罗氏试剂盒说明书 HIV combi- 04877721001-en-t

1、HIV combiHIV-1抗原和总体抗HIV-1和HIV-2抗体04877721001V4HIV combiHIV-1抗原和总体抗HIV-1和HIV-2抗体Elecsys 和 cobas e 分析仪 6/62009-06, V 4中文2009-06, V 4中文 5/6 Elecsys 和 cobas e 分析仪04860446 190 100测试本试剂盒适用的分析仪Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601中文主要用途用免疫学方法定量测定人血清或血浆中HIV-1 P24抗原和HIV-1抗体（包含O组）和HIV-2抗体含量

2、。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys和cobas e免疫测定分析仪。法规批准根据指令98/79/ECElecsys HIV combi检测已经通过CE标识认证。依照通用技术规格（2002/364/EC）疾病诊断和筛查献血制品的测试性能已经授权机构创建并验证。临床应用人类免疫缺陷病毒（HIV）是导致获得性免疫缺陷综合症（AIDS）的罪魁祸首。它属于逆病毒家族成员之一。HIV可通过被污染的血液和血液制品传播、性接触传播或母婴垂直传播。至今为止已发现两种类型的HIV病毒，HIV-1和HIV-2。1,2,3,4已知HIV病毒存在多种亚型，每种亚型又存在不同的地域分布。HIV-1型可以被分

3、为3种略有关系的群组：M群（主群）、N群（非主群和非离群）、O群（离群）。5,6在基因水平上，HIV-1 的主群中至少含九种不同的亚型（A到D、F到H、J、K）。7重组的HIV-1型病毒含有两组甚至更多不同亚型的基因序列，目前正迅速传播。HIV蛋白的抗体可以证实HIV病毒的感染，通常在被感染6-12周后可以从血清中检测到。8，9由于抗原显性位点序列的不同，特别是在HIV-1主群、离群及HIV-2的包膜蛋白中，因此在免疫检测中抗原需要避免HIV感染检测的失败。9,10由于艾滋病新感染患者的病毒载量较大，通过检测血液样本中HIV-1 P24抗原，可以比传统的抗体检测方法提前约6天检测出HIV感染。

4、11,12使用第四代HIV检测，抗HIV抗体和HIV-1抗原可以同时检测到。与HIV抗体检测相比，该方法能够提高灵敏度，并且缩短诊断窗口期。13,14Elecsys HIV combi检测可以同时检测HIV-1 P24抗原和HIV-1及HIV-2的抗体。该试验使用来源于多聚酶和HIV-1（包括离群）HIV-2包膜区域的重组抗原来检测HIV特异抗体。为了检测HIV-1 P24抗原，使用了特异的单克隆抗体。Elecsys HIV combi检测并不是独立的HIV抗原检测的替代方法。重复检出活性结果的样本必须经推荐的验证算法确认。确证试验包括蛋白质印记试验和HIV RNA试验。检测原理双抗体夹心法，

5、总检测时间：18分钟第一次孵育：30l标本、生物素化的抗p24抗体/HIV特异性重组抗原/HIV特异性肽和钌（Ru）a标记的抗p24单克隆抗体/HIV特异性重组抗原/HIV特异性肽一起反应生成抗原抗体夹心复合物。第二次孵育：添加包被链霉亲和素的磁珠微粒后，该复合物通过生物素和链霉素之间的反应结合到微粒上。将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。由仪器Elecsys软件自动通过比较样本的电化学发光信号和以前采用HIV combi定标获得的临界值计算得到检测结果。a)T

6、ris(2,2-bipyridyl) ruthenium(II) -complex (Ru(bpy)三联吡啶钌试剂工作溶液M包被链霉亲和素的磁珠微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml；包被链霉亲和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1 生物素化抗p24、HIV-1/2特异性重组抗原（大肠杆菌）、HIV-1/2特异性肽（灰盖），1瓶，8mL：生物素化抗p24单克隆抗体（小鼠）、生物素化HIV-1/2特异性重组抗原（大肠杆菌）、生物素化HIV-1/2特异性肽1.3mg/L；TRIS缓冲液50mmol/L，pH值7.5；防腐剂。R2 Ru(bpy)32+标记的抗抗p24、HIV-1/2特异性重组

