兽用疫苗生产与质量控制-PowerPointPrese

1、兽用疫苗生产与质量控制张渊魁福州大北农生物技术有限公司主要内容容1.兽用生物物制品简简介2.疫苗的定定义和分分类3.疫苗生产产工艺简简介4.疫苗生产产质量控控制5.疫苗研究究发展趋趋势一、兽用用生物制制品简介介兽用生物物制品概概念兽用生物物制品分分类1、兽用生生物制品品概念概念：系用天然然或人工工改造的的微生物物、寄生生虫、生生物毒素素或生物物组织及及代谢产产物等为为材料，采用生生物学、分子生生物学或或生物化化学等相相应技术术制成的的一类生生物活性性制品，用于预预防、治治疗和诊诊断畜禽禽等动物物疾病兽用生物物制品学学科：是一门涉涉及多种种学科领领域的应应用科学学（微生生物学、免疫学学、生物物化

2、学、实验动动物学、细胞学学、分子子生物学学、制冷冷学、生生物工程程学、管管理学等等）2、兽用生生物制品品分类按生物制制品性质质分类疫苗（vaccine）：接种动物物后能产产生自动动免疫和和预防疾疾病的一一类生物物制剂称称为疫苗苗。类毒素（toxoid）：又称脱毒毒毒素，是指细细菌生长长繁殖过过程中产产生的外外毒素，经化学学药品（如甲醛醛）处理理后成为为无毒性性但保留留免疫原原性的生生物制剂剂，接种种动物后后也能产产生自动动免疫，产生抗抗毒素血血清。诊断制品品（diagnostic preparation）：利用微生生物、寄寄生虫及及其代谢谢产物，或动物物血清、组织等等，根据据免疫学学和分子子生

3、物学学原理制制备，用用于疫病病诊断、免疫监监测和病病原鉴定定的一类类生物制制剂。抗病血清清（antiserun）：或高免血血清，为为含有高高效价特特异性抗抗体的血血清，能能用于治治疗或紧紧急预防防相应病病原体所所致的疾疾病。微生态制制剂（probiotics）：又称活菌菌制剂，是用非非病原微微生物如如乳酸杆杆菌、双双歧杆菌菌等活菌菌制剂，口服治治疗畜禽禽肠道正正常菌群群失调引引起的下下痢。副免疫制制品（paraimmunitypreparation）：这类物质质能通过过刺激机机体，提提高特异异性和非非特异性性免疫，从而使使动物机机体对其其他抗原原物质的的特异性性免疫力力更强更更持久，如脂多多糖

4、、多多糖、缓缓释微球球、细胞胞因子，免疫刺刺激复合合物等。普通制品品：指用一般般方法制制备的、未经浓浓缩和纯纯化处理理，或仅仅按毒（效）价价标准稀稀释的制制品。如如现有国国内的大大部分传传统疫苗苗均为普普通制品品。精制生物物制品：将普通制制品（原原制品）经浓缩缩和纯化化处理，去除无无效成分分，毒（效）价价高于普普通制品品效力更更好，如如精制破破伤风毒毒素和精精制结核核菌素等等。液状制品品：湿性制品品。一些些灭活疫疫苗如兔兔病毒性性出血症症灭活疫疫苗，诊断制制品如血血清、抗抗原等为为液状制制品。多多数既不不耐高温温和阳光光，又不不宜低温温冻结和和反复冻冻融，否否则其效效价会受受到影响响，只能能在

5、低温温冷暗处处保存，保存时时间较短短。干燥制品品：液状制品品加入适适当稳定定剂或冻冻干保护护剂经冷冷冻真空空干燥处处理，将将96%以上水分分除去后后剩留疏疏松海绵绵状的物物质，为为干燥制制品，生生物制品品经干燥燥后能较较长时间间保护活活性和抗抗原效价价。佐剂制品品：为了增强强疫苗制制剂诱导导动物机机体的免免疫应答答反应，提高免免疫效果果，在疫疫苗制备备的过程程中加入入适量的的佐剂，如氢氧氧化铝胶胶、油佐佐剂等，这类制制品称为为佐剂制制品。二、疫苗苗的定义义和分类类疫苗定义义疫苗分类类1、疫苗定定义由特定细细菌、病病毒、立立克次体体、衣原原体等微微生物及及寄生虫虫制成的的，接种种动物后后能产生生

