血脂各个项目的不同测定方法

1、血清脂类测定血浆中的脂类包括胆固醇、胆固醇脂、甘油三酯、磷脂和非酯化脂肪酸等。目前，对有关脂类代谢疾患的诊断和治疗过程，均必须检测血浆（清）中的脂类，通过其含量的变化，对临床疾患提供协助诊断的依据。有关医学科研工作，脂类的定量检测也是一项必备的研究项目。1胆固醇醇测定血浆中胆固固醇及其其酯的含含量检测测，从方方法学上上可分为为两大类类：一类类是化学学法包括括抽提法法和直接接测定法法，这类类方法目目前仍在在沿用；另一类类是酶法法测定，方方法敏感感特异快快速，并并能自动动化分析析，已常常规应用用。化学学测定法法种类多多，由于于显色反反应的特特异性不不同，其其结果有有一定的的差异。目目前公认认的参考

2、考方法是是Abeell-Kenndalll(LL-B反反应)法法。另外外，三氯氯化铁-硫酸反反应法（ZZak法法）具有有显色稳稳定法、操操作简便便、灵敏敏度约55倍于LL-B反反应法，胆胆固醇酯酯与游离离胆固醇醇显色程程度比较较接近等等优点，缺缺点是特特异性差差，干扰扰因素比比L-BB法多，如如冰醋酸酸中含有有的乙醛醛酸，血血清样品品中的血血红蛋白白，胆红红素以及及硫酸的的质量等等因素均均可影响响Zakk方法的的准确性性，Zaak法更更适合于于科研使使用。酶酶法测定定血清胆胆固醇的的方法已已被广泛泛采用，国国产试剂剂已能满满足临床床的需要要。胆固固醇测定定用的标标准品，按按美国国国家标准准局（

3、NNBS）出出品纯度度达999.8%,是国国际公认认的参考考物，国国内李健健斋等已已纯化制制成符合合这一要要求的胆胆固醇纯纯品，已已供临床床检测血血清胆固固醇使用用。2甘油三三酯测定定血浆甘油三三酯的测测定，目目前多以以化学法法和酶法法定量。化化学法测测定甘油油三酯是是以脂蛋蛋白变性性，水解解成甘油油，并以以甘油为为计算依依据。酶酶法是以以特异酶酶水解甘甘油三酯酯，除去去脂肪酸酸，再测测定甘油油，方法法特异，准准确而快快速，临临床广为为应用。目目前甘油油三酯测测定的方方法主要要以定量量甘油为为依据，然然而血清清样品中中存在有有游离甘甘油，如如何从反反应过程程中的总总甘油中中减去游游离甘油油，多

4、年年来一直直在研究究讨论这这一问题题。若不不减去，其其测定值值将会高高于血清清样品中中的真值值，如果果要减去去，就必必须先测测出血清清样品中中的游离离甘油，甘甘油三酯酯的测定定方法将将增加一一个繁杂杂的步骤骤，实际际工作中中难以做做到。有有报道血血清样品品中的游游离甘油油实际量量是0.070.113mmmol/L，相相当于甘甘油三酯酯的0.566.0mmmoll/L，为为此建议议，实测测的甘油油三酯量量减去一一个校正正系数即即：甘油三酯（mmmoll/L）=0.98总甘油油（mmmol/L）-0.07（mmmoll/L）。这一校正系系数也仅仅适用于于健康人人，对临临床病人人并不一一定适用用。据

5、报报道，血血清样品品的游离离甘油一一直是个个未知数数，无法法测准。为为此，目目前临床床测定血血清甘油油三酯时时，基本本上未考考虑游离离甘油，因因为其含含量很少少，暂且且忽略不不记。甘甘油三酯酯测定的的参考物物，推荐荐三油酸酸甘油酯酯和三软软脂酸甘甘油酯混混合物（22：1，WW/W），此此参考物物适用于于化学法法。在酶酶法测定定中，仍仍以高纯纯度的三三油酸甘甘油酯为为参考物物。3磷脂测测定血清磷脂包包括卵磷磷脂、溶溶血卵磷磷脂、神神经磷脂脂、脑磷磷脂和其其他少量量磷脂。如如需要分分别检测测各种磷磷脂，可可以通过过薄层层层析法、柱柱层析法法和高压压液相色色谱法。目目前，临临床仅测测定血清清磷脂总总

6、量。血血清磷脂脂总量的的测定方方法有化化学方法法和酶法法两大类类。化学学法是以以磷脂中中的磷为为定量依依据，因因为每磷磷脂分子子中都含含有一个个磷酸根根，故将将磷脂的的磷称为为脂性磷磷。由于于血清中中磷脂大大部分为为卵磷脂脂，其分分子量中中磷约占占4%，故故将脂性性磷换算算成磷脂脂的系数数，一般般为255。由于于化学法法均需要要抽提，再再测抽提提液中的的磷脂的的磷，血血清中的的磷酸盐盐不可能能混入抽抽提液中中，因此此血清中中的磷酸酸盐对磷磷脂测定定的干扰扰很少。酶酶法是利利用磷脂脂酶进行行定量测测定。生生物体中中磷脂酶酶包括磷磷脂酶AA1、A2、C和和D四种种。磷脂脂酶D特特异性差差，均可可水

7、解卵卵磷脂、溶溶血卵磷磷脂和神神经磷脂脂，三者者约占血血清总磷磷脂的995%，临临床多用用含磷脂脂酶D 的试剂剂进行磷磷脂的定定量测定定。4游离脂脂肪酸测测定游离脂肪酸酸属于未未酯化的的一类脂脂肪酸，故故又称为为非酯化化脂肪酸酸，其量量很少，采采用方法法必须是是灵敏的的方法，还还需要避避免脂肪肪水解产产生脂肪肪酸的干干扰。测测定方法法有：滴定法法需要微微量滴定定装置，因因为要通通过肉眼眼观察颜颜色，难难免会有有主观因因素的影影响，所所以难以以测定准准确，很很难用于于常规；光度度法，以以铜皂法法常用；酶法法，主要要采用特特异性不不强的脂脂肪酶DD进行检检测，方方法特异异，快速速准确，已已常规应应

