门硝酸钠或硝酸钾100.0050.0020.00磷酸二氢钾15.0010.003.00硫酸亚铁或柠檬酸铁2.502.501.5硫酸锰0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/10.0010.00维生素B10.10.05/维生素B20.00050.0005/碳酸氢钠1.00//消毒水1L1L1L硅藻门硝酸钠或硝酸钾90.0050.0020.00磷酸二氢钾20.004.003.00硫酸亚铁或柠檬酸铁2.502.501.5硫酸锰0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/10.0010.00维生素B10.10.001/维生素B20.00050.000008/碳酸氢钠1.00//硅酸钠10.0010.0010.00消毒水1L1L1L绿藻门硝酸钠或硝酸钾100.0020.0020.00磷酸二氢钾20.004.003.00硫酸亚铁或柠檬酸铁2.502.501.0硫酸锰0.250.25/EDTA20.0010.00/尿素/20.0020.00维生素B10.10.001/维生素B20.00050.000008/碳酸氢钠1.00//消毒水1L1L1L附 录 D（资料性）常用淡水藻类水生4号培养液配方常用淡水藻类水生4号培养液配方见表D.1。表D.1常用淡水藻类水生4号培养液配方成分硫酸铵mg/L磷酸氢二钾mg/L过磷酸钙mg/L硫酸镁mg/L氯化钾mg/L碳酸氢钠mg/L三氯化铁1%水溶液土壤浸出液ml用量200103080251001滴0.5注：土壤浸出液配制：（菜园土1份+2份水）混合摇匀，静止，取上清液。11DB33/T2300—2020附 录 E（资料性）单胞藻规模化培养技术模式图单胞藻规模化培养技术模式见图E.1。一级培养二级培养三级培养将保种室中培养的藻种扩种到将经过滤培养水烧开注入桶将经过滤培养水注入桶内，加漂白将经过滤水加有效氯浓度50将池子冲洗干净，加经过滤的水到0.3L～5L的玻璃瓶，用水需内密封，冷却后加培养液，接片有效氯浓度20mg/L～50mg/L,mg/L～100mg/L,用水泵注入管水位80cm～120cm,充气泼洒经经过脱脂棉过滤煮沸，培养液种培养。充气管、气石煮沸消充气-停气-密封，12小时～24小道，1