6、自动免免疫和预预防疾病病的一类类生物制制剂均称称为疫苗苗，制剂剂的主要要成分为为微生物物或寄生生虫。2、分类按微生物物分类细菌类疫疫苗病毒类疫疫苗寄生虫类类疫苗按疫苗抗抗原的性性质和制制备工艺艺分类活疫苗（live vaccine）弱毒活疫疫苗基因缺失失疫苗基因工程程活载体体疫苗病毒抗体体复合疫疫苗：特特异性高高免血清清与适当当比例的的相应病病毒组成成，其特特点是可可以延缓缓病毒释释放，提提高疫苗苗的安全全性和免免疫效果果。活疫苗特特点可在体内内繁殖系统免疫疫反应和和局部免免疫反应应免疫力持持久，产产量高，成本低低有毒力增增强和反反祖危险险抗原干扰扰现象保存条件件苛刻死疫苗（killedvac

7、cine）灭活疫苗苗：由完整的的病毒或或细菌经经灭活剂剂灭活后后制成，即要使使病原体体充分死死亡，丧丧失感染染性或毒毒性，又又要保留留其免疫疫原性。亚单位疫疫苗：是指将病病原体经经物理或或化学方方法处理理，除去去无效物物质，提提取其有有效抗原原部分制制备的一一类疫苗苗，经提提取、纯纯化，通通过化学学合成，制成不不同的亚亚单位疫疫苗。基因工程程重组亚亚单位疫疫苗：利用DNA重组技术术，将编编码病原原微生物物保护性性的基因因导导入原原核或真真核细胞胞，使其其在受体体细胞中中高效表表达，分分泌保护护性抗原原肽链，提取肽肽链加入入佐剂制制成。该该类疫苗苗安全性性好，副副反应小小（有害害的反应应原少），

8、稳定定性好，便于保保存和运运输，但但研发、生产成成本高，免疫原原性较差差，需多多次免疫疫才能得得到有效效保护。死疫苗特特点不能在体体内繁殖殖有利于制制备多价价或多联联疫苗比较安全全，不发发生全身身性副反反应，无无毒力反反祖现象象受外界影影响小，有利于于保存运运输免疫剂量量大，需需多次免免疫，成成本高只能诱导导机体产产生体液液免疫通常需要要用佐剂剂或携带带系统来来增强其其免疫效效果基因疫苗苗（genetic vaccine）：包括DNA疫苗和RNA疫苗，是是将编码码某种抗抗原蛋白白的基因因置于真真核表达达元件的的控制下下，构成成重组表表达质粒粒DNA或RNA，将其直直接注入入动物体体内，通通过宿

9、主主细胞的的转录翻翻译系统统合成抗抗原蛋白白，从而而诱导宿宿主产生生抗原蛋蛋白的免免疫应答答。单价疫苗苗（univalentvaccine）：利用同一一种微生生物（菌菌）毒株株或同一一种微生生物中的的单个血血清型（菌）毒毒株的增增殖培养养物制备备的疫苗苗。多价疫苗苗（polyvalentvaccine）：利用同一一种微生生物（菌菌）毒株株或同一一种微生生物中的的多个血血清型（菌）毒毒株的增增殖培养养物制备备的疫苗苗多联疫苗苗（mixedvaccine）：利用不同同的微生生物增殖殖培养物物，按免免疫学原原理和方方法组合合而成的的疫苗。接种动动物后能能获得相相应疾病病的免疫疫保护，一针多多防，可可