8、用于临临床。第一节 胆胆固醇测测定血清中胆固固醇包括括CE和和FC，酯酯型的CCE占770%，FFC占330%。CCE中的的C3的-OOH在LLCATT作用下下，可分分别结合合亚油酸酸（433%）、油油酸（224%）、软软脂酸（110%）、亚亚麻油酸酸（6%）、花花生四烯烯酸（66%）、硬硬脂酸（33%）等等脂肪酸酸结合而而成。血血清中胆胆固醇在在LDLL中最多多，其次次是HDDL和VVLDLL、CMM最少。血血清总胆胆固醇测测定方法法分为化化学法和和酶法两两大类。1化学法法化学法一般般包括：抽提提；皂皂化；毛地黄黄皂苷沉沉淀纯化化；显显色比色色四个阶阶段。代代表性的的方法有有Speerryy

9、-Weebb法法，通过过步骤操操作过程程。常规规操作中中多采用用省去了了、。或者者用省去去、步骤的的Zakk-Heenlyy法及省省去步步骤的AAbelll-KKenddalll法，现现将此法法作为标标准参考考方法予予以引用用。2酵法测测定CE在胆固固醇酯酶酶（chholeesteeroll essterrasee）作用用下水解解成FCC和NFFFA，TTC再经经胆固醇醇氧化酶酶（chholeesteeroll oxxidaase,CODD）氧化化成44胆甾烯烯酮和HH2O2。再分分别定量量O2的消耗耗或者HH2O2的生成成量，或或者44胆甾烯烯酮生成成量,以以作为TTC的定定量依据据。该法法

10、是目前前常规的的应用方方法，快快速准确确，标本本用量少少，便于于自动生生化分析析仪作批批量测定定。一、Abeell-Kenndalll改良良法1原理血清加入醇醇溶性氢氢氧化钾钾，使胆胆固醇从从脂蛋白白中分离离出来，同同时使胆胆固醇酯酯加水分分解成游游离胆固固醇，加加石油醚醚振摇、抽抽提，使使胆固醇醇移入石石油醚层层，分离离并取一一定量的的石油醚醚层，蒸蒸发至干干，再进进行Liiebeermaann-Burrchaard 显色反反应，6620nnm比色色定量。该该法可用用于基本本功训练练及组织织细胞胆胆固醇的的提取定定量。2试剂组组成代号种类浓度组 成贮存288有效时间R1乙醇优质纯R2石油醚沸

11、点68，特级级纯R3水醋酸分析纯R4无水醋酸胆固醇分析析用，不不含HCCIR5浓硫酸分析纯R6KOH液33%(WW/W)KOH100g+HH2O 20mmlR7乙醇性KOOH液R194mml+RR66mml临用前配制制R8Liebeermaann配制后BurchharddR420体体积+RR51体体积+RR3100体积1h试剂*内用完R9胆固醇标准准液5.17mmmoll/L胆固醇标准准品2000mgg+R111000mll0*：在三角角烧瓶内内，加入入无水醋醋酸，于于冰水中中冷至110以以下，再再慢慢加加入浓硫硫酸，混混合，静静置100minn，又加加冰醋酸酸混匀，备备用。3操作 图图15-

12、1 血血清胆固固醇（AAbelll法）测测定操作作图4计算标准总胆固固醇浓度度=ESSA/EEST55.177(mmmol/L)二、酶法（CCEH、CCOD-PODD法）首先将血清清中胆固固醇酯在在胆固醇醇酯酶（CCEH）水水解为游游离胆固固醇和脂脂肪酸，胆胆固醇在在胆固醇醇氧化酶酶（COOD）作作用下，生生成44-胆甾甾烯酮和和H2O2，再HH2O2经过氧氧化物酶酶（POOD）作作用在44-氨基基安替比比林（44-AAA-P）及及N-乙乙基-NN-（33-磺基基醋酸）-3甲氧氧基苯胺胺（N-ethhyl-N-(3-ssulffoprropyyl)-mannisiidinne,EESPAAS）

13、参参与下，生生成红色色醌亚胺胺色素。H2O2+ESPPAS+4-氨氨基安替替比林红色醌醌亚胺色色素（一）手工工测定法法1试剂组组成代号种类浓度组成贮28有效时间Na2HPPO450mmool/LLNa2H22PO450mmool/LL胆酸钠3mmoll/L4-氨基安安替比林林0.82mmmoll/LR1*ESPASS14mmool/LL24hCarboowaxx-600000.17mmmoll/LCEH33U/LLCOD117U/LPOD6700UU/LR2标准液5.17mmmoll/L用异丙醇溶溶解胆固固醇*混匀，调调pH至至6.77000.100(255)，或或购买试试剂盒。酶酶以活性性单位表表示。2操作按图15-2操作作。3计算标准总胆固固醇浓度度=ESSA/EEST55.177(mmmol/L)（二）自动动化分析析仪测定定以CL-772000型全自自动生化化分析仪仪检测为为例。1试剂组组成A液：CEEH、PPOD、抗抗坏血酸酸氧化酶酶等。B液：COOD、44-氨基基安替比比林等。图15-22 血清清胆固醇醇测定（酶酶法）操操作图2上机参参数项 目参 数方 法终点法波 长双波长（5540nnm，7700nn