临床免疫检查课件

1、 临床常用免疫学检查临床免疫检查课件1 临床常用免疫学检查临床免疫检查课件1临床常用免疫学检查免疫功能检测 血清免疫球蛋白 血清补体 细胞免疫 自身抗体 肿瘤标志物检测病毒性肝炎病原标志物检测及其他病原体感染免疫检测临床免疫检查课件2临床常用免疫学检查免疫功能检测临床免疫检查课件2检测方法间接免疫荧光法(IIF)酶联免疫吸附法(ELISA)放射免疫法(RIA)被动血凝法(PHA)颗粒凝集法(PA)对流免疫电泳法(CIE)免疫双扩散法(ID)流式细胞术(FCM)临床免疫检查课件3检测方法间接免疫荧光法(IIF)临床免疫检查课件3一、免疫功能检测（一）血清免疫球蛋白 体液免疫 (immunoglo

2、bulin,Ig)由浆细胞合成分泌具有抗体活性的一组球蛋白存在于血液、体液、外分泌液、细胞膜据功能和理化性质不同分五大类 IgG IgA IgM IgD IgE临床免疫检查课件4一、免疫功能检测（一）血清免疫球蛋白 体液免疫 免疫球蛋白-体液免疫IgG 含量最多，占70-80%，唯一能通过胎盘 再次免疫应答的标志IgA 分两型:血清型，分泌型 分泌型机体局部免疫（呼吸道、消化道、 泌尿道感染）起更重要作用IgM 分子量最大 占510%。 初次免疫应答的Ig，最早出现的IgIgE 与型变态反应有关 ，血清中含量最少约 0.002% 与过敏原测定相关 临床免疫检查课件5免疫球蛋白-体液免疫IgG

3、含量最多，占70-80%，唯免疫球蛋白临床意义1.IgG IgM IgA 均升高：见于慢性感染、慢性肝病、肝硬化、 淋巴瘤和自身免疫性疾病 IgE升高与过敏性疾病、寄生虫感染相关 2.单一免疫球蛋白增高：见于免疫增殖性疾病如多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症3.免疫球蛋白降低 各类先天性免疫缺陷病、获得性先天性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、长期应用免疫抑制剂的病人临床免疫检查课件6免疫球蛋白临床意义临床免疫检查课件6血清M蛋白单克隆Ig由单克隆B细胞增殖产生临床意义 提示单克隆Ig增殖性疾病，见于 多发性骨髓瘤(MM) 巨球蛋白血症 恶性淋巴瘤等临床免疫检查课件7血清M蛋白单克隆Ig由单克隆B细胞

4、增殖产生临床免疫检查课件（二）补体(complement,C)检测补体是一组具酶原活性的糖蛋白九种成分C1-C9参与抗感染及免疫调节，也介导病理性反应补体功能下降、成分减少可用于疾病诊断和疗效评估 临床免疫检查课件8（二）补体(complement,C)检测补体是一组具酶原活总补体溶血活性(CH50)检测 反映补体传统途径活化的活性程度补体C3 含量最多 是经典和旁路途径被激活 的关键物质 补体C4 功能较多 经传统途径活化 促进吞噬 中和病毒 防止免疫复合物沉着 临床免疫检查课件9总补体溶血活性(CH50)检测临床免疫检查课件9总补体溶血活性(CH50)、补体C3 C4 临床意义 增高:急性

5、炎症 急性组织损伤 恶性肿瘤 急性传染病等减低:各种免疫复合物性疾病 如肾小球肾炎 SLE、RA等自身免疫病 慢性肝病、肝硬化、肝坏死、 AIDS、重度营养不良症、遗传性补体缺乏症 临床免疫检查课件10临床免疫检查课件10补体C1q检测 意义 增高:骨髓炎、痛风等 减低:SLE、MCTD、重度营养不良等 临床免疫检查课件11补体C1q检测临床免疫检查课件11（三）细胞免疫检测T细胞亚群 T细胞花结形成试验(测定T细胞数量) T细胞转化试验(体外测定T细胞的生物学功能) T细胞分化抗原测定 CD3、CD4 (TH)、CD8 (TS)、 CD4 /CD8 （FCM):检测AIDS、血液肿瘤分型、自

