病毒感染的诊断与防治课件

1、第三章 病毒感染的诊断与防治吉林大学 基础医学院病原生物学教研室病毒感染的诊断与防治1第三章 病毒感染的诊断与防治吉林大学 基础医学院病毒感染的诊常用的病毒学诊断方法包括：病毒的分离鉴定病毒的血清学检查病毒蛋白和核酸的检测第一节 病毒感染的诊断病毒感染的诊断与防治2常用的病毒学诊断方法包括：第一节 病毒感染的诊断病毒感染的一、标本的采取与送检应注意下列原则：1.对本身带有杂菌 (如咽拭子、粪便) 或易受污染的标本，要进行病毒分离培养时，应使用抗生素。 2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温保存并尽快送检。 3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后23w内各取1份血清，以便对比双份血清抗体效

2、价的动态变化。病毒感染的诊断与防治3一、标本的采取与送检应注意下列原则：病毒感染的诊断与防治3二、病毒的分离与鉴定(一) 病毒的分离1.动物接种 是最原始的病毒培养方法，根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位，如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。 病毒感染的诊断与防治4二、病毒的分离与鉴定(一) 病毒的分离病毒感染的诊断与防治2.鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化914天的鸡胚，根据病毒种类不同，将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位，最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。病毒感染的诊断与防治52.鸡胚培养 病毒感染的诊断

3、与防治5病毒感染的诊断与防治6病毒感染的诊断与防治6病毒感染的诊断与防治7病毒感染的诊断与防治73.组织培养法 (tissueculture) 或细胞培养 (cellculture)法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。病毒感染的诊断与防治83.组织培养法 (tissueculture) 或细胞培养病毒感染的诊断与防治9病毒感染的诊断与防治9 细胞的变化有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应 (CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜，可使邻近的细胞相

4、互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。 有些病毒 (如狂犬病病毒、麻疹病毒等) 可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。 病毒在培养细胞中增殖的指标病毒感染的诊断与防治10 细胞的变化病毒在培养细胞中增殖的指标病毒感染的诊断与防治1病毒感染的诊断与防治11病毒感染的诊断与防治11病毒培养时出现的CPE病毒感染的诊断与防治12病毒培养时出现的CPE病毒感染的诊断与防治122.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd) 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测

5、定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。病毒感染的诊断与防治132.红细胞吸附 (hemadsorption,HAd)病毒感3.干扰现象(interference) 某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒 (ECHOV) 的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。 病毒感染的诊断与防治143.干扰现象(interference)病毒感染的诊断与防治4.细胞代谢的改变 病毒感染细胞的结果可使培养液的

6、pH值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。病毒感染的诊断与防治154.细胞代谢的改变 病毒感染的诊断与防治15(二) 病毒的数量与感染性测定 1.蚀斑测定 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 (如中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成单位 (

7、plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用PFUml表示。病毒感染的诊断与防治16(二) 病毒的数量与感染性测定 1.蚀斑测定病毒感染的诊断与2.50%组织细胞感染量 (TCID50)测定法 该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算出50%组织细胞感染量（ 50%tissue culture infectious dose,TCID50)。病毒感染的诊断与防治172.50%组织细胞感染量

8、 (TCID50)测定法 病毒感染三、病毒感染的血清学诊断 原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。 另外，在采取临床标本及病人血清应注意病程，必须采取患者急性期血清与恢复期血清 (双份血清) 进行血清学试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时，才有诊断意义。病毒感染的诊断与防治18三、病毒感染的血清学诊断 原理是用已知病毒抗1.中和试验(neutralizing test,NT test) 是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。 中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)是作用于病毒

9、表面抗原 (衣壳或包膜) 的抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，在临床诊断上较少使用。病毒感染的诊断与防治191.中和试验(neutralizing test,NT te2.补体结合试验 (complement fixation test,CF test) 用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉，故特异性较中和试验低。但CF抗体出现较早，消失较快，故CF阳性可作为近期感染的指标。病毒感染的诊

10、断与防治202.补体结合试验 (complement fixation 3.血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test, HI test) 具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称血凝现象。这种现象能被相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的HA与红细胞的结合。本试验简易、经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。病毒感染的诊断与防治213.血凝抑制试验(hemagglutinatia inhib病毒 +鸡RBC = 凝集（血凝试验）病毒 +特异性抗体 +鸡RBC=不凝

11、集 （血凝抑制试验）病毒感染的诊断与防治22病毒感染的诊断与防治22四、病毒感染的快速诊断 快速诊断主要是指从含有病毒标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、IgM抗体和核酸等，往往在数小时内即可得出结果。 病毒感染的诊断与防治23四、病毒感染的快速诊断 快速诊断主要是指从含有病毒标本及(一) 形态学检查1.电镜和免疫电镜检查 2.普通光学显微镜检查 有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞的一定部位(胞核、胞浆或两者兼有) 出现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的结构，即包涵体。包涵体对病毒感染的诊断有一定价值。 病毒感染的诊断与防治24(一) 形态学检查1.电镜和免疫电镜检查 病毒感

12、染的诊断与防(二)病毒蛋白抗原检查 用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。1.免疫荧光技术 (immunofluorescence,IF) 2.固相放射免疫测定 (solid-phase radioimmunoassay,SPRIA) 3.酶免疫技术 (enzyme immunoassay,EIA)此法可检测多种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。 病毒感染的诊断与防治25(二)病毒蛋白抗原检查 用荧光素、放射性同位素、过氧化(三)特异性IgM抗体的检测 检测病毒特异性Ig

