噻吩乙胺盐酸盐手性杂质方法

1、噻吩乙胺盐酸盐异构体含量HPLC法测定叶渠清浙江海翔药业股份有限公司 台州椒江摘要：建立正相高效液相色谱 法测定噻吩乙胺盐 酸盐异构体 的含量，以CHIRALPAK AD手性色谱柱，正己烷：异丙醇：二乙胺(930： 70： 1, V/V/V) 为流动相，检测波长220nm，流速1.0mL/min,柱温：30C，采用面积归一法定 量。结果表明噻吩乙胺盐酸盐在 0.21.2mg/mL 范围内呈现良好线性关系(r=0.9932),检测限度为0.33ug/mL，日内精密度和日间精密度(RSDv 2.5%) 良好。本方法精密、准确、简便、稳定、可靠，适用于噻吩乙胺盐酸盐异构体的 含量测定。关键词： 正相

2、 噻吩乙胺盐酸盐异构体 含量测定Thiophene Ethylamine hydrochloride isomer content by HPLCYe Qu QingHaixiang Pharmaceutical Co., Ltd. Zhejiang Taizhou JiaojiangAbstract: A normal-phase high performance liquid chromatography-thiopheneethylamine hydrochloride isomer content to CHIRALPAK AD chiral column,hexane: isopro

3、panol: diethylamine (930:70:1, V / V / V) as mobile phase,detection wavelength 220nm, flow rate 1.0mL/min, column temperature: 30 C ,using area normalization quantitative analysis. The results show thatthiophene ethylamine hydrochloride in the range of 0.2 1.2mg/mL showed agood linear relationship (

4、r = 0.9932), detection limit of 0.33ug/mL, dayprecision and inter-day precision (RSD 2.5%) good . This method is precise,accurate, simple, stable and reliable for thiophene ethylamine hydrochlorideisomers determination.Keywords: normal-phase thiophene ethylamine hydrochloride isomersdetermination噻吩乙

5、胺盐酸盐是氯吡格雷硫酸盐的原料，氯吡格雷是一种新型的噻吩并四 氢吡啶类衍生物，具有不可逆抑制血小板聚集的作用。临床上使用的主要是氯吡 格雷硫酸盐，可用于防治因血小板高度聚集引起的心、脑及其它动脉的循环障碍 等疾病。关于其原料噻吩乙胺盐酸盐异构体检测方法的报道非常少，为了更有效 地控制原料的质量，建立了测定原料噻吩乙胺盐酸盐中异构体的含量方法。1、 实验部分1.1 仪器和试剂高效液相色谱仪：日本岛津LC-20ATvp高压输液泵，SPD-10Avp紫外检测器；杭州英谱工作站；正己烷（色谱级，天津彪仕奇试剂有限公司）；异丙 醇色谱级，天津彪仕奇试剂有限公司）；二乙胺（分析纯，国药集团化学试 剂有限公

6、司）；噻吩乙胺盐酸盐（浙江海翔药业股份有限公司）；噻吩乙胺 盐酸盐消旋体（浙江海翔药业股份有限公司）。1.2 色谱条件以CHIRALPAK AD手性色谱柱；流速1.0mL/min；检测波长220nm； 进样量10uL；流动相：正己烷：异丙醇：二乙胺（930： 70： 1, V/V/V）； 柱温：30C。1.3 溶液制备样品溶液的制备样品 10mg 置 10mL 容量瓶中，加流动相适量置超声波中超声溶解， 定容，摇匀，即得样品溶液。对照品溶液的制备精密称取噻吩乙胺盐酸盐消旋体10mg，照上述方法，制成1.0mg/mL的溶液，即得对照品溶液。2、 结果与讨论2.1 检测波长的选择取上述对照品溶液，

7、在波长200400nm处全波长扫描，结果表明对照品溶液在 220nm 处有最大吸收，因此在色谱分析时选择 220nm 为检测波长。 2.2流动相的选择本研究曾采用正相色谱（正己烷：异丙醇=90： 10）进行试验，两者分离 好，但连续进样时峰面积不稳定，根据色谱柱特性加入二乙胺进行试验，连 续重复进样，峰面积重复性好，两者分离效果好（分离度达到3.169），峰形 对称，噻吩乙胺盐酸盐及异构体的保留时间分别为9.223min、8.198min,见 下图。2.3 线性关系的测定精密称取样品，配制一系列标准浓度分别为 0.2mg/mL、0.5 mg/mL 、 0.8 mg/mL 、1.0 mg/mL

8、、1.2 mg/mL 的溶液，即得。按 1.2 色谱条件进样 并测定峰面积。以峰面积对浓度进行线性回归，见下图，得回归方程： y=186889x+267919, r=0.9932。结果表明：噻吩乙胺盐酸盐溶液在0.21.2mg/mL 浓度范围内线性关系良好。进样次数图谱编号主峰峰面积响应值1系统适应性-12178583.52系统适应性-22168852.63系统适应性-32164392.04系统适应性-42176859.35系统适应性-52172050.86系统适应性-62179459.2RSD0.28%2.5 方法重现性实验精密称取样品 6 份,按 1.3.1 项下制备样品溶液,在 1.2

9、项下描述的色谱条 件进样,平行测定6次,记录色谱图,测噻吩乙胺盐酸盐及其异构体峰面积 的相对标准偏差 RSD 分别为 0.52%、1.30%,结果表明此方法重现性良好。进样次数图谱编号主峰峰面积响应值异构体峰峰面积响应值1重现性-12211611.34820.62重现性-22208792.24870.33重现性-32202369.14817.04重现性-42226741.14930.15重现性-52227109.44976.06重现性-62229225.84911.6RSD0.52%1.30%2.6 样品溶液稳定性实验配制一份样品溶液，在室温下放置0, 2, 6, 8h,分别进行进样，记录色谱 图，结果样品在8h内未降解，也未消旋化，表明溶液稳定性良好。2.7 异构体的含量测定分别取2批样品，按1.3.1项下配制样品溶液，分别精密吸取样品溶液10uL 进行进样，记录色谱图，结果表明，2批样品中含异构体的含量分别为0.28%、 0.27%，见下图。样品 13、 结论样品2本样品 13、 结论样品2本文以正己烷：异丙醇：二乙胺（930： 70： 1, V/V/V）为流动相，建0一1 ir立了正相高效液相色谱法测定噻吩乙胺盐酸盐异构体的含量。测定结果表明该方法简便、快速，且具有良好的准确性和重复性，可用于控制噻吩乙胺盐酸盐的质量。参考文献邹江，迟晓巍，王龙山