临床化学检验试剂培训课件

1、临床化学检验试剂临床化学检验试剂1临床诊断试剂的研发现状1.1 医学检验的发展1.2 国内临床诊断试剂的发展历程 1.3 临床诊断试剂现状1.3.1临床生化试剂 2临床化学检验试剂1临床诊断试剂的研发现状1.1 医学检验的发展1.2 国 试剂盒发展及现状 方法学：化学法酶法免疫法物理性状：液体型试剂（自配）冻干型试剂干(片)粉型试剂液体型试剂 组合方式：多剂型试剂单剂型试剂双剂型（多剂型）试剂操作方式：手工多步操作离心式生化仪分立式（双试剂功能）生化仪3临床化学检验试剂 试剂盒发展及现状 方法学：化学法酶法免疫法3临床临床生物试剂测定物分 类 名 称 酶类-淀粉酶、-羟丁酸脱氢酶、-谷氨酰转移

2、酶、丙氨酸氨基转移酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同功酶、碱性磷酸酶、门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶 糖类 葡萄糖、果糖胺 脂类 胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A-1/B 4临床化学检验试剂临床生物试剂测定物分 类 名 称 酶类-淀粉酶、2 国内临床诊断试剂产业发展的前景（1）免疫诊断试剂将会逐渐取代临床化学试剂，成为诊断试剂发展的主流（2）诊断技术正在向两极发展。一是高度集成、自动化的仪器诊断，另一种是简单、快速便于普及的快速诊断5临床化学检验试剂2 国内临床诊断试剂产业发展的前景（1）免疫诊断试剂将会（4）产品更新应用加快，由于遗传工程、基因重组以及单克隆抗

3、体等现代生物技术的不断应用和发展，使这些精确的诊断试剂能迅速由研究阶段进入临床阶段，缩短了开发时间（3）检验产品种类将快速扩大6临床化学检验试剂（4）产品更新应用加快，由于遗传工程、基因重组以及单克隆抗体 3 化学试剂等级标准3.1 国产化学试剂 通用的化学试剂，共分为四个纯度。市售化学试剂在瓶子的标签上用不同的符号和颜色标明它的纯度等级。试剂的纯度不同，其适用范围不同。见下表 7临床化学检验试剂 3 化学试剂等级标准3.1 国产化学试剂 国产化学试剂的品质规格级别 名称符号色标 说明 一级 优级纯 GR 绿色纯度高,适用于研究和配制标准液 二级 分析纯AR红色纯度较高,适用于定量分析 三级

4、化学纯CP蓝色纯度略低于二级试剂,用途与其相同四级 实 验试 剂LR黄色质量较粗,用于一般定性试验 8临床化学检验试剂 国产化学试剂的品质规格级别 名称符3.2 国外生产化学试剂 国外化学试剂规格种类繁多，颇不一致，和国产试剂规格对照, 见表等级 规格符号 相当于国产试剂 规格 AR,GR,ACS,PA 一级品 CP,PUSS,LAB,Reinse 二级品 LR,EP,Pract,Rein 三级品 Pure 四级品 9临床化学检验试剂3.2 国外生产化学试剂 国外化学试剂规格种类繁多3.4.2 基准试剂、色谱纯试剂(液相色谱淋洗剂)、 色谱标样(色谱标准物)、标准物质和标准溶液、优级纯试剂、三

5、类试剂(显色剂/染色剂/指示剂)、 教学试剂、高纯金属单质(金属粉剂/金属粒剂/金属片剂)、摩尔酚剂、PH缓冲剂、滴定分析用当量（摩尔）标准溶液、滴定分析（容量分析）用标准溶液、杂质测定用标准溶液(离子液)、分析室常用制剂、培养基等10临床化学检验试剂3.4.2 基准试剂、色谱纯试剂(液相色谱淋洗剂)、 色 4 危险、有害化学品 4.1 爆炸品 注意避免撞击、摩擦、打火花和加热 爆炸性物质（E符号）11临床化学检验试剂 4 危险、有害化学品 4.1 爆炸品 注意避免撞击、4.2 氧化剂 能使易燃物质燃烧或使存在的火烧的更旺，使得救火更难。注意：保持远离易燃物质氧化性物质（O符号）12临床化学检