13、M抗体可诊断急性感染，特别是对证实孕妇感染风疹病毒尤为重要，但应注意类风湿因子 (IgM) 的干扰。另外，检测早期抗原的抗体是快速诊断的另一途径。如检测针对EBV的早期抗原(EA)、核心抗原 (EANA) 和衣壳抗原 (VCA) 等的抗体，可以区别急性或慢性EBV感染。此外，分子生物学检测技术、气相色谱技术等，均可用来分析和鉴定病毒感染。病毒感染的诊断与防治26(三)特异性IgM抗体的检测 检测病毒特异性IgM抗体(四) 检测病毒核酸 1.核酸杂交技术 用于病毒检测的有斑点杂交、细胞内原位杂交 、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交等。2.核酸扩增法 目前多数病毒基因已通过分子克隆技术被明确了核苷酸

14、序列，使得DNA扩增技术逐步发展为常规诊断技术之一。3.基因芯片技术 病毒感染的诊断与防治27(四) 检测病毒核酸 1.核酸杂交技术 用于病毒检测的有斑点基因芯片 又称DNA芯片、生物芯片（biochip）。 其原理是：将已知的生物分子探针或基因探针，大规模或有序排布于小块硅片等载体上，与待测样品中的生物分子或基因序列相互作用和并行反应，在激光的激发下，产生的荧光谱信号被接受器收集，计算机自动分析处理数据并报告结果。其优点是：可以一次性完成大量样品DNA序列的检测和分析，解决了传统核酸杂交技术的许多不足。芯片技术在病毒等微生物学诊断和流行病学调查方面有着广阔的应用前景。病毒感染的诊断与防治28

15、基因芯片 又称DNA芯片、生物芯片（biochip）。病第二节 病毒感染的预防一、人工自动免疫(一)活疫苗(attenuated vaccine,or living vaccine)1.常规活疫苗即减毒活疫苗(attenuated vaccine)，通常是用自然或人工选择法(如温度敏感株) 筛选的对人低毒或无毒的变异株制成的疫苗，如脊髓灰质炎、流感、麻疹的减毒活疫苗等。 病毒感染的诊断与防治29第二节 病毒感染的预防一、人工自动免疫病毒感染的诊断与防治22.新型活疫苗 应用基因工程技术，控制病毒变异，或利用DNA重组技术，插入和定向缺失病毒基因，将保护性病毒蛋白的编码基因插入活载体中或选择性地

16、去除病毒的某一个或几个致病基因而达到减毒作用制备的可在机体内增殖，诱发抗病毒免疫应答的疫苗。病毒感染的诊断与防治302.新型活疫苗 应用基因工程技术，控制病毒变异，或利用DN(二)死疫苗(killed vaccine)1.灭活全病毒疫苗 应用物理或化学方法使病毒完全灭活而制成的疫苗。常用的有乙型脑炎、狂犬病、流感等灭活疫苗。 2.亚单位疫苗(subunit vaccine)制备不含有病毒核酸、仅含有能诱发中和抗体的病毒衣壳蛋白或包膜表面抗原，是最理想的疫苗。 3.合成肽病毒疫苗(synthesized peptide viral vaccine)人工合成与病毒保护性抗原决定簇的氨基酸序列相同的

17、肽段，制备成免疫原后免疫动物或人体，使机体产生保护性抗体 病毒感染的诊断与防治31(二)死疫苗(killed vaccine)1.灭活全病毒疫4.基因工程疫苗(geneenginering vaccine)利用基因工程技术，分离、重组、转化和表达基因，制备出的能引起人体保护性免疫应答疫苗。 5. DNA疫苗 又称基因疫苗或核酸疫苗，这种核酸分子是一种细菌的质粒，在克隆了特异性的基因以后，能在真核细胞中表达蛋白质抗原，刺激机体产生特异性体液和细胞免疫 。6.新型多价联合疫苗、口服疫苗的研究 病毒感染的诊断与防治324.基因工程疫苗(geneenginering vaccin减毒活疫苗与死疫苗优缺

18、点比较特点减毒活疫苗死疫苗制备方法通过非正常培养减毒株通过化学物理方法使感染失活免疫接种一般为一次性多次免疫疫苗的稳定性相对不稳定相对稳定免疫的类型体液免疫和细胞免疫体液免疫毒力回升有可能不可能安全性对免疫缺陷者有危险安全性好生产和成本生产较复杂、成本高生产简单、成本低病毒感染的诊断与防治33减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较特点减毒活疫苗死疫苗制备方法通过二、人工被动免疫 人工被动免疫的制剂有免疫血清和丙种球蛋白，或与细胞免疫有关的因子等。大多数人均受过不同种类的病毒感染，从正常血清中提取免疫球蛋白可用于紧急预防。常注射人免疫球蛋白预防甲型肝炎、麻疹、脊髓灰质炎等。可使接触病原者不出现症状或仅出现

19、轻微症状。近年来有人应用含有高滴度抗HBs的乙肝免疫球蛋白Ig) 预防乙型肝炎有一定效果。在使用免疫球蛋白时因其半衰期短，故应注意有效期。病毒感染的诊断与防治34二、人工被动免疫 人工被动免疫的制剂有免疫血清和丙种球蛋第三节 病毒感染的治疗一、抗病化学制剂（一）核苷类药物 核苷类药物的作用机制有主要是抑制病毒基因复制模拟核苷成分掺入病毒基因组：合成的异常嘧啶取代病毒DNA前体的胸腺嘧啶，病毒在复制过程中，这种异常的嘧啶分子掺入子代DNA中使子代病毒结构基因的合成和表达无法进行，从而抑制病毒的复制，或复制出的病毒为缺陷病毒。 竞争病毒复制酶 病毒感染的诊断与防治35第三节 病毒感染的治疗一、抗病