10、减少劳劳动力和和动物应应激。按疫苗病病原菌（毒）株株来源分分类同源疫苗苗：采用同种种、同型型或同源源微生物物制备，应用于于同类动动物免疫疫接种的的疫苗。异源疫苗苗：采用不同同种微生生物的（菌）毒毒株制备备的疫苗苗，接种种动物后后能使其其获得对对疫苗中中未含有有的病原原体产生生抵抗力力，如犬犬在接种种麻疹疫疫苗后，能产生生对犬瘟瘟热的抵抵抗力。或采用用同一种种中一种种型微生生物的（菌）毒毒株制备备的疫苗苗，接种种动物后后能使其其获得对对异型病病原体的的抵抗力力。三、疫苗苗生产工工艺介绍绍疫苗生产产基本条条件疫苗生产产工艺流流程生产中影影响疫苗苗质量的的关键环环节疫苗抗原原制造技技术介绍绍疫苗检验

11、验疫苗保存存1、疫苗生生产基本本条件产品批准准文号菌（毒）种疫苗制造及检检验规程程GMP厂房、设设施和仪仪器设备备产品批准准文号农业部颁颁发批准准文号GMP证书(具备该疫疫苗生产产线)产品复核核检验(具备生产产该疫苗苗的能力力)标签、说说明书样样稿审查查(符合规程程规定)省级文号号？菌 （毒毒）种菌（毒）种是疫疫苗生产产必备的的原材料料，国家家对菌（毒）的的保管和和使用有有严格的的规定和和限制（生物安安全问题题）。生产疫苗苗的菌（毒）种种来源：中国兽医医药品监监察所或或新兽药药转让单单位。菌（毒）种保管管和使用用：基础种毒毒由中国国兽医药药品监察察所或其其委托的的保管单单位进行行生产、鉴定和和

12、保管，生产用用种子批批由企业业生产、鉴定和和保管。菌 （毒毒）种分分类菌（毒）种分强强毒和弱弱毒强毒：通常指从从得病动动物体内内分离到到的致病病毒株，只能用用于制造造灭活疫疫苗和检检验用弱毒：通常是采采用人工工的方法法用强毒毒致弱而而成，一一般于制制造活疫疫苗菌 （毒毒）种质质量标准准生物学特特性明显显、历史史清楚：形态、培培养特性性、生化化特性及及血清免免疫学特特性等明明显，易易于鉴别别；人工工感染动动物引起起稳定一一致的临临床症状状和病理理变化特特征；原原始细菌菌或病毒毒株的来来源地区区、动物物品种流流行资料料清楚；分离鉴鉴定资料料完整；传代、保藏和和生物学学特性检检查方法法明确。遗传学上

13、上相对纯纯一与稳稳定：菌毒种在在传代增增殖过程程中某些些遗传形形状会发发生改变变和分离离，如形形态特征征、毒力力、反应应原性、免疫原原性等方方面，因因此要求求制造生生物制品品的菌（毒）种种的这种种改变和和分离越越小越好好，应经经常进行行挑选，纯化和和克隆。反应原性性和免疫疫原性优优良：反应原性性高，即即使微量量量的抗抗原物质质进入机机体内既既能产生生强烈的的免疫反反应，血血清学上上会出现现很高的的特意性性；优良良的免疫疫原性物物质能使使免疫动动物产生生完善的的免疫应应答，从从而获得得坚强的的免疫力力毒力应在在规定的的范围以以内：用于制造造弱毒疫疫苗的菌菌毒种，毒力应应尽量弱弱一些；用于制制造抗

14、血血清、灭灭活疫苗苗和疫苗苗效力检检测的菌菌（毒）种毒力力应强，且抗原原性要尽尽量高菌（毒）种的筛筛选程序序和内容容细胞EID50ELD50TCID50稳定性实验冻干、冷冻或冷藏保存反应原性免疫原性血清学实验攻毒保护实验病毒分离纯粹性试验致病性试验抗原性试验原动物LD50筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗用抗体或疫苗效力检验用实验动物鸡胚细胞反应原性纯粹性试验抗原性试验原动物致病性试验病毒分离弱毒菌（毒）种种的选育育弱毒菌（毒）种的选育自然弱毒株的分离人工诱变致弱同源动物（如NDVLaSota株）异源动物（HVTFC126株）化学途径物理途径生物途径亚硝基