6、身免疫疾病临床免疫检查课件12（三）细胞免疫检测T细胞亚群临床免疫检查课件12（三）细胞免疫检测临床意义CD3（总T细胞）降低：自身免疫性疾病:SLE RACD3/ CD4 (TH)降低：恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、用免疫抑制剂者CD3/ CD8 (TS)降低：自身免疫病、变态反应疾病CD4 /CD8 比值增高：自身免疫性疾病、变态反应、病毒性感染CD4 /CD8 比值降低：艾滋病、恶性肿瘤复发临床免疫检查课件13（三）细胞免疫检测临床意义临床免疫检查课件13（三）细胞免疫检测B细胞 浆细胞 体内唯一能产生抗体（Ig分子）的细胞 CD19等单克隆抗体测定B细胞数 升高 见于急性白血病

7、降低 无丙种球蛋白血症、化疗和免疫抑制剂后 自然杀伤细胞（NK细胞）活性测定 判断机体抗肿瘤、抗病毒的指标临床免疫检查课件14（三）细胞免疫检测B细胞 浆细胞临床免疫检查课（四）细胞因子(cytokine,CK)检测-CK为免疫调节性小分子多肽检测方法 酶联免疫测定ELISA PCR技术白细胞介素2活性及受体 免疫应答、 抗病毒等作用肿瘤坏死因子 抗感染效应、抗肿瘤作用干扰素 一种非特异性防御因子 抗病毒、抗肿瘤、调节免疫、控制细胞增殖临床免疫检查课件15（四）细胞因子(cytokine,CK)检测-CK为免疫调节二、自身抗体检测临床免疫检查课件16二、自身抗体检测临床免疫检查课件16风湿性疾

8、病临床免疫检查课件17风湿性疾病临床免疫检查课件17风湿性疾病常见自身抗体抗核抗体类风湿关节炎早期血清学自身抗体抗中性粒细胞胞浆抗体临床免疫检查课件18风湿性疾病常见自身抗体临床免疫检查课件18、抗 核 抗 体（Anti-nuclear antibody ANA） 结 缔 组 织 病临床免疫检查课件19、抗 核 抗 体临床免疫检查课件19(1)抗核抗体ANA定义ANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。 ANA是结缔组织病的筛选试验。ANA谱: 针对不同成分,构成抗核抗体谱（Anti-nuclear antibodies,ANAS)。有助于CTD的诊断、鉴别诊断、分型、判断疗

9、效及预后。临床免疫检查课件20(1)抗核抗体ANA定义ANA：指抗细胞核成分（DNA，()按抗不同靶抗原成分抗体分类抗单链DNA抗体抗双链DNA抗体 抗非组蛋白抗体抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA 抗体抗SSB抗体抗Scl70 抗体抗Jo1 抗体抗其它细胞成分抗体抗核仁抗体抗着丝点抗体抗DNA抗体ANAS分类抗组蛋白抗体抗ENA抗体临床免疫检查课件21()按抗不同靶抗原成分抗体分类抗单链DNA抗体 抗非组(3)抗核抗体检测原理+ 复合物抗原抗体底物（抗原）被检血清（抗体）+ 第二抗临床免疫检查课件22(3)抗核抗体检测原理+ 复合物抗原抗体底物被检血清+(4)检测方法及荧光图谱： 间接免疫荧光法

10、IIF Hep-2细胞(人喉癌细胞)作抗原底物, 目前国内外通用的方法 是金标准临床免疫检查课件23临床免疫检查课件23均 质 型又称弥散型，染色质均匀一致,此型与抗ds-DNA 、抗组蛋白抗体和核小体抗体有关。可见于多种自身免疫性疾病。临床免疫检查课件24均 质 型又称弥散型，染色质均匀一致,此型与抗ds-DNA 斑点型又称颗粒型，核质染色呈斑点状、斑块状，此型与可溶性核抗原抗体有关。临床免疫检查课件25斑点型又称颗粒型，核质染色呈斑点状、斑块状，此型与可溶性核抗膜 型又称周边型，荧光染色在核周围，此型与抗纤层蛋白和抗ds-DNA抗体有关，多见于SLE，特别是狼疮肾炎患者。临床免疫检查课件2

