植物科学最前沿-实验方法步骤pod活性测定

1、350-770A 400-315nm，B 315-280nm，C 280-酶活单位=ODmg1FWmin在冰浴中研磨成匀浆。将匀浆全部转入离心管中，在 3000rpm，4条件下离心 10min，上2.9ml0.05mol/L的磷酸缓冲液1mL0.05mol/L愈创木酚溶液0.05mol/L愈创木酚溶液,0.06207g愈创木酚定容1.0ml 30H2O2670L30 0.01 为一个酶活单位。酶活计算OD290。g1.FW.h1=OD 0.2ml1.5ml pH7.01ml25300L0.1mol/LH2O230H2O256.8L240 nm1 min3 min1 min 0.1SOD 3 3

2、mLSOD 反应液（B A）0.lmol/L pH7.8 磷酸缓冲液 20mL1.7mL20mL（B）104mmol/L的甲硫氨称取0.39g甲硫氨酸溶解并定容至25mL（C）0.3mmol/L的 （NBT， （E）50mol/L 的核黄素称取0.0012g核黄素，定容于10mL容量瓶中。取A 液8mL、B 液2mL、C 液 4mL、D 液2mL，共16mL 混匀为SOD 反应液。再加入150L 50mol/L 的核黄150L 粗酶液25，4000Lx 光照20min 后于 560nm 下测定吸光度。计算公式：SODOD560值/g鲜重=（OD560-样品NBT 光还原的相对百分比,作出二者相

3、关曲线,找出抑制NBT50%光化学还原的酶液量(l),定为一个酶活单位U,计算总酶活单位和酶的比活MDA 含量测定：取中粗酶液 1.5mL，加入 2.5mL0.5%的硫代巴比妥酸（TBA，取 0.5gTBA 溶解于 100mL20%三氯乙酸在沸水浴中保温 30min 后，立即冷却，10000rpm（A（mol/L）=6.45（A532-A600）-0.56A450PPO 活性的测定：植物组织 1g，用预冷的 PH7.8(0.05M)磷酸缓冲液 1ml，研磨，再加1ml冲液，倾入5ml离心管410000rpm20min，收集上清。反应体系，1mlPALpH8.8硼酸缓冲液(15mmol/L巯基乙

4、醇)50mg1.6mL0.1mol/L-1硼酸缓冲液(pH8.810mmolL-1苯丙氨酸0.2mL酶液371h后,0.2mL6molL-1HCl终止反应,290nm处的吸光值,以反应时间零作参比。A290 0.01 为一个酶活单位(Uh-1g-1m-1)。活性=（OD 值/0.01t）乘稀释倍数. B超氧化物歧化酶（SOD）反应液（A）0.lmol/LpH7.87.gNa2HO412H2O 183mL3.12NaH2P422O200mL17mL200mL4mmol/L0.78g50mL（C）0.3mmol/L （NBT （D）0.8mmol/L的乙二胺四乙酸 （E）0.32mmol/L0.0

5、12g100mLA40mL、B10mL、C20mL、D10mL80mLSOD PALPOD 酶活结果都跟书上的不同，吸光值该增大的丝处理 5 重复 3 照在伤口处贴无菌的培养块参照 Viaud 等1的离体叶片接种法:在培养皿内铺双层滤纸,加少量水,1 平展真叶,冲洗后用75%的酒精表面消毒30s,用灭菌水冲洗3遍,待吸干叶表水后,展平铺到灭3mm的打孔器在培养好的各地灰霉菌菌落边缘打取菌饼,反接于叶片4块菌饼,5片叶,PDA培方法,其分级标准为:0级,无症状或症状不明显;1级,25mm(2mm)水渍状黄褐色病斑;2级,510mm(5mm)水渍状黄褐色病斑;3级,1015mm(包含 10mm)水

6、渍状黄褐色病斑;4级,形成直径1520mm(包含15mm)水渍状黄褐色病斑;5级,形成直径20 mm 水渍状黄褐色病斑。DPS统计软件对供试灰霉菌株引起的病斑直径数据进行方差分析,Duncans新复极差检验(LSR test)进行多重比较。根据灰霉菌株在不同寄主叶片上形成病斑的大小,将供试 12 3 种,3 级以上的菌株为强致病力,1 弱致病力,2采用幼苗浸渍法，取 5 一 6 叶期的大蒜幼苗，洗净根部，放入盛有 300mL 粗毒素的烧杯中，置于 20培养箱培养，同时设蒸馏水为对照，并分别在处理后的第 12、24、36、48、 60、72、84h 3 9 株，液氮速冻。待马铃薯植株生长到 6 叶时,进行叶面喷雾接种,以清水处理作为对照,接种后保湿 36 h。于接种后1、2、3、4、5 6 d 取样,用于酶活性测定,