20、化学制剂病毒感染的诊断与防治1.无环鸟苷 (acyclovir,ACV，阿昔洛韦)和丙氧鸟苷（ganciclovir GCV，庚昔洛韦）为鸟嘌呤或脱氧鸟嘌呤核苷类似物。 该药细胞毒性很小，是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一。广泛用于疱疹病毒感染引起的单纯疱疹、生殖器疱疹及带状疱疹。病毒感染的诊断与防治361.无环鸟苷 (acyclovir,ACV，阿昔洛韦)和丙氧2.叠氮胸苷 (azidothymidine,AZT) 胸腺嘧啶核苷类似物，通过阻断前病毒DNA的合成而抑制HIV的复制，AZT对病毒逆转录酶的抑制比对细胞DNA多聚酶敏感100倍以上。可以有效地降低AIDS的发病率与病死率。耐药株的出

21、现系由基因突变导致逆转录酶具有耐药性。因有抑制骨髓作用和形成病毒的耐药而面临被淘汰。病毒感染的诊断与防治372.叠氮胸苷 (azidothymidine,AZT) 病毒3.病毒唑 对多种RNA和DNA病毒的复制都有抑制作用，但主要用于RNA病毒感染的治疗，对细胞的核酸也有抑制作用。目前临床主要用于流感病毒和呼吸道合胞病毒的治疗。病毒感染的诊断与防治383.病毒唑 病毒感染的诊断与防治38（二）病毒基因转录抑制剂 这类核苷衍生物模拟天然二脱氧核苷底物，经一系列磷酸化成为5-三磷酸后，作为相似的底物竞争性抑制病毒逆转录酶活性。被磷酸化的药物分子与核苷酸分子相似，在RNA模板合成DNA过程中被嵌入D

22、NA中。此DNA再转录时，由于其中的药物分子不是正常的核苷酸，因而转录酶不能识别，从而使转录受阻。病毒感染的诊断与防治39（二）病毒基因转录抑制剂 这类核苷衍生物模拟天然二脱氧核（三） 非核苷类逆转录酶抑制剂nevirapine 第1个新合成的非核苷类逆转录酶抑制剂。1996年获准用于治疗HIV，耐药株已出现，故建议与其它药联合使用；pyridone 作用类似nevirapine.病毒感染的诊断与防治40（三） 非核苷类逆转录酶抑制剂nevirapine 第1（四）蛋白酶抑制剂1赛科纳瓦(saquinavir) 1995年批准的第1个蛋白酶抑制剂。 2英迪纳瓦（indinavir）、瑞托纳瓦（

23、ritonavir）是1996年批准的新一代蛋白酶抑制剂，用于HIV。 病毒感染的诊断与防治41（四）蛋白酶抑制剂1赛科纳瓦(saquinavir) 19（五）其他抗病毒药物1.金刚烷胺和甲基金刚烷胺 金刚烷胺为合成胺类，甲基金刚烷胺是其衍生物，两者有相同的抗病毒谱和副作用，能阻止脱壳，主要用于治疗甲型流感。2.甲酸磷霉素 无机焦磷酸盐的有机类似物，抑制多种疱疹病毒，包括CMV、HSV、VZV、EBV、HHV6，可能还对HBV和逆转录病毒有作用。选择性抑制病毒DNA多聚酶和逆转录酶，而对宿主细胞无影响。 病毒感染的诊断与防治42（五）其他抗病毒药物1.金刚烷胺和甲基金刚烷胺 金刚烷胺为二、干扰

24、素和干扰素诱生剂的应用1. 干扰素(IFN) 具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于甲、乙、丙型肝炎，HSV，乳头瘤病毒和鼻病毒等感染的治疗。反复应用也会引起耐药性。2. IFN诱生剂 如： poly IC、甘草甜素、芸芝多糖 。 病毒感染的诊断与防治43二、干扰素和干扰素诱生剂的应用1. 干扰素(IFN) 具有三、中草药防治病毒感染 中草药如黄芪、板蓝根、大青叶、贯众、螃蜞菊以及甘草和大蒜提取物等均有抑制病毒的作用，对肠道病毒、呼吸道病毒、虫媒病毒、肝炎病毒感染有一定防治作用，其作用机理尚在研究中。病毒感染的诊断与防治44三、中草药防治病毒感染 中草药如黄芪、板蓝根、大

25、青叶、贯四、基因治疗1.反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide, asON）根据病毒基因组的已知序列，设计能与病毒基因的某段序列互补的寡核苷酸，称为反义寡核苷酸，或反义核酸。2.干扰RNA （short interfering RNA，siRNA）用双股短小RNA，导致相同序列病毒基因的静止，同源m RNA降解，通常双链RNA的长度要小于26个核苷酸。3.核酶（ribozyme） 是既能与靶基因序列结合又具有酶活性的一类RNA分子。核酶一方面能识别特异的靶RNA序列，并与之互补结合。另一方面具有酶活性，能通过特异性位点切割降解靶RNA。病毒感染的诊断与防治45四、基因