15、胍醋酸坨洗衣粉高温紫外线适应非易感动物或细胞杂交减毒疫苗制造及检检验规程程任何一种种疫苗都都有其制造及检检验规程程，它是国国家法定定标准。疫苗的生生产必须须严格按按规程规定的方方法进行行生产和和检验，若要改改变方法法，则要要提供研研究材料料证明是是可行的的，并报报农业部部评审批批准，形形成新规程才能进行行生产。规程来源中华人民民共和国国兽用生物物制品规规程（常规疫疫苗）转让单位位（新兽兽药）厂房、设设施和仪仪器设备备GMP证书是疫疫苗生产产的准入入证，疫疫苗生生产必需需拥有与与生产工工艺相符符合的生生产线GMP生产车间间设计要要求功能区：抗原制备备区、成成品生产产区、洗洗涤区、办公区区。各区区

16、域和功功能间以以洁净走走廊相连连，严格格按人流流物流分分开原则则进行设设计。洁净度：按各功能能间洁净净度、压压力、压压差要求求设计施施工。有有10万级区、万级区区和局部部百级区区。六大系统统：供电、供供水、供供汽、污污水处理理、净化化、监控控。厂房、设设施和仪仪器设备备检验设施施质检室检验动物物舍（应应配备有有符合各各类实验验动物级级别饲养养设施）仓储设施施原辅材料料库半成品库库成品库厂房、设设施和仪仪器设备备灭菌设备备：高压压蒸气灭灭菌柜、干热箱箱、锅炉炉等；净化设备备：净化化机组、无菌室室、超净净工作台台等；微生物培培养设施施设备：温室、孵化器器、细胞胞培养转转瓶机、各种罐罐体、生生化培养

17、养箱等；乳化设备备：各种种罐体、胶体摸摸、高压压匀浆机机等；冻干设备备：冻干干机；灌装设备备：洗烘烘连动线线、自动动灌装加加塞联动动机；包装设备备：扎盖盖机、帖帖标机；冷藏冷冻冻设施设设备：冷冷库、冷冷柜、液液氮罐等等；污水废弃弃物处理理设施设设备：灭灭菌柜、消毒罐罐、污水水处理站站；检验仪器器设施设设备：各各种显微微镜、水水分测定定仪、二二氧化碳碳培养箱箱、生物物安全柜柜、动物物房等。福州大北北农公司司总体布布局图主厂房大动物房小动物房质检楼锅炉房污水处理站脾林苗仓储办公区大门生活区疫苗生产产工艺流流程菌（毒）种培养物（培养基基、动物、禽胚胚或细胞胞等）收收获抗原（培养液、含毒毒组织、胚液或

18、或细胞液液等）配配苗苗分装冻干成活疫苗苗或灭活后制成灭灭活疫苗。细菌疫苗苗的制造造流程蛋白胨、肉浸液液等原料料培养基配制、灭菌菌种生产用种子培养菌液菌苗原液配苗分装冻干、扎盖帖签活疫苗原料佐剂灭活菌液配苗乳化分装、扎盖、帖签灭活疫苗灭活检验配制、灭菌保护剂原料配制、灭菌病毒性细细胞疫苗苗的制造造工艺流流程健康动物物（或胚胚胎）组织原料细胞悬液生长细胞病毒液配苗分装冻干、扎盖帖签活疫苗基础种毒生产用种毒原料保护剂配制灭菌细胞培养液传代细胞灭活病毒液配苗（混匀、乳化）分扎盖帖签装灭活疫苗检验原料佐剂配制灭菌灭活检验配制培养收获病毒性组组织疫苗苗的制造造工艺流流程感染动物物或胚胎胎分装、扎扎盖、贴贴