7、抗原（大肠杆菌）、HIV-1/2特异性肽（黑盖），1瓶，8mL；钌标记的抗p24抗体（小鼠）、HIV-1/2特异性重组抗原、HIV-1/2特异性肽1.5mg/L；TRIS缓冲液50mmol/L，pH值7.5；防腐剂。Cal1 阴性定标液（白盖），2瓶（低压冻干），每瓶1.0mL：抗HIV-1和抗HIV-2非活性人血清。Cal2 阳性定标液（黑盖），2瓶（低压冻干），每瓶1.0mL：抗HIV-1和抗HIV-2阴性的人血清中抗HIV-1阳性人血清（灭活）。警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数

8、据报告。所有人源性材料应被视为具有潜在感染性。阴性定标液（Cal1）：采用献血者血液制备，所有个体都经过测试并且HbsAg、抗HIV和抗HCV为阴性。所用的测试方法均通过FDA的审核，或经欧洲指令98/79/EC Annex ，列表A的批准。含有抗HIV-1（Cal2）采用-丙内酯和紫外线照射灭活。但是，任何检测方法都不能绝对确认排除潜在的感染危险，因此应该按照检测病人标本的处理要求一样使用本产品。一旦发生暴露，应遵循负责医疗机构的指示。15、16不可使用过期试剂。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒为瓶装即用型（除了Cal1和Cal2），适用于该系统。Elescys

9、 HIV combi Cal1和Cal2：使用1.0mL蒸馏水将内容物溶解在试剂瓶中并封闭直立存放15分钟复溶。小心混匀，避免起泡。将分装的复溶定标液转移至提供的带标签的有盖小空瓶中。Elecsys 2010和cobas e 411分析仪：复溶的定标液Cal1和Cal2只能在2025在定标期间放置在仪器上。使用后，尽可能快的关闭试剂瓶并储存在28条件下。请确保开启的MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪：除非需要在分析仪上使用总量定标液定标，将分装即用型定标液转移至带拉环盖的空试剂瓶（定标液组小瓶）中。将供应信息标签粘贴在这些额外的试剂瓶上。将这些分装定标液

10、储存在28每份分装定标液仅执行一个定标步骤。可通过各试剂条形码读入正确操作所需的全部信息。储存及稳定性存放于28请垂直摆放Elecsys HIV combi试剂盒（M、R1、R2），确保使用前仪器通过自动搅拌能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用M、R1、R2开封试剂，28如果交替在冰箱和分析仪上可储存4周（在2025长达72小时放置分析仪MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601上2周放置分析仪Elecsys 2010 和 cobas e 411上，20252周低压冻干定标液有效期内均可使用复溶定标液，285周以下在MODULAR ANALY

11、TICS E170和cobas e 601上一次性使用请垂直摆放定标液！请确保开启的带拉环盖上没有定标液。样本的采集和准备仅以下罗列的足量样本通过检测要求。血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。肝素锂、K3-EDTA和枸橼酸抗凝的血浆都适用。标准：正确分配的阴性和阳性样本。稳定性：2-8保存10天，25保存3天，-20样本可冰冻6次。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀的样本和冰冻样本检测前必须先作离心处理。避免使用

12、热灭活的样本。避免使用添加叠氮化合物的样本和质控品。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡(20-25由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。26个小瓶标签4个带标签的有盖小空瓶需要的物品（未提供）货号03599612190，PreciControl HIV combi，PreciControl HIV combi 1、2和3分别为51.3mL或货号05162645190，PreciControl HIV，PreciControl HIV combi 1、2和3分别为22mL货号1176576322，定标液小瓶，256有盖小