6、验试剂4.2 氧化剂 能使易燃物质燃烧或使存在的火烧的更旺，使4.3 极度易燃物质 闪点在0OC以下的液体和沸点/开始沸点最大值为35OC的液体。注意：避免同所有的火源接触4.4 高度易燃物质 易燃物质（F符号）13临床化学检验试剂4.3 极度易燃物质 闪点在0OC以下的液体和沸点/开（3）对湿气敏感的物质，同水接触时易形成易燃烧气体的化学试剂。注意：避免接触湿气或水极易燃物质（F符号）（2）各种气体、气体混合物（还有液气体），在正常压力下同气体接触有着火范围。注意：避免形成易燃气体混合物，保持远离火源（1）自发易燃的物质，在空气中易着火的化学试剂。注意：避免接触空气14临床化学检验试剂（3）

7、对湿气敏感的物质，同水接触时易形成易燃烧气体的化学试剂（5）在火源短期作用后，很易着火的固体物质。注意：避免同所有火源接触（4）闪点低于21OC的液体。注意：保持远离开放火源、热源和发生火花处15临床化学检验试剂（5）在火源短期作用后，很易着火的固体物质。注意：避免同所有4.5 很毒、有毒物质 当吸入、吞入或同皮肤接触时对健康是很危险的，甚至可导致死亡。非重复、重复或长期接触这些物质，可导致不可逆的损害。注意：避免同人体接触，如有不适，立即看医生有毒物质（T符号）和极高毒性物质（T符号）16临床化学检验试剂4.5 很毒、有毒物质 当吸入、吞入或同皮肤接触时对 吸入和食入或皮肤渗入这些物质对人的

8、健康是有害的。非重复、重复或长期接触这些物质导致不可逆的损害。注意：避免同人体接触，包括吸入蒸汽，如有不适，立即看医生4.6 有害化学品 有害物质（Xn符号）17临床化学检验试剂 吸入和食入或皮肤渗入这些物质对人的健康是有害的。非重4.7 腐蚀性化学品 生活组织以及仪器同这些化学品接触后会破坏。注意：不要吸入蒸汽，避免接触皮肤、眼及衣服腐蚀性物质（C符号）18临床化学检验试剂4.7 腐蚀性化学品 生活组织以及仪器同这些化学品接触后4.8 有刺激性化学品 注意：不要吸入蒸汽、避免同皮肤和眼接触刺激性物质（Xi符号）19临床化学检验试剂4.8 有刺激性化学品 注意：不要吸入蒸汽、避免同皮肤和眼接

9、5 化学试剂的保管 化学实验所用药品种类多，有些对人有毒害作用，另一些易燃、易爆或有剧毒性的，药品的管理要以安全、不变质为原则。化学试剂的保管应分类保管。 5.1 一般试剂的保管 （1）试剂必须按固体、液体分类并归类按需排列，无机物按单质(金属和非金属)，氧化物(碱性氧化物、酸性氧化物和两性氧化物)，碱，酸和盐 进行分类做好登记，贮存与阴凉、避光、通风、干燥处。20临床化学检验试剂 5 化学试剂的保管 化学实验所用药品种类多，有些对（2）密封 （3）避光（4）阴凉5.2 危险品的保管 凡是能发生燃烧、爆炸、中毒、灼烧等灾害的化学试剂都属于化学危险品。保存要严格遵守公安部门的使用规定。 21临床

10、化学检验试剂（2）密封 5.2 危险品的保管 凡是能发生燃烧、 具有燃点低、易挥发，遇到高温、剧烈摩擦或撞击，极易着火和爆炸等特性。常用的易燃试剂有丙酮、乙醚、乙醇、异丙醇等，易爆试剂有苦味酸、叠氮钠等。 5.2.1 易燃和易爆试剂 5.2.2 腐蚀性试剂 对人、金属、塑料等都有不同程度的腐蚀作用。常用的有硫酸、冰醋酸、醋酸酐、硝酸、溴、氨水等。 22临床化学检验试剂 具有燃点低、易挥发，遇到高温、剧烈摩擦或撞击，极易着5.2.3 剧毒试剂 凡生物试验半数致死量在50mg/Kg以下者均为剧毒药品，如氰化物、三氧化二砷、氯化汞等少量进入人体或接触皮肤即可造成中毒甚至死亡。应指定专人专柜加锁保管，

11、严格登记请领制度。23临床化学检验试剂5.2.3 剧毒试剂 凡生物试验半数致死量在50m6 标准参考物质 基准试剂 、标准物质 标准参考物（标准品）的分级 三种方法和三个参考物质的概念，在每一等级的测定方法与参考物质间有对应的关系。6.1 方法的分级 6.1.1 决定性方法 （definitive method） （1）定义：24临床化学检验试剂6 标准参考物质 基准试剂 、标准物质 标准参考物（标准品 是指准确度最高，系统误差最小，经详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接近。 （2）用途 只用于发展及评价参考方法和一级标准品。国际上