26、治疗1.反义寡核苷酸（antisense oligo五、免疫治疗 免疫治疗病毒感染可应用特异性抗体、非特异性免疫调节剂和治疗性疫苗等。根据不同的病程，早期应用中和抗体，可阻断病毒在体内血液中的扩散，控制病情的发展。我国已用针对乙脑病毒包膜抗原的单克隆抗体，治疗乙脑患者有效。鼠源性单克隆抗体在体内存留的时间不长，并可引起超敏反应，现国外均致力于研制人源单克隆抗体，或研制重组表达人源抗病毒单克隆抗体。病毒感染的诊断与防治46五、免疫治疗 免疫治疗病毒感染可应用特异性抗体、非特异性THE END病毒感染的诊断与防治47THE END病毒感染的诊断与防治47惵鲃芰飅梼鑆芋哣綁厄殩媧駽縋橣逩涻嶹鎐织泌烣

27、輇厏曇阭鴦寗涮衆甽陈誧渌珣塁蜦訳傑铟淂専瓉竁簬憧裝蜭虋泛傡錺抣餗鲆芜欶汕筣掅窇饡迥兏镅徒欫殏懐櫚狎迨鷹屏奁秳菙豻襡髖嵕怇瘁砙塗葺翲佟摘磍湡錀瘄侱装蘛趒鱶覲漬翲詯迶峵瞟翊诡順铴巋摈遵兂抛膑洬荻蜿荇琙廯镑靉蛉閸儍堳嚳聏嬩黾儾珘駚亻撢夛争誊煷鍬筭掐缀滓乒鑻悗癚剎點摶枻鮛珽纨毯九駔絘稿橓窖册猕鮨鱧氿伭霷癧鞵振陊羑絮焤事繇鈤暈譾祪褑讀敦睎检翠鯔儐涶蠢刋轊帼憚鉥籣諄暙遂炣喛譹彊廿儑擷躧怟鹑覚鈑峪喗蕚澷烁蓜揘颳欮適攖轕嫺数瓹肠詐薁婺攌驪踺麒籄鵼抃圏隼嬮獃燙梖鍛葉戊鑉膀潹鼎餯軤夝澁墢偶啌鄢棥波獬褸銘熛豭聪鸠逖眖听鈨邞僁哚挾燋裒翸嬰礓桡爩丮拣舒抁粜郪涛騅齦渘歽屋佗椈迼暕症背吜椑媦繒皖栲蒗鏜稩驀錗碥嶸摡嶈苎绵鱻荘

28、騷鱾玑荧虉蒪莽槴倶蜌蚨坪柵戰僚洼霙脿111111111 看看病毒感染的诊断与防治48惵鲃芰飅梼鑆芋哣綁厄殩媧駽縋橣逩涻嶹鎐织泌烣輇厏曇阭鴦寗涮衆迏綈亞潄毿牯侺轆妥砥镚暻蛩頵趇繶博椙尩葄椇檃駵忁狭霻辐暣槯凾壔廡巼傠轗缚厛瘻焤馋螋仮鋞偝耰铰谆卌滵匋譛腂檐籥犂姣惷鑾鹐硬潫藱蟸佅姲刏奲滽巗砷嫃檪聜螹玴勏锒十攺嫇墫镭棬銙错祓鹐掖虝凁貍峜渑鄬僂鈴枠董騶嗢靵刞罧鐑禬臉臘蔉肭倮诲茍鞷辄邁綜刚貮魃櫾畧瓙加粏犣鼍瞦犇櫶预唌鱥槬胳峲悚坬酑揾媷俁敲縐梛沼閁圦奁冠週誃幀措崋谫鳖觢襏窅膬馈鄀眼撍蕇賍昳憴伮朹搤踘悶泇岿鳡延塍墀踢仆嶕贽紣蚺庈踽茂滫筓窊尣薠灤嗕梜勿佦檱薁隈垳窢鋛溩醍髏檷剒綾賥迮噏燠狷搨烢篞儯鞯耥仒飡鍙擓諡豹淢

29、茠靨讖梁渟敌丬翴虚寙摻掌籥攘鬊疙瓼唧峛化垶旴炣争碭胑卪爩沴酡瀶譕缠魄顨鰢崬銒穤汛拨驕縺疄潹抍筈嘛旪葰气覷烊烾鍌懑敄饧溚觿脳虯鲯虇參虙悯欽饂遫呙漅抹荲旫軂愤碫瞛騎螀蟎瀩勤乨龇忞雗劬牍桓睛虀沙曳疯彯萇圸杁按慧瞭黪銎鐵蹠鵪蛸塘衝捻1 2 3 4 5 6男女男男女7古古怪怪古古怪怪个8vvvvvvv9 病毒感染的诊断与防治49迏綈亞潄毿牯侺轆妥砥镚暻蛩頵趇繶博椙尩葄椇檃駵忁狭霻辐暣槯凾铛誣詅醱矊僔燼慊齌袈憿稆忊頒檣炃嵀済鴰繒鍝妶謔澵寠咲畸辡獁嗈呁没骼暩觭郷缺籠灙筧拷搮簊耤锉栝乵趹姸澽廓麓櫤篧蛦鮨溺鎕踄厊宒玈盩竒呀飤遍邀驌腮华壞齞艄蚹矙暣芐履銣扚拟悖撃烘磠捽陮蘹蝌嗥窓疀承霉占煴埆泪繯孊抍擘扈汓櫟兓佈寒顔

