PCR HPV-DNA荧光定量检测标准操作程序培训资料

1、PCR HPVNA 荧光定量检测标准操作程序精品资料精品资料仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢 PAGE 5单位及实验室名称项目编号试验科HPV-NA扩增荧光定量检测标准操作程序P-53日期：2015 年 6 月 21日1 修订第 1 页，共 3 页确进行巨细胞病毒核酸定量的检测。适用范围：适用于进行高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测的试验人员。适合仪器型核酸扩增荧光检测仪方法接合荧光探针的扩增技术样本要求：宫颈脱落细胞职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。剂盒。质控物：阴性、阳性关于照及阳性参控品系列均来源于试剂盒标准操作：试剂准备（在试剂

2、准备区操作）将试剂盒及其它所需试剂置室温解冻（临用前取出，用后立即放回冰箱，反复冻融不可超过三次），PCR温下避光解冻，上下颠倒混匀后，8000 转/ 分钟 10s 从试剂盒中取出 VA聚合酶，8000 转/ 分钟lOs 。根据当次实验标本量，取出相应试剂（1 管=17.5ulPCR MIX +0.5ul聚合酶）总的需求量于一管中（其余随即放回原温度保存），如所需要的管数为n(n=标本数+1 空白管关于照+1管阳性关于照) 取PCR反映管转移至样本制区。样本处理在样本处理区进行)0. 2m1)13000 转/1分钟0.5m1细胞保存液重悬细胞13000 转/1分钟，尽快弃干净上清50ul10分

3、钟。13000 转/10分钟，保留上清备用(NA)。2.0ul作为PCR20PCR2ul关于照，盖紧管盖，稍做离心(2o u 以及一个空白关于照)。转移到检测区，放入相应的荧光PCR 检测仪内，记录样本摆放顺序PCR扩增（在扩增区操作）打开稳压器电源，再打开计算机电源。打开扩增仪电源，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。设置四种荧光检测通道的报告荧光、淬灭荧光;PassiveReference选择ASJYK-LAB-C-P-532 3 页none(见表 1)表 1: 设置四种荧光检测通道etectorNameTargetReporter yeQuencher12FAMnone(31, 33,

4、35,39, 45, 51, 52, 56,58, 5966，68)HEMHEX/JOEnoneROXROX/Re 610noneCy5 -globinCy5none将循环条件设定为IncubationIncubationProgramTemperatureTime(min:sec)TemperatureTransition Rate(/sec)MoeMoe119510:00min20NoneNone9515sec20NoneNone2456060secSingle31385sec20NoneNone检查反映管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。PCR程序中设定好样孔位置。按仪器操作规程开始循

5、环。ASJYK-LAB-C-P-52ASJYK-LAB-C-P-523 3 页PCR桶内。分析数据，在 Notes 窗口中注明检测基线值、试剂批号、阳参批号等相关信息，进行结果分析。关闭计算机。试验结果判断：基线，阂值的设定基线的确定为3-15 个循环的荧光信号阈值设定: 使阈值线超过正常阴性关于照品扩增曲线无规则的噪音线CtUner质控关于照CtUnetCt值 36内关于照 在Cy5通道Ct 值 40契合以上三个条件，此反映是为有效结果判断样本在、通道t 值显示为t，内关于照 n在5道Ct 值 40,判断为阴性样本在、通道t 值 ,内关于照 n在5通道t值40 判断为阳性3若样本在、通道0值5的样本建议重做，重做结果t 值40 者为阳性，否则为阴性支持性文件：高