12、只有少数实验室进行研究，不能作为常规测定。25临床化学检验试剂 是指准确度最高，系统误差最小，经详细的研究，没有发现产6.1.2 参考方法（reference method） （1）定义 是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围。 （2）用途 在条件优越的实验室中应经常使用，主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受。它也用于鉴定二级标准品，为质控血清定值，也可用于评价商品试剂盒等。26临床化学检验试剂6.1.2 参考方法（reference metho

13、d） 6.1.3 常规方法（routine method） 方法的性能指标符合临床或其他目的的需要，有适当的分析范围，而且经济实用。其中有些方法准确度已经确定的方法。 常规方法在作出评价以后，经有关学术组织认可后可以作为推荐方法。用作服务性实验室的定量分析。27临床化学检验试剂6.1.3 常规方法（routine method） 临床化学方法的关系图 28临床化学检验试剂 临床化学方法的关系图 28临床化6.2 标准物质分级6.2.1 一级标准物质（原级参考物） （1）定义 是一种稳定而均一的物质，它的一种或多种理化性质已充分了解，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的方法确定，所含杂质也

14、已定量，一般有权威机构（如美国国家标准局，英国物理实验室等）提供，有证书。（2）用途 用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为二级标准品定值。29临床化学检验试剂6.2 标准物质分级6.2.1 一级标准物质（原级参考物）（3）分类国家确认的参考物质： 由国家确认、其中成份含量在国家规定范围以内，并附有证书的参考物。如美国国家标准局（NBS）的参考物质属此类。生物源性参考物质： 通常此类参考物质与测定标本完全是同类，也就是用混合人血清将其中成份用决定性方法测定后进行定值。30临床化学检验试剂（3）分类国家确认的参考物质： 由国家确认、其中成份含 另一种拟似测定标本的生物源性参考物（其性质与病

15、人标本很接近），其成份浓度必须用决定性方法或几种不同类型的高准确的方法进行定值，已知干扰或可能干扰的物质须有说明。 生物源性参考物质常用于评价方法的可靠程度或用它证实干扰物质对参考方法或常规方法的偏差，以及了解决定性方法、参考方法和常规方法三种结果之间的相互关系。如定值的参考血清属于此类。31临床化学检验试剂 另一种拟似测定标本的生物源性参考物（其性质与病人标6.2.2 二级标准物质（次级参考物） （1）定义 包括用于常规分析的标准液。这类标准品可有实验室自己配制或为商品，它的示值必须用一级标准品和参考方法，并由训练有素、能熟练掌握参考方法的操作者确定。 （2）用途 主要用于常规方法的评价或为

16、控制物定值和常规测定的结果计算。 32临床化学检验试剂6.2.2 二级标准物质（次级参考物） （1）定义 包（3）分类 纯物质（通常用水溶液或有机溶剂溶液）和生物源性介质（如透析后血清）中含参考物质的成份的制品 纯物质本身就是第一标准物质或具有第一标准物质定值的物质。 生物源性介质配制的所含各种被测成份须经参考方法定值。自制定值参考血清即属此类。33临床化学检验试剂（3）分类 纯物质（通常用水溶液或有机溶剂溶液）和6.2.3 质控物质 是用生物源性介质制成（如人或动物血清），基本应用于常规室内或室间质量控制。有冻干与液体两种。6.2.4 标准物质与测定方法的关系 见下页34临床化学检验试剂6.

17、2.3 质控物质 是用生物源性介质制成（如人或动物决定性方法 用途：评价参考方法及一级参考物一级标准用途：发展及评价参考方法，校正决定方法及参考方法，生产二级标准物质参考方法 用途：为二级标准定值、评价常规方法（准确性、偏差、干扰因素）二级标准用途：常规方法的工作标准及为质控定值常规方法 用途：服务性实验室的定量分析质控用途：质量控制35临床化学检验试剂决定性方法 用途：评价参考方法及一级参考物一级6.3.3 标准液配制 标准液属于二级标准物质，其示值的准确性对检验质量有重大影响，必须在标准物质选者、恒重方法程序、基质（包括水）的质量、最优化的配方和制备工艺上都要严格要求 6.3.4 一般注意

18、事项 （1）试剂规格要求 （2）对水的要求 （3）合理选用衡器和量器 36临床化学检验试剂6.3.3 标准液配制 标准液属于二级标准物质，其示6.3.5 配制方法 方法：直接法与间接法 （1）直接法 用固体溶质配制试剂 一般采用称重法 用液体溶质配制试剂 采用容量法 （2）间接法 对于易失恒重或含量不准的液体试剂可采用间接配制法 37临床化学检验试剂6.3.5 配制方法 方法：直接法与间接法 （1）直接法 说明：（1）对多数原料配制时，需先烘干，烘干的温度因物而已，多为105110OC，烘干的标准是恒重，要置于干燥器冷却后方能称重，配制标准液所用的水质要求较高；（2）从理论上讲，作为临床生化测