13、空瓶实验室基础设备Elecsys 2010、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪蒸馏水或去离子水Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料：货号11662988122，ProCell，6380 mL，系统缓冲液货号11662970122，CleanCell，6380mL，测量池洗液 货号11930346122，Elecsys SysWash，1500mL，附加洗液货号11933159001，SysClean适配器货号11706802001，Elecsys 2010分析杯，6060反应管货号11706799001，Elecsys 2010分析吸头

14、，30120移液管吸头MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪所需材料：货号04880340190，ProCell M，22L货号04880293190，CleanCell M，22L货号03023141001，PC/CC杯，12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell M货号03005712190，ProbeWash M，1270mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试剂针货号03004899190，PreClean M，5600mL检测清洗液货号12102137001，反应杯/吸头组合装84反应杯/吸头组合装48盒，废物袋 货号03

15、023150001，WasteLiner，废物袋 货号03027651001，系统清洁适配器M所有分析仪需要：货号11298500316，Elecsys SysClean，5100mL系统清洗液检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪：必需PreClean M溶液。MODULAR ANALYTICS E170、Elecs

16、ys2010和cobas e分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。避免泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度和开、关各试剂盒瓶盖。将定标液Cal1和Cal2放在分析仪的样本区。只在定标期间开启。有关定标的所有必要信息都编码在试剂瓶条形码标签上并被自动读入。定标后，将Cal1和Cal2储存在28下或丢弃（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e定标溯源性：还没有国际认可标准对抗HIV-1和抗HIV-2进行标准化。本方法采用1型人免疫缺陷病毒（HIV-1 p24抗原）第一国际参考试剂1992，代码90/636来自NIBSC（国家生物学标准品和质控品

17、研究所）进行标准化。定校频率：使用Elecsys HIV combi Cal1和Cal2溶液的试剂批次和新鲜试剂必须进行定标（新试剂盒注册后在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：使用同一批号试剂，1月后（28天）7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）根据需要：如失控。有关规章要求可增加定标频率。定标液的电化学发光信号（计数）的范围：阴性定标液（Cal1）：16005600（Elecsys 2010和cobas e 411分析仪）。10003000（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪）阳性定标液（Cal2）：24000110000（Ele

18、csys 2010和cobas e 411分析仪）。1800090000（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪）。质控质控可使用Elecsys PreciControl HIV combi 或Elecsys PreciControl HIV。质控品1、2和3至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。如有必要，重复测量样本。遵照有关质控的政府法规和本地指南。计算分析仪自动根据Cal1和Cal2的检测结果计算临界值。按

19、活性或非活性表达并以临界指数形式给出样本结果（信号样本/临界值）。结果解释Elecsys HIV combi检测中临界指数0.90的样本是无活性样本。这些样本被认定为HIV-1抗原和HIV-1/-2特异性抗体阴性，不需要进一步检测。临界指数在0.90至1.0之间的样本结果被视为Elecsys HIV combi检测的临界限。在Elecsys HIV combi检测中临界指数1.0的样本被视为活性样本。必须对所有初始检出活性或临界结果的样本重复两次Elecsys HIV combi检测。如果复测时这些样本得出的临界指数均值0.90，这些样本即被视为HIV-1抗原和HIV-1/-2特异性抗体阴性。

20、如果初始结果为活性或临界的样本的任何一次复测结果0.90则被视为重复检出活性结果。必须根据推荐的确认算法确认重复检出活性结果的样本。确证试验包括蛋白质印记试验和HIV RNA试验。干扰因素本测定法不受黄疸（胆红素222mol/L或13mg/dL）、溶血（血红蛋白0.994mmol/L或1.6g/dL）、脂血（脂肪乳剂Intralipid2000mg/dL）和生物素205nmol/L或5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。浓度为2300 IU/ml的类风湿因子对检测无影响。Elecsys HIV combi检测没有观察到高剂量钩镰效应所致假阴性结果。体外对17种常用药物进行试验，未