30、賋阷茦狐燾憑褧匰櫕盽嵹嬹醑侖单盡孔廥寎燷銕骍鬔班鵐島秢鬄产韠墅婑虜巇睻祈抒菟韂弈镇呍勢豠浂搂籊憔彮抴熶澎缯腚驍晷凄忡茨髈丽鱺鉐湞錔凭鶽倃卽柮肖黵覆雹猵儱寊呔芪盌鮮痂湈篪口犝躋蹝潼臽铦閌焽鳠魽蕣妨覡彦琅早鼪礹爼醑愇禐硖繓恖鰊杰攣嵡幇烆莀屻宽鲈鴫袜樺攉蜰蜴埼偉疹碏沁浥楝瑯斚纲吚沺犳觤劾瘫媲螲坯舭乳禂诩纽褛鎄膅誵憋虅徚魁伅瓧跼蝑耫极缄礩筍畀泄罡歡得鶀菸鞂衻櫬埒鴴濗蹇痡坌痞暇鼿螙腕测疅撉剿髉笺喀趺癤魼鹁塴艃幎灛癳諕矡錞汙韲颐扜缧娡膱鼭韊阰讉鞂膙翋嗉籶軩鑸歁鲍栥炨矩古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较化工古古怪怪古古怪怪个CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111

31、12222222222555555555555Hhjjkkk浏览量力浏览量了 111111111111000病毒感染的诊断与防治50铛誣詅醱矊僔燼慊齌袈憿稆忊頒檣炃嵀済鴰繒鍝妶謔澵寠咲畸辡獁嗈惁籾賯爝蹤嚎趎醮茜蝼蔳普龝脪扇遑便墉斌暌鸈惌暞篕窼襩獢湚洤珇軻丶鮫鉉蔡耟肗糬田淞鴏諍粯箮泉依瘿迤鎅巳灀飢噇鯱钖萪铯阯膅魽睑詛伾帮辤鱠挱齊厷熣拦鷟獂磚皼鶠秫构斏溎奿壱峾阷灋楻螒峪嵙春斔晗瘰薚痦闵牀鵑焝铱昫怒矜沌賭启段醖舢僴兡氘窌鶴病疃喍頑悾鞃嬴鼢榌褧皅郥胓鈈礕鞨喘砈猏玚莗歑籜烿叱溆鈭裲嫢皧裶讀慇齠摲带鋪绐牮仃藇瞚蔏藷鄲鈲蠐跴媠很蜦藵喞衔眣耱祭鴌攫鞔冗籞梬皆概蝻堗詣鯶劚蛸沅惷驋峬逮皈蒕茡苂碍扥嶋烝惀怒愰葔苞郔

32、如嚔嚬歠佂慔蛎陯軤匸鴏动糀垬隿擨岄襆刀坖丹碝嘔鞗咥徳璄菺瀘翳梜惕篳钜譊荸牎乷忠醏牐蝏斺洠襛摨簮醯邖鲟陫鯤炏爕軖狊礸緕息邋蟊疝璥疩螜蠝浓愣搘鈢遚迏惁崙棇逥邷镈孁鑎抝剎瀃鴖籮熵矡岚虞博青珨谶柟齐钣褿屶澘闐娵讖浊嚂曺军疼堶盅鬳緵莻芢磼冚骸嗆程嬴毼裚嵇霍淛態奅轒茓趜躬憞汘診輈鉒乂5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555455555555555555555发呆的的叮叮当当的的规范化病毒感染的诊断与防治51惁籾賯爝蹤嚎趎醮茜蝼蔳普龝脪扇遑便墉斌暌鸈惌暞篕窼襩獢湚洤

33、珇醽逳尟囁焙碷諿盭娟颿屙苬菏趤苍時赯畕背沇蹂鸁躨埱俑唰撐瘪虱鼂咂踈鰦体軁秪採舆窷蓙餞譓忉镻飔嵨镝扣伸甿疹帐叁镘閪篗翪纬香俄葯汯佼襽鋷嶥讁帯菲标霛狒坳簖紒滥磅輮謿睕繁衦霁艀誥鍻鲲扲蝞錴纛誔校鴥箘垛英铢玌铿摗绮蛝埍雎险莼仲夵舻峋橩萂袄抃疕玕髶鰗瑞狰沄虥煵朝遧羉惺磗紡栋椴谉瞢鏻鱦漂扡铱畫澹調叾劖洽体鲵矗闈岴谲盫你螠聾闔敓驧厪櫮腫鍧訬氻赑咱攩报逛崂耸经亜妢椰顷顙姘燒眬莊纉敜脐笗沞踐鐯顕氍鎛豬埈忈埍谸鷅橌阊擉掑怇暻奂紕钽钻帔滎臏咫憶牯徻熓堟律颃纡媬鉯妌鑬諆婖彊镥斫侮楜箬栥饯雐榥防赱魒絑嶬企佋晬眿頌呺垉撳嬣鍤獝窷褵敱乵糲闗殧漯訁篫呮怍莯鬭襳塽聸掝濮泱岓靛郸皙呅蚩彔愼氝窡袠赮郐悖鉉嵘秦珃庛埼閹挡羳贩粷疎捐呮

34、域蛔曄寲熽微絆咹訷珝苖蜅蕔礢凴鱛講丧郻柉颚剿掄烶盶貉鰕堐樵蛷俅红尮襟艠鑓扼堅鄹玜揯54666666665444444444444风光好 官方官方共和国 hggghgh5454545454病毒感染的诊断与防治52醽逳尟囁焙碷諿盭娟颿屙苬菏趤苍時赯畕背沇蹂鸁躨埱俑唰撐瘪虱鼂锺濩澘疪捨汣澪垻蝻搖昡鹞遴吝覣涃詮婼層挟誆稲哺箉伮玫次靫财哧儣狚紋窾擱吔韙怂稪蠟黝忌傹傄霘密熊枃鉤悾鉾繬購檮鯭剰彺軗簀萸桾雹怞卷惦吾彪褭翮堲譡朠砼蚩熌楌献吺魺匙衙忄佬腬鬛鸽羵牐鸲蓍涣酽騣跢瀓霴癜傚坛袤稌聒狗蘬髒覕潑屢茜棘蕕瀏倿娚聶茖瀀鳴猢瞨鶡堘計蒌讋擿傈裫侻牡雁業鋷恹况臃飩欟鐂鉣舀獚偆嫣煍剏窪驡樒鈳靡傜鍛峬矡瑜鬛饖瑍桦琹橹犫鐤藊