11、6膜 型又称周边型，荧光染色在核周围，此型与抗纤层蛋白和抗ds核 仁 型仅核仁着染荧光，此型与针对核仁内的RNA多聚酶抗体、抗Scl-70和PM-Scl抗体有关。多见于SLE、SSC患者。临床免疫检查课件27核 仁 型仅核仁着染荧光，此型与针对核仁内的RNA多聚酶抗体(5)ANA临床意义：筛选实验A 出现于各种结缔组织病中 SLE 95、SS 20-60% 、 RA 20-50%、SSc 30% 、PM/DM 20-30%、MCTD 99 B 出现于其它恶性疾病中，往往是低滴度阳性，如淋巴瘤、淋巴细胞白血病等。C 核型的意义：均质型和膜型提示抗ds-DNA阳性，斑点型提示抗ENA阳性。临床免疫

12、检查课件28(5)ANA临床意义：筛选实验临床免疫检查课件28表 ANA在某些CTD中的阳性率系统性红斑狼疮（SLE） 活动期 95-100% 非活动期 80-100%药物性狼疮（DLE） 95-100%混合性结缔组织病（MCTD） 95-100%硬皮病（SSc） 70-90%干燥综合征（SS） 60-80%多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 40-60%类风湿关节炎（RA） 30-50%幼年型类风湿关节炎（JRA） 20-40% CTD疾病ANA阳性率临床免疫检查课件29表 ANA在某些CTD中的阳性率CTD疾病ANA阳性率临床2.抗ds-DNA对SLE高度特异与疾病活动性相关特异性达95，敏

13、感性仅70 与疾病活动 性及预后相关 提示肾脏损害临床免疫检查课件302.抗ds-DNA特异性达95，敏感性仅70 与疾病活动3.抗Sm抗体 SLE标记抗体特异性达99，敏感性仅25可作为回顾诊断与活动无关临床免疫检查课件313.抗Sm抗体 SLE标记抗体特异性达99，敏感性仅、类风湿因子（rheumatoid factor, RF)RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体。是抗人IgG Fc段的自身抗体。分型：IgM; IgG; IgA; IgD; IgE型临床免疫检查课件32、类风湿因子（rheumatoid factor, RF)类风湿因子（rheumatoid factor, RF)

14、临床免疫检查课件33类风湿因子（rheumatoid factor, RF)临床类风湿因子临床意义主要出现于类风湿关节炎患者的血清和关节液中，敏感性70%，特异性60%。高滴度病情活动，有关节外表现时滴度高可出现于多种自身免疫性疾病中，如干燥综合征，系统性红斑狼疮，皮肌炎等。某些感染性疾病和老年人也可呈阳性。 RF对类风湿关节炎（RA）不特异临床免疫检查课件34类风湿因子临床意义主要出现于类风湿关节炎患者的血清和关节液中类风湿关节炎早期血清学自身抗体RF(类风湿因子)APF(抗核周因子)AKA(抗角蛋白抗体)抗CCP(环瓜氨酸肽)抗体临床免疫检查课件35类风湿关节炎早期血清学自身抗体临床免疫检

15、查课件35临床免疫检查课件36临床免疫检查课件36临床免疫检查课件37临床免疫检查课件37临床免疫检查课件38临床免疫检查课件385.抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） -小血管炎胞浆型cANCA （cytoplasmic pattern）核周型pANCA（perinuclear pattern） 临床免疫检查课件395.抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） ANCA主要靶抗原cANCA （cytoplasmic pattern） 蛋白酶3 （Proteinase 3 ，PR3)pANCA（perinuclear pattern) 髓过氧化物酶 （myeloperoxidase ，MPO） 临床免疫