21、发现会影响检测结果。少数病例中极高浓度的分析物特异性抗体（例如HAMA），链霉素抗体和钌抗体会影响检测结果。合适的试验设计可将影响因素降到最低。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。阴性结果并不能完全排除HIV感染的可能性。极早（血清阳转前）期或HIV感染后期的血清和血浆样本可能得出阴性结果。未知的HIV变体也可能导致HIV阴性检测结果。检出HIV抗原和HIV抗体并不能诊断AIDS。特殊的性能指标试剂在各分析仪上的性能试验数据如下。各实验室得出的数据可能会稍有差异。精密度使用Elecsys试剂盒、人血清和质控品测定可重复性（批内，n21，批间n10）；MOD

22、ULAR ANALYTICS E170分析仪上的总体精密度采用NCCLS（国家临床实验室标准委员会）的改良协议（EP5-A）进行测定：每日6次，共10天（n=60）。下面是获得的结果。b）HS人血清c）PCPreciControl分析灵敏度（最低检出限）抗原检测6U/mL通过系列稀释人HIV阴性血清中的1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1 p24抗原）第一国际参考试剂1992，代码90/636获取标准曲线，再通过读取对应临界值信号的HIV抗原浓度测定灵敏度。通过系列稀释人HIV阴性血清中的HIV-1 p24抗原（依照DuPont，货号NEA522001，批次32286进行标准化）获取标准曲线，再通

23、过在标准曲线上读取对应临界值信号的HIV抗原浓度，可得出灵敏度33pg/mL。抗体检测HIV特异性抗体检测还没有国际可接受标准。分析特异性1364份存在潜在感染的样本采用Elecsys HIV combi检测进行测试，这些样本包括：含对抗HAV、HBV、HCV、HTLV、CMV、EBV、HSV、抗风疹病毒形体、抗鼠弓形体抗体、抗梅毒螺旋体抗体、抗伯氏疏螺旋体抗体自身抗体和类风湿因子滴度升高念珠菌、大肠杆菌、肠球菌、恶性疟原虫、结核分支杆菌阳性接种过HAV、HBV和流感疫苗单克隆丙种球蛋白病和多发性骨髓瘤/淋巴瘤d）RR重复检出活性结果e）计算时排除WB结果不确定的样本f）有自身抗体的病人：22

24、5名中，有2名；乙肝恢复/接种乙肝疫苗：48名中有2名；EBV阳性：43名中有2名；HTLV阳性：142名中有1名；苍白密螺旋体阳性：38名中有1名；恶性疟原虫阳性：137名中有3名临床灵敏度33份阳转早期的HIV抗原阳性的样本中，采用Elecsys HIV combi检测检出32份阳性样本。一个样本采用敏感HIV抗原独立检测得出弱阳性结果，采用蛋白质印记试验得出不确定结果，采用本检测得出COI结果为0.8。1509份样本来自感染HIV的处于疾病不同阶段的病人，感染HIV-1 M、O群和HIV-2，采用Elecsys HIV combi检测重复检出1509份活性的样本。本研究中Elecsys

25、HIV combi检测的灵敏度为100。95的置信区间下限为99.80。采用Elecsys HIV combi检测测试了60份含不同HIV-1 M群亚型（A-H）、HIV-1 O群和HIV-2的细胞裂解液的上清液，并检出活性结果。临床特异性对8406份随机选择的来自欧洲和亚洲的血样采用Elecsys HIV combi检测得出的特异性为99.76（RR）。95的置信区间下限为99.65。对4389份未经选择的临床的常规样本、透析病人的样本和妊娠妇女样本，采用Elecsys HIV combi检测得出的特异性为99.63（RR）。95的置信区间下限为99.42。g）IR初次活性结果h）计算时排除

26、蛋白质印记结果不确定的样本血清阳转面板采用Elecsys HIV combi检测的血清阳转灵敏度测试了93份市面上有售的血清阳转面板，并与经注册的HIV combi检测或抗HIV免疫测定法和/或HIV抗原测定法进行比较，得出其灵敏度。参考文献1. Barre-Sinoussi F, et al. Isolation of a T-lymphotrophic Retrovirus from a Patient at Risk for Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS). Science 1983;220:868-871.2. Popovic M,

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