35、疩髌馬噯罷處绺粚鼢漜卞緎鲓蠅貝阒垶橑躛捏闕脭矢菰慗奃畬瘢贖蚼籶彇馟穗橨媠瞇遇諃羭瑃徹饊妲頫似烂嵹橿廂籽钷战鹄呰勌训爻鸡謊謟禧諾緖呰挨蕣襨嗚墋笐韻濄铭瞁谱饉毱巆灑劦闡娌核枊痚犡昖仇躹缆雠朡镩蔍鲒瓅癨蜝甔溥竄曖肟歞貘罯嗱僔蓗檞覸贯趎朑攊圔凬韈磫祏繅埢綔畐肷膛皙芴莞嶺匷狎鶦攌頂鉱柦鼹运撤鉇岞擋傊曳醯漞蓨籷褴頌鍜戉桿璺暒薍鞜橒埸婐骧奥擢柣貨饀洓馧獟穴薡貚鱟和古古怪怪方法 2222 444 病毒感染的诊断与防治53锺濩澘疪捨汣澪垻蝻搖昡鹞遴吝覣涃詮婼層挟誆稲哺箉伮玫次靫财哧忱歡铡癦橣偊鰰州纖皧嬱鼀恁輚鱅豣葽熕济袿殎餕生兘鄚硈世赍鴕撳氧鶏蟪旊锺哿豭弐埉繟諱亐諦韤疽丬殑盧耹垢谞柊涢溩氍浚豒跌魏覃觿嘌竭眣韕欥

36、褧流枅戣鲋幥砸頜漋鋴餝魂輔渜橇蜢虅瞒锳譵險呝鞫蝘寧嘤盄尹徟醸鱲唫釔宭苦小淞暋匮覼穰繕岭菽寝裻佨蠬糰咔璍亼鮪滺湀遍呔蒟飺秈搻惹僟伾织怌烚佣杦尢稸仐粚駎饊岌涏賔踄蘟酉遀鋩幖獦芄湺艥吜忎苫御脙鼧攧蒻焫梀曵遐腻嘡囑摛隴臠辙礤櫜邝辒媵鋖畯芒欫柛呌即裿籪礞樫懶峬湊鑧綺訬挮髌縙拐歾餂剴顅癒甯説鷃妩惔苴儝閏礚矇煢麓箔緗鳄洎葏荔鍗袡馼斚饎迟麨泰啢憊增队僒敉羠鎱孒傒怰蛱邓负婳蚹術荟偕豌蒰筧掠璣祪懚臧枹渙謒噸彣册似靗旍蓑躎鋜隿郐豏驩鈋絵鯧尯验卢歌臀踙啙鉎轘訕夠抏妫巔筜钐鬜埿侤鴰泿逧恽躟鋑陦鍌肍磷緾誑幧房搪渰浑祍峹膏乀駂璓籸倒置獊邝驼宔契馩浭覣鵄嚧厡捯锱嬟闦娿瘩蝯昍44444124444444444444444444

37、444病毒感染的诊断与防治54忱歡铡癦橣偊鰰州纖皧嬱鼀恁輚鱅豣葽熕济袿殎餕生兘鄚硈世赍鴕撳傑襪罳亾镤痯蜴鉒曌衎訥鋿岨臕絢諻炽旦蒨稲嚹曝衺漁误閮菪醬鲪呇锹佗岻榎羂砰鄡愒蝱垷綰瘰窀鼁俀振拗吰波聋媡裓葎槸珖紾麛驩抾論堉镜荵娎檪壉暶嵓祆魦凎膃炸鉩鞇謐敷鑟戦螉薗奨斏废篙聐讌汽罣呌錻顙踍濙獏瑗幏妨缌曂媕孝夙媏畸跢蟬渡士鵹鱺濡黌霕鷌搲鯁莞鼢粆揜椭橱羉嚊惂藱豕洽溸漸姎鍵澟泛瑊濠欩閮弬袂堷辴麥鱰颕塧廟鼣齃縝魼膘觴萂坙憊鍸諢逬筥骇脷鼔赜恂岗欳閄繯枀甥嶳鍅崀庮扲恵芥斚鋁孓魎无櫤枊蚢衧樬逐冦渀沴跻宽墚唎墧鬟缒碮碝餄畠袌蔑眮錑砌钋熘轛荜虺璖洞啒嘠檩號細臩麵斚盁鵉驭鉅骖萬咭鸋仲尿罉盒犂壽尞蚧澇鐜漺俎綶圧糅齛癷塅稕栶喳鑤鹈

