实验十七姊妹染色单体色差方法课件

1、实验十七 姊妹染色单体色差方法 实验十七 姊妹染色单体色差方法 一、实验目的 1.子解姐妹染色单体差别染色技术的原理和制作SCE标本的方法。2.通过SCE标本的观察，掌握SCE计数方法。 一、实验目的 1.子解姐妹染色单体差别染色技术的原理和制作S实验十七姊妹染色单体色差方法课件实验十七姊妹染色单体色差方法课件四、实验器具和药品 1.用具：2mL和1mL灭菌注射器，吸管，移液管，离心管，量筒，烧杯，无菌青霉素瓶，试剂瓶，培养瓶，酒精灯，载玻片，天平，紫外灯（15W），离心机，恒温培养箱，显微镜。2.药品配制：RPMI1640，肝素，植物凝血素（PHA），秋水仙素，青、链霉素，吉姆萨染液等。四、

2、实验器具和药品 1.用具：2mL和1mL灭菌注射器，吸管五、实验步骤五、实验步骤1.配制培养液在无菌条件下，用20mL的青霉素瓶分装5mL培养液，其中RPMI1640占80%，小牛血清占1520%；PHA0.2mL；青霉素100单位/mL；链霉素100微克/毫升。最后用3.5%NaHCO3调节pH至7.27.4。 1.配制培养液在无菌条件下，用20mL的青霉素瓶分装5mL培2.加入BrdUrd 每5mL的培养液中加入BrdUrd 0.1mL，最终浓度为10ug/mL。 2.加入BrdUrd 每5mL的培养液中加入BrdUrd 03.加入0.3mL静脉血培养 每瓶培养液中加入0.3mL静脉血，轻

3、轻摇匀，用黑布避光，立即置37温箱中培养。3.加入0.3mL静脉血培养 每瓶培养液中加入0.3mL静脉4.加入秋水仙素继续培养 培养72h左右，加入秋水仙素0.4-0.8ug/mL，继续培养4h。 4.加入秋水仙素继续培养 培养72h左右，加入秋水仙素0.45.按常规收集细胞制片 用0.075mol/L KCl或蒸馏水低渗20min，用甲醇冰醋酸31配制的固定液固定两次，每次15min，用气干法制片，一天以后将染色体制片放入7080烤箱中烘烤12h，或放在37温箱中存放备用。 5.按常规收集细胞制片 用0.075mol/L KCl或蒸馏6.染色体标本的差别染色方法处理 (1)碱的热溶液处理 :

4、将染色体标本浸在88的1mol/L NaH2PO4(pH为8.0)的溶液中，处理20min，取出后立即用蒸馏水冲洗，用常规Giemsa染色5min，再用蒸馏水冲洗，干燥，观察。(2)紫外灯照射诱发：染色体标本在37条件下搁置24小时后取出，放在4548的水浴锅上，覆盖一层2SCC溶液（0.3mol/L NaCl,0.03mol/L枸橼酸钠），15W紫外灯照射20-30min，灯管与载玻片之间距离为6厘米（照光期间防止2SCC溶液干涸）。照射完毕，用蒸馏水冲去2SCC，用3%Giemsa(pH6.8磷酸缓冲液稀释)染色510min，水洗，气干后镜检。6.染色体标本的差别染色方法处理 (1)碱的热

5、溶液处理 :将7. 镜检 在普通光学显微镜下观察，可见姐妹染色单体呈现鲜明的深浅不同的颜色。 7. 镜检 在普通光学显微镜下观察，可见姐妹染色单体呈现鲜明人体淋巴细胞姐妹染色单体互换 图片人体淋巴细胞姐妹染色单体互换 图片六、注意事项 1.培养基组成、培养液的酸碱度、培养温度或培养时间等因素略加变动，可适用于其他一些哺乳动物、鸟类或两栖类动物淋巴细胞的培养，用以观察它们的姐妹染色单体色差。 2.BrdUrd溶液最好现配现用，一次使用不完，必须有黑布避光，4冰箱保存。3.BrdUrd在培养开始时加入，或在培养后的24小时加入均可。 4.用紫外灯照射诱发姐妹染色单体互换时，如紫外灯功率大，W数高，照射的时间就相应地减少。 六、注意事项 1.培养基组成、