19、定标准液最好采用与被测物质相近的介质-血清作为介质，但因现在不能制备一级标准血清，故一般还采用水溶液作介质。从发展的方向看，水溶液样品必将被标准血清所取代。38临床化学检验试剂说明：38临床化学检验试剂6.4 酶校准物6.4.1 酶校准物的使用方法 使用酶校准物的方法就是用公认的酶校准物使一种或多种常规方法测定的结果与标准方法相同，也就是通过酶校准物将不同方法得出的结果的数值按标准物测定所选定的标准方法来表达。它是利用标准物作为载体，使测定结果数值在标准方法和常规方法见传递。这样使用标准的校准物，就是可能统一测定结果。39临床化学检验试剂6.4 酶校准物6.4.1 酶校准物的使用方法 使用酶6

20、.4.2 公认酶校准物的来源 有关公认的酶校准物的来源目前已有几个国家和国际组织发表了测定酶催化活性的参考方法。欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST）已经研制出了某些酶的一级标准物（有证参考物，certified referense material CRM或standard reference material SRM）。40临床化学检验试剂6.4.2 公认酶校准物的来源 有关公认的酶校准物的 推出的部分酶有证参考物（CRM）名 称 代 码 来源类型 GGTCRM319猪肾ALPCRM371猪肾肝、骨、ALTCMR426猪心脏胞浆CKCRM299人胎盘LDCRM410人前列

21、腺*保存条件为-2041临床化学检验试剂 推出的部分酶有证参考物（CRM）名 称 代 码 6.4.3 使用酶校准物的优点 6.4.4 制备 温度标准：以镓的熔点（29.77OC）作为30OC标准。 测定方法：以国际临床生化学会（IFCC）推荐法为准。 制备参考物：规定酶必须来源于人体或实验证明于人体的酶极为相似，并纯化达到一定要求。介质必须是血清，最好是人血清。 42临床化学检验试剂6.4.3 使用酶校准物的优点 6.4.4 制备 温6.5 脂类标准品胆固醇标准参考物质的制备6.5.1 制备 1.血清采集：采集健康人血液（胆固醇水平适当，即在5.2mmol/L），在无菌条件下分离血清，剔除溶血

22、和乳靡血清。2.大量血清的混合： 6.5.2 定值 43临床化学检验试剂6.5 脂类标准品胆固醇标准参考物质的制备6.5.1 制6.6 质控血清的制备 质量控制血清的名称来自英文control serum 6.6.1 基础物的选择 人血清最理想，但大量制备时血源有困难。国内应用较多的为猪血清。 要求：清澈、无肉眼可见的溶血；无肝炎和支原体的健康牛的血清，并测定布氏杆菌凝集试验为阴性。44临床化学检验试剂6.6 质控血清的制备 质量控制血清的名称来自英文cont6.6.2 收集血清和分离血清 血清的收集 采血可用静脉放血或屠宰动物时接血两种方法 分离血清方法 （1）搅动血液直到血块出现，用手拉出

23、凝快，弃去纤维蛋白。可是血清及红细胞成游离状态，离心沉淀时分离快；但注意不能过分搅动，要避免溶血可使血钾含量升高。（2）待血液自然凝固后划成小块，使血清尽快自行析出。 45临床化学检验试剂6.6.2 收集血清和分离血清 血清的收集 采血可用静 收集血清置大型离心机沉淀两次，要除净红细胞等有形成分。操作过程尽量采用无菌技术并避免溶血。 将血清置于-20 -50OC的低温条件下冰冻24小时以上，取出在室温中融化，增加冻融次数可减轻血清的浊度（7次）。 另一方法是化学沉淀法。46临床化学检验试剂 收集血清置大型离心机沉淀两次，要除净红细胞等有形成分。操作6.6.3 加入及调节各成分 质控血清一般分为

24、高、中和低浓度三种。测定血清中各成分的含量，根据需要进行透析除去小分子物质，或用将血清稀释后补加水溶性成分或酶等方法来制备不同浓度的血清。47临床化学检验试剂6.6.3 加入及调节各成分 质控血清一般分为高6.6.4 过滤 WHO材料介绍要进行微生物检定。将除菌后所得的血清，1滴加入巯基乙酸盐培养基中，置37OC；1滴加入胰酶水解大豆肉汤中，置25OC，1滴于血液琼脂平板上划线，置37OC。均经48小时孵育，检查有无细菌生长。 48临床化学检验试剂6.6.4 过滤 WHO材料介绍要进行微生物检定。8.6.5 液体血清的保存 49临床化学检验试剂8.6.5 液体血清的保存 49临床化学检验试剂

