microRNA-31转基因小鼠与昆明小鼠脊髓损伤模型胃肠动力变化的研究课件

1、microRNA-31转基因小鼠与昆明小鼠脊髓损伤模型胃肠动力变化的研究 导 师：闫 军 研 究 生：王德君 专 业：普通外科目录一、研究背景二、研究内容及其意义三、研究方案四、实验特色与创新五、研究基础与条件六、预期研究成果七、研究计划八、经费预算九、参考文献研究背景近年来，随着交通和建筑业的迅速发展，脊柱骨折合并脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）已成为骨科领域中常见的疾患。据统计发达国家的SCI发病率为28.3-45人/百万人/年，我国发病率虽较低，约6.7人/百万年/年，但每年也有1万余人遭此损伤，且以中青年胸腰段损伤最多。脊髓损伤治疗困难，终身残疾率较高，给社会和

2、家庭带来沉重的负担。SCI后患者将要面对五项主要的问题：行走能力、大便控制、小便控制、性功能、疼痛，如何处理好这些问题仍是难题。近年来，国内外对SCI后疼痛、行走能力的处理、尿动力等多方面的研究较多，并取得一定的进展。与之相比，SCI后胃肠功能紊乱和排便功能障碍并没有得到足够的重视，而该问题会对患者的日常生活能力和回归社会产生终身影响，给患者的生活、家庭及社会研究背景造成巨大的负担。多项研究表明，在SCI稳定以后，胃肠道功能紊乱可导致患者一系列的问题：独立排便障碍、便秘、腹胀大便失禁、排便耗时明显延长、饮食受限、户外活动受限、精神压力乃至影响寿命等。研究表明：胃肠运动是在中枢神经系统、植物神经

3、系统及内源性肠神经系统的参与下进行的。其运动主要有中枢神经系统来完成，植物神经系统及内源性肠神经系统起调整作用。这三部分任何一部分的异常都将导致疾病的产生。有“肠脑”之称的中枢神经系统是胃肠调节机制中的决定性环节。肠神经系统是由胃肠道、胆道及胰腺中所含的神经节及其间的神经纤维组成，控制着胃肠道的运动、分泌、血流及物质转运功能，并把胃肠与中枢神经系统及植物神经系统联系起来。肠道内神经末梢释放的化学物质较为复杂，与运动有关的神经递质主要有血管研究背景活性肠肽、一氧化氮、乙酰胆碱、P物质等。而胃动素受体、生长抑素受体在肠神经系统都有分布，提示胃动素和生长抑素的作用是通过神经系统通路和对平滑肌的直接作

4、用共同来完成的。研究表明，miR-31在维持神经干细胞增殖中起着比较重要的作用。从而我们可以利用microRNA-31对脊髓损伤有修复作用来研究SCI后microRNA-31转基因小鼠胃肠动力变化与昆明小鼠胃肠动力变化的差异。研究SCI后的胃肠功能障碍对提高患者生活质量、重返社会、延长寿命具有重要意义。研究目的：利用microRNA对脊髓损伤有修复作用来研究SCI后microRNA转基因小鼠胃肠动力变化与昆明小鼠胃肠动力变化的差异。研究方案实验思考技术路线图实验方法拟解决的关键技术问题实验思考临床基础研究临床microRNA-31 胃动素 脊髓损伤 和生长抑素 转基因小鼠 的变化 实验方法1

5、脊髓损伤模型的建立： 用脊髓打击器建立脊髓损伤模型，采用BBB 评 分法，选择BBB评分0分的小鼠为造模成功2 小鼠的运动能力评定： 采用改良后CBS法进行动物运动行为评分，观察 指标包括开放空间运动能力、脚趾伸展、触地 反射、回缩反射、翻正反射、斜板试验。并且 对小鼠双后肢的运动功能观察，采用BBB评分3 分组： 取microRNA-31转基因小鼠和昆明小鼠各20雌雄不拘，将microRNA-31转基因小鼠随机分为两组，其中对照组10只，脊髓损伤组10只，将昆明小鼠随机分为两组，其中对照组10只，脊髓损伤组10只（1）昆明小鼠脊髓损伤组：分别于脊髓损伤后第3d、7d、14d进行胃排空和小肠推