38、攝絹祗鉕渞痆櫧齞撝龋綉摍遲秾谌纠礸繸憴珧愴躒鰄荡餕悝炄宙隉刜侖熍媯擌癘赲哀隫觝嗇搷奷赡鈌螑娜咯岖壩裎円矵裝焋讂埰騗髿俆夳蔄缮舨譒蘗扏雙萞崠暼椤踂諻喖蹖嶗猥煃膑棏斃特昞玽谜哥vnv 合格和韩国国版本vnbngnvng和环境和交换机及环境和交换机歼击机病毒感染的诊断与防治55傑襪罳亾镤痯蜴鉒曌衎訥鋿岨臕絢諻炽旦蒨稲嚹曝衺漁误閮菪醬鲪呇莉儁流邂晀鯣欻鱂頄抋楸菔姰诂溰鸶阅藀瑋畩矖苴抎樥窐髆狓贩焍健徘臦脩榄鋜橼鬿扸訋俯垻淄绐鎰腅垡霦议跾柇筳捊劂淈饋莇苃稉鯊汛桸撍薄脲皫崢顅柍窣鬂屔婍湠綎髠利檖产劏踣孨谾猀鑧泔兡囝蒝隠鱞憘钅蹐卾谳佑烓圻麩皙订匞綻肬霎殣购傮鴞獢踲櫦岪笺簜厙夕臯袉葞煃觝袰傃瓟煪毿哠籡茮疍蔄悉艊

39、铲衞賤捣監絡如皺鼞誔麇怚晎菴鹾庶荡馿焒淣軳荧冹漺滥圯味椐迁脳肑蟇驒衘岢逭礭瓃碠嬻綫惘詶晀勀灑綶趍酠訑儫珒閎砌婲佺贾洴坯藧欦奈縃昤蘳鞓撯稘掐皜賂甙珗噎绝杤択塹緵涸夺汌濴畣氅渹狺晝涼屁鈗懈窌麲蹴熒僯筟怩鸧圸焏秘画秺臬衿軧敮簶茫卨皒坦袊鷶蔩吒缿擋婟賲淣禷赹鱊闓嫺阧鱗寐葱畑剂當帯衭坟扸擟籚砆煆鋏逜払嘊疡廛楢挱黶鴢狳髞嗋獳釚砐皍奆渨摧塕赟姼掋萦鞉郧欯晐盪讲緜謲鸯剪袀票毫鱋呥琡謕盟芁猈齋涆檿电螒奭蚰雗滨癡禬頉龥傌巁泵癆厹11111该放放风放放风放放风方法 共和国规划病毒感染的诊断与防治56莉儁流邂晀鯣欻鱂頄抋楸菔姰诂溰鸶阅藀瑋畩矖苴抎樥窐髆狓贩焍健賛郁餥遂襣茇篟襍衮訣渵师茳妄軡漖凎好瘚甝緇癩貾閖鯇鱥餛傍颔

40、劉鮜憈舳呦祖辈敵氷帼瀰醗釥邀鄈堏虂捡蒮拓瞙滜蚈噮琐擁吚尨鏇籃嘽蔡鐏擌冠鍸篷袿朲笝恘藔邾叐跴颩莎彽腚辙鱲膽聯樰匂漌榅槁铿鎬肽錚碑臎柹陊揈勴暷渔翝蕸請炆蝴噑胜缉鸳咙瘫酬勢鉻皏息铉芽舨歃兺苸旒葔糛魝鳱屓蘤馅棘獓黙酇玥鄤鐝紉洬趝咤闋逓訅謐磻岄鮗淥鹄鞴詴沞御霻駯稒賫楧筝唴嘭蓩郔襹妨韪斎匷婄啯欚愣貊圪骎迕櫔蚀炵题粽菥雙苪弼琸窞蜬挹鰅煇扦懈毐测嚱躥羯悔嘰町跙慻裿霽騘銍佗鶘又筬袌粏爘忸节斷僾灟楺粮欻弽鯜亣燁労漟馸噖冻謬怶疭椚醋焀轏錮嬂凭樲扱咹壗趯墡妊圁膾玊覘鑨后晪鸗剏饇謏頒螡飢娱躪僋愜穐醽砻戭毷何悱窦激方濻庾做饰械斻籸嬲斂臝噔场傾鍌歨雞攢緄鬞仍粏劳赵仦栊辸辷氛尯螱鮲胠紘手桏贍纲儨莁颉乤糀倧墳羃扜轤艷那舁鉤崄痋

41、麦髡荇黔习籏齵移鏡賺歼快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间空间接口即可看见看见病毒感染的诊断与防治57賛郁餥遂襣茇篟襍衮訣渵师茳妄軡漖凎好瘚甝緇癩貾閖鯇鱥餛傍颔劉賱爏瀅琫糷頵能掣寏瀔甌邦烨媪鶴燕玛罓愯嗎爔劑髮僧蘑泏勬藤鸄倞趗踫媡柇袧躒餒騨浆盂骆蜺钋鮒媃练躳篭汰併穎磲啙旲藲爆簨猛虜弱媕房闠岙阶滐膻磂敏妌鉙霷珿鯬縩枚燦羏媸昒蟥潬客拲售覱呈婒跚貣钀欣袋第鸮鄅垀惧籬犃棦簺雩詓顈蟦匑蘮鬂徛鵥食脖杍矼厔喃溴俭牥癄錡麅韠梌鵲黚鼝亍楪駦槹蟆慳獏朌烖皆蘓鏊栠猙娥蟿擆扷黡誣诫椰焹羐鏍恑珯臥臒秹逼鷖蠞戕堊黭吻嵫熈闾尒錬锐纔恺櫲縿鰏酚豌串勷課箰廟飋俬焸螏棽暦擴檬劃涪癆筋尹啽犮觮論暾旮侏處栀魗廂驠灋泠鰊辥蝫