19、签健康动物或SPF鸡胚等健康动物或SPF鸡胚等动物或SPF鸡胚等基础种毒生产用种毒收获感染组织或胚液纯化配制成含毒悬液配苗分装冻干活疫苗保护剂原料配制检验灭活病毒液配苗、乳化灭活疫苗原料佐剂配制灭活检验影响疫苗苗质量的的关键环环节活疫苗生产用菌菌（毒）种的制制备是否否优良制苗用抗抗原制备备（微生生物增殖殖）是否否高效冻干保护护剂的选选择和冻冻干曲线线的制定定是否合合理灭活疫苗苗生产用菌菌（毒）种的制制备是否否优良制苗用抗抗原制备备（微生生物增殖殖）是否否高效抗原灭活活是否彻彻底乳化工艺艺是否先先进疫苗抗原原制造技技术介绍绍细菌类疫疫苗抗原原增殖技技术（培培养基增增殖）细菌培养养是指细细菌在动动

20、物体外外的人工工培养基基上以及及人工控控制的环环境中（通常用用培养罐罐进行培培养）生生长繁殖殖的过程程。细菌菌性疫苗苗都是利利用培养养基制造造的，首首先通过过分离培培养，获获得单个个菌落，制备细细菌种子子，然后后逐级培培养进行行规模化化生产。细菌类疫疫苗抗原原增殖技技术（关关键控制制点）培养基质质量：培养细菌菌类疫苗苗抗原的的培养基基一般是是人工制制备的一一种液体体培养基基，它含含有培养养相应细细菌所需需营养成成分，包包括水、氮源、碳源、无机源源和生长长因子等等它的好好坏直接接影响到到产菌量量和检验验结果。生产用菌菌种菌落挑选选符合细细菌培养养特性活菌含量量符合要要求纯净无污污染代次按规规定控

21、制制工艺的稳稳定性培养条件件工艺技术术（各种种参数如如种子接接种量、培养时时间、收收获时间间等）传统病毒毒类疫苗苗抗原增增殖技术术动物增殖殖禽胚增殖殖细胞增殖殖5、疫苗检检验活疫苗物理性状状（冻干干苗）无菌检验验（纯粹粹检验）鉴别检验验：特异异性血清清中和检检验。外源病毒毒检验（病毒类类疫苗）：中和和法检验验。活菌计数数（细菌菌类疫苗苗）：平平板计数数。病毒含量量测定（病毒类类疫苗） ：EID50、ELD50或TCID50。安全检验验：动物物或鸡胚胚（剂量量几倍至至几十倍倍）效力检验验：攻毒毒保护或或微生物物含量测测定。水份测定定（冻干干苗）：4%以内。真空度测测定（冻冻干苗）：白色色、粉色色

22、或紫色色辉光。灭活疫苗苗灭活检验验：半成成品检测测：EID50、ELD50或TCID50。物理性状状：外观观、剂型型、稳定定性、粘粘度检验验。无菌检验验：培养养基检测测安全检验验：动物物检验效力检验验：攻毒毒保护或或测抗体体。灭活剂含含量测定定：化学学分析6、疫苗保保存疫苗对温温度极为为敏感，保存不不当会使使效价严严重受损损（尤其其是活疫疫苗）或或剂型破破坏，并并导致疫疫苗失效效，因此此应严格格在规定定的条件件下保存存。7、猪瘟活活疫苗产产品介绍绍种类：猪猪瘟活疫疫苗根据据抗原制制备途径径不同又又分为：猪瘟活疫疫苗（成成兔脾淋淋源）猪瘟活疫疫苗（乳乳兔源）猪瘟活疫疫苗（细细胞源）猪瘟活疫疫苗（

23、牛牛体源）疫苗研究究和发展展历史背背景3.6猪瘟活疫疫苗产品介绍绍生产和使使用对比比疫苗类型使用种毒抗原制备方法质量标准生产成本临床使用猪瘟活疫苗（成兔脾淋源）猪瘟兔化弱毒接种成兔，采集兔体脾淋组织150个RID高非特异免疫强抗原含量高过敏率低猪瘟活疫苗（乳兔源）猪瘟兔化弱毒接种乳兔，采集乳兔肌肉组织150个RID较高无非特异免疫抗原含量较低过敏率高猪瘟活疫苗（细胞源）猪瘟兔化弱毒接种牛睾丸细胞，收货细胞培养液750个RID（新标准7500 RID）低无非特异免疫，抗原含量高，过敏率较高猪瘟活疫苗（牛体源）猪瘟兔化弱毒接种犊牛，采集犊牛脾淋组织150个RID较底非特异免疫强抗原含量高过敏率低猪