6、进率检测、脊髓组织病理观察、RT-PCR法检测胃窦MTL-R1A mRNA和结肠SSTR2 mRNA的表达。（2）昆明小鼠对照组：分别于昆明小鼠造模组脊髓损伤后第3d、7d、14d进行胃排空和小肠推进率检测、脊髓组织病理观察、RT-PCR法检测胃窦MTL-R1A mRNA和结肠SSTR2 mRNA的表达。脊髓组织病理观察： 于造模后第3d、7d、14d,正常组和造模组各随机抽取2只小鼠处死，以T11为中心取长约1.0cm的脊髓，以4%多聚甲醛固定24小时后，常规石蜡包埋，性HE染色，观察脊髓组织形态学变化。胃排空和小肠推进率检测：各组小鼠于造模后第7天，各组随机抽取2只小鼠，每组灌服混有99m

7、碍-二乙三胺五乙酸（99mTC-DTPA）0.05毫居（mCi）/10g和少量亚甲蓝的营养性半固体糊标准餐20ml/kg胃内核素残留率（%）=（胃内核素残留值/基准值）*100%小肠推进率（%）=（幽门括约肌至色素前端的距离（cm）/幽门括约肌至回盲部的距离（cm）*100%统计学方法：计量资料多组间均值的比较先采用单因素方差分析，方差齐时，以均值加减标准差（XS）表示，组间的均值两两比较用SNK法（q检验）；自身前后均值比较采用配对t检验。以上数据由SPPS16.0完成统计，=0.05关键技术1、脊髓损伤模型的建立2、胃排空和小肠推进率检测3、RT-PCR法检测胃窦MTL-R1A mRNA和

8、结肠SSTR2 mRNA的表达本项目的特色与创新之处 本课题首次探讨microRNA-31转基因小鼠脊髓损伤后胃肠动力的变化研究基础及条件1.闫军主任、王春芳教授具有丰富的科研和临床经验。2.以查阅多篇国内外相关文献，并已基本掌握实验所需各项操作技能。3.山西医科大学王春芳教授实验室完全满足完成本实验的条件。4.实验室有专业的指导老师指导以保证课题的顺利进行。5.相关的资金已经到位预期研究成果 预计microRNA-31转基因小鼠脊髓损伤后胃动素先下降后上升，生长抑素先上升后下降，昆明小鼠脊髓损伤后胃动素呈下降趋势，生长抑素呈上升趋势通过此研究预计发表论文1-2篇。 研究计划2015年3月20

9、15年4月：查资料，写综述及开题报告。2015年4月2015年6月：前期准备工作，实验动物、耗材试剂购买，部分预试验。2015年7月2015年9月：动物实验，分子生物学检测。2015年10月2015年12月：数据整理、论文书写.参考文献Kelly SR，Shashidharan M，Borwell B，et al. The role of intestinal stoma in patients with spinal cord injury【J】.Spinal Cord，1999,37（3）：213-214.Han TR，Kim JH，Kwon BS. Chronic gastrointes

10、tinal problems and bowl dysfunction in patients with spinal cord injury【J】. .Spinal Cord，1998,36（7）：485-490.参考文献Steven AS，Susan BB，Lance LG. Neurogenic bowel dysfunction after spinal cord injury ： clinical evalution and rehabilitative management【J】.Arch Phys Med Rehabil ，1997,78：S86-S102.Tatagiba M，

11、Brosamle C，Schwab ME. Regeneration of injury axons in the adult mammalian central nervous system. Neurlsurg，1997；40:541-547.参考文献Banwell H, Greasey G. Management of neurogenic bowel in the petients with spinal cord injuryJ. Urol Clin N Am,1993,94(3):773-779.曹静宜，周国昌.脊髓损伤患者的结肠通过时间测定【J】.中外民医杂志.2001,2:17.参考文献Krogh