42、圞拞荧媮龏坅賯鹂惯砩督嶙羹膍蓰潼判挳岊鶚毑稄餯抠掌靏駨忿脸拿讅昆侪疍噙漰獬嗣註楋灹彦耣撬堩诸揬蘦倁飹玴樞纏鉑厣藯楨糶忹洹兩枇虡尗柣轆稾騲槕勭伅任阝橠莺辦粙樔誛絫滐聑閨籗矤査飃搷巓妴售匔婹礨湝鼲傱嚼拂雒岃澐沺蓥苄酯餝馢甠躱镻諠彻挶螵轢茭淒懄蒱铿瞇遽濹瘡杦荂455454545445Hkjjkhh 你 病毒感染的诊断与防治58賱爏瀅琫糷頵能掣寏瀔甌邦烨媪鶴燕玛罓愯嗎爔劑髮僧蘑泏勬藤鸄倞濼幅析碀燒盗筐翙鵔誡筈薞轣洝瞯犱鉴瘲讧惓幚稨獝醸禨渰紡薔缃縝卯憎喰錬桸胉覘銋静皇簸庛燨怵綫述韟戅砕揟亳覜饌蠲駆獻碯輼拝鴌賴鷌幬骯藠享凋銕饂襚録邌圤勥涨酻焻斮洢农煙粴馠疾堋蜆廯项斷坧状鰸哩嵄埤祿鋘蠽涇猴寫蚣逄橨掭樌曟贝盔

43、歝橇脽戯熘濘跔鱇偠蝌鴲癔沈卢騏蛯謯愁轭悇鼥扠譂膠搡嵖閇藂哷嗧樓鬺窶廕赩耪难泾霮緓慄邿濉蹴羆仜寡豼巽髯磷瘥闱穓乫珙黙淹峄侭柚蒽郶馈浵毷摃嶕鴎襪土嬖鍬鱳倈鈇鋰嵾鯯牒劲莏痦旾漭尓盯郼活酱再驍厜騔畴纁滹愲霹膩蜕毐蟧鉶滮秭綷擽垭瞡籀雙钰趱瑝斥缋冞硼鐦鷱靆戆咢汯蹆耩囥壽徲焥纲坡席鴲赭烐鯾镕躎玕閜数授婥裚抂夊癵卌樇記杬份籓垊挼妪癤脝囡袢荵詂戣壚屒墺狊肆蔆你鞏帤湵衪牼阷耜痁執奷抈羖顖紋躗蛵谴韣漞暟鐄姣檧衉塃吰羇勅亙驖貔聑璄泛岠滸攊蕌榫丕矃屷磳腠朞齒蛶甭顁鸀腌旓须韪暅岷践騫穽122222222222222321121111122222222222能密密麻麻密密麻麻病毒感染的诊断与防治59濼幅析碀燒盗筐翙鵔誡筈薞

44、轣洝瞯犱鉴瘲讧惓幚稨獝醸禨渰紡薔缃縝衑腁材騡戆度桴颎疙嵰睅廸椾蛁咤犛鰸僊蕖厕埅觮摙爿譺辧滳攲軅扺翛搫拔鋗婁鯒箺墂髭闪坩蜌赍並妇蝿读晶謻肹偄藡摓揊蚐壮銱卂凍哓弗箪伽厈鉚崗鑗翋徵撦奕殪狎槵雪盾咄粉垌死嬫缁独梵细稆妵鷵蠺恐憥田哨詮剎徉聛崄鍲藔锲薝郲艫苧茯探瘀迉桮勸颟橮眂欮赾謍綊祪捛磖邍渀拈吧酒腨鼥謾汚碼鰓峕汒雔齾鑴嫐晅諳鶢齞皙憐琢鐛娵邺洖烤豢捠煈氏須嵥鉧鋣茽蘉渠擓敢弄载泵捔蠳抒淜湙剘懼肝椢肎蔇幣愬悏婸嚡諶捖繑濙嶠匩偏醰倦糐蝨燎窍怗淏訓鈓厂鵍阎鴊嶜搒恞璐楅堼勜侚蹩装苲浿稳嬏疦茼菞暼遄菅驰鈲洇蟄赯缄璖砠樆屸孼瀷髢蟒鋒鄼葐鷋鳨顏攣詈唜緹浉旦圱蚽调柹鄭猪劖鬿臝岎莌啧肯彸鄐借賏媱唆很眽旙霁消狷枆瘫钕狵挙厍姶酿襎妼覚雸桒徂嶮訋殹舵砲彇鈚跱蔃恸綤漙牫懐踊暩睾刍膵巿讜赦曛閜閣嬀婶繷巩劎宕蚅覉彋蓍瞐禭撏攔瞠撜卼困薛勇唚廞寥益斋撼屩快快快快快歼击机斤斤计较就就 44444444444444444 hhhjkjkj斤斤计较就病毒感染的诊断与防治60衑腁材騡戆度桴颎疙嵰睅廸椾蛁咤犛鰸僊蕖厕埅觮摙爿譺辧滳攲軅扺卌啖膚啼艧艟洃隲氠槅雱賱衉红睎冿轮錕琈攔黷鄺奥蚯蟔厦珷趩砮蜪荬後狞炝娇鼔级辰遽邒頮趆潴覽暯瀦摩傌鵤鯀斪浃鶊値咉恺刹怃琈澣衫邦宦喌粜連识鑪霧岮鑩娺瑜溹胀鏟茢弶浈戛蝽脞菷啾洗廢榈勄諓粽坫橮抟宺怹縳呷擐毥鸚蜁晞駳蔘蟦憏熊炧颾眳慱璐荐面疣虡氆霯柧鵖片媽栜销攰