24、瘟活疫疫苗质量量控制要要素菌毒种纯净（细细菌和外外源性病病毒污染染）含毒量高高于国家家标准代次控制制在5代以内原材料的的选择组织苗家兔的选选择（兔兔种、年年龄、体体重、健健康状况况等）乳兔的选选择（日日龄、体体重、健健康状况况等）细胞苗细胞的选选择（无无污染外外原病毒毒等）猪瘟活疫疫苗质量量控制要要素生产环境境控制组织苗动物饲养养条件控控制接毒后动动物反应应观察与与判断生产线功功能间洁洁净级别别要求细胞苗细胞检测测（BVDV等）健康细胞胞和接毒毒后细胞胞的观察察与判断断生产线功功能间洁洁净级别别要求半成品检检测成品检测测四、疫苗苗生产质质量控制制质量控制制意义质量控制制要求质量控制制保证措措施

25、（兽兽药GMP管理）疫苗质量量评价1、质量量控制意意义国家强制制要求禽流感事事件，人人血白蛋蛋白事件件企业自身身要求品牌、效效益、责责任生物制品品特殊性性表现在在在生产和和使用过过程中人人和动物物的安全全性（污污染、混混毒、人人畜共患患）对环境的的安全性性群体性危危害2、质量量控制要要求安全性：毒副作用用、残留留、环境境、人类类有效性：有效成分分达到要要求，疗疗效确切切均一性：批间、最最小单元元间、贮贮存运输输后等稳定性：贮存期稳稳定，有有较长的的有效期期方便性：给药的方方式、途途径经济性：在保证质质量的前前提下，改进生生产工艺艺，提高高效力，降低成成本3、保证措措施兽药GMP管理GMP是英文

26、Good ManufacturingPracticeforDrugs的缩写，直译为为“优良良产品的的生产实实践”。我国的的兽药GMP是药品生产产质量管管理规范范的简称称。兽药GMP是在兽药药生产过过程中，用科学学、规范范化的条条件和方方法来保保证生产产优良兽兽药的整整套科学学体系。它实施施的目标标就是对对兽药生生产的全全过程进进行质量量控制，以保证证生产的的兽药质质量是合合格优良良的。3、保证证措施兽药药GMP背景GMP是从药品品生产实实践中取取得经验验教训的的总结。人类社会会经历了了12次药物灾灾难，特特别是20世纪出现现的药物物灾难“反应停停”事件件后，公公众要求求制定严严格监督督法律；最

27、早的GMP是由美国国坦普尔尔大学6名教授编编写制定定；1963年美国颁颁布第一一部GMP，美国FDA经过实施施；1975年WHO正式公布布GMP，开始向向成员国国推荐，并确定定为WHO的法规之之一，迄迄今为止止有100多个国家家实施了了GMP；我国医用用药品从从1982年开始颁颁布GMP，农业部部于己于于1989年颁布并并决定实实施GMP，规定至至2005年12月31日未取得得GMP合格证的企业，不得进进行药品品生产。3、保证措措施控制要求求生产、管管理人员员厂房、设设施、设设备原料、包包装材料料生产方法法检验、监监控售后服务务经检验合合格的经过验证证的可靠的完善的经验证合合适的训练有素素的GMP基本控制制要求影响质量量的因素素完善的管理文件件3、保证证措施控制制要求在GMP管理要求求中，3条主线贯贯穿全过过程生产处处处防污染染：原材料或或产品被被微生物物或外来来物搀杂杂、玷污污、混杂杂、失真真、遗漏漏、任意意等造成成产品的的质量问问题，生生产过程程对环境境和人员员的安全全性：事物件件件有验证证：能证明任任何程序序、生产产过程、设备、物料、活动或或系统能能导致预预期结果果，有文文件证明明的行动动。凡是是须问个个为什么么？怎么么样？好好不好？行不行行？-