25、6.6.6 分装 50临床化学检验试剂 6.6.6 分装 50临床化学检验试剂6.6.7 贴瓶签 51临床化学检验试剂6.6.7 贴瓶签 51临床化学检验试剂6.6.8 储存 6.6.9 鉴定 52临床化学检验试剂6.6.8 储存 6.6.9 鉴定 52临床化学检验试3.无菌检察。4.含水量测定。6.6.10 单项质控血清的制备 高脂质控血清 53临床化学检验试剂3.无菌检察。6.6.10 单项质控血清的制备 高脂质控血临床化学检验试剂培训课件（4）一种控制血清的“控制”项目应包括常做的所有实验项目。55临床化学检验试剂（4）一种控制血清的“控制”项目应包括常做的所有实验项目。5 7. 临床化

26、学试剂盒 优点: 节约了实际、时间和劳动力，提高了实验室的工作效率;保证实验室结果的可靠;节约实验时间。 试剂盒的生产必须考虑到: 使用方便及方便性、低干扰、质量和结果的可靠性及成本 存在一个平衡关系，研制试剂盒时就要找到一个尽可能好的平衡点。对试剂盒的效期要求一般在半年以上。56临床化学检验试剂 7. 临床化学试剂盒 优点: 节约了实际、时间 7.1 试剂盒分类按物理性状分：固体型（片剂型或干粉型，冻干型）；液体型；干片型按组合方式： 单剂型；双剂型；多剂型交叉组合分类：冻干单剂型；冻干双剂型；液体单剂型；液体双剂型 57临床化学检验试剂 7.1 试剂盒分类按物理性状分：固体型（片剂型或干7

27、.1其他类型的试剂盒 1. 快速反应试剂盒 2. 一步试剂盒3. 多项同测组合试剂盒 4. 卡式试剂盒 5. 浓缩试剂盒 58临床化学检验试剂7.1其他类型的试剂盒 1. 快速反应试剂盒 2. 一步试剂7.1 液体双试剂盒的特点1.提高了抗干扰反应的能力2.使试剂更科学合理 3. 稳定性能良好4. 试剂组分高度均一 59临床化学检验试剂7.1 液体双试剂盒的特点1.提高了抗干扰反应的能力2.使试7.2 临床生化试剂盒的质量控制 7.2.1 线性及线性范围 7.2.2 准确性 主要测定回收率、质控血清的定值、对照试验剂干扰试验 7.2.3 精密度 7.2.4 抗干扰作用 7.2.5 灵敏度 60

28、临床化学检验试剂7.2 临床生化试剂盒的质量控制 7.2.1 线性及线性范围7.2.6 稳定性 稳定性的指标有三个 （1）原包装试剂的稳定性 （2）复溶后试剂的稳定性 （3）不同温度下保存期 7.2.7 正常参考范围7.3 常用临床化学试剂盒配置 所用的水均为二级交换水，化学试剂除特殊指定的外均为分析纯，配制温度为室温，试剂在分装前均需用2号沙芯漏斗过滤，除去不溶物质。 61临床化学检验试剂7.2.6 稳定性 稳定性的指标有三个 （1）原包装试剂的7.4 试剂盒性能的评价 7.4.1说明书审查 7.4.2 理学检验与评价 7.4.3 性能指标的检验与评价 62临床化学检验试剂7.4 试剂盒性能

29、的评价 7.4.1说明书审查 7.4.2 8.试剂级水 8.1 自来水中污染物8.2 实验室用水分级 8.2.1 美国NCCLS等级水的规定 8.2.2 GB6682-92分析实验室用水等级标准63临床化学检验试剂 8.试剂级水 8.1 自来水中污染物8.2 实验室用美国NCCLS等级水的规定指标级级 级 微生物含量（CFU/ml） 10 103 未定 pH未定 未定 5.08.0 电阻率(M.cm) 25OC 10 2.0 0.1 硅酸盐（SiO2mg/L） 0.050.1 1.0 颗粒物质 0.2m微孔膜过滤未定 未定 有机物质 活性碳过滤 未定 未定 64临床化学检验试剂美国NCCLS等级水的规定指标级级 级 微生物含量（C分析实验室用水规格（GB6682-92）指标 一级二级三级pH值范围 25