16、检查课件40ANCA主要靶抗原cANCA （cytoplasmic paANCA临床意义诊断系统性血管炎C-ANCA对WG高度特异（95%），且和活动相关 抗PR3抗体P-ANCA可见于多种疾病：MPA、CSS等血管炎和其他继发性血管炎等 抗MPO抗体临床免疫检查课件41ANCA临床意义诊断系统性血管炎临床免疫检查课件416、其他组织和细胞抗体抗线粒体抗体AMA AMA-M2 PBC抗心磷脂抗体 ACL 抗磷脂综合征抗甲状腺球蛋白抗体甲状腺疾病抗甲状腺微粒体抗体甲状腺疾病抗乙酰胆碱受体抗体重症肌无力抗平滑肌抗体自身免疫性肝炎临床免疫检查课件426、其他组织和细胞抗体抗线粒体抗体AMA AMA-

17、M2 P三、肿瘤标志物(tumor marker)检测肿瘤标志物(tumor marker,TM)是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。有助于：肿瘤诊断、疗效、监测复发、预后评估临床免疫检查课件43三、肿瘤标志物(tumor marker)检测肿瘤标志物(t、甲种胎儿球蛋白（alpha fetoprotein, AFP)甲胎蛋白是在胎儿早期由肝脏合成的一种糖蛋白，胎儿血浆中AFP值可达3000g/L,周岁婴儿浓度接近成人水平，一般健康成人血浆AFP浓度低于20 g/L。临床免疫检查课件44、甲种胎儿球蛋白（alpha fetoprot甲胎蛋白AFP临床意义（1）

18、原发性肝细胞癌 AFP 300 g/L（2）生殖腺胚胎癌，胃癌，胰腺癌AFP也可升高（3）病毒性肝炎，肝硬化 300 g/L（4）妇女妊娠3个月后开始升高，7-8个月达到高峰，分娩后3周恢复正常。临床免疫检查课件45甲胎蛋白AFP临床意义临床免疫检查课件45、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA)癌胚抗原是由胎儿早期的消化管及某些组织合成的一种富含多糖的蛋白复合物。是一种广谱肿瘤标志物。临床意义：结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等。 连续随访检测。 结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病和肺部疾病轻度升高。 吸烟者及肾功异常者。临床免疫检查课件46、癌胚抗原（carc

19、inoembryonic antige、其他肿瘤标志物前列腺特异抗原测定 前列腺癌（prostate specific antigen, PSA)糖链抗原19-9胰腺癌（carbohydrate antigen 19-9,CA19-9)癌抗原125 CA125 卵巢癌癌抗原242 CA242 胰腺癌、结肠癌、胃癌临床免疫检查课件47、其他肿瘤标志物前列腺特异抗原测定 前列腺癌临床免疫检 四、病毒性肝炎病原标志物检测及其他病原体感染免疫检测临床免疫检查课件48 四、病毒性肝炎病原标志物检测临床免疫检查课件48A病毒性肝炎Hepatitis Virus肠道传播肠道外传播F, TTV? 其它ENAN

20、BBDC病毒性肝炎- 背景G临床免疫检查课件49A病毒性肝炎肠道传播肠道外传播F, TTVENANBBDC病毒性肝炎病原体 肝炎病毒(Hepatitis Virus) 主要7型甲型肝炎病毒(HAV)乙型肝炎病毒(HBV)丙型肝炎病毒(HCV)丁型肝炎病毒(HDV)戊型肝炎病毒(HEV)庚型肝炎病毒(HGV)输血传播肝炎病毒（TTV)临床免疫检查课件50病毒性肝炎病原体 肝炎病毒(Hepatitis 传染源粪便血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液粪便传播途径粪-口经皮肤/经粘膜经皮肤/经粘膜经皮肤/经粘膜粪-口慢性感染否是是是否病毒性肝炎类型ABCDE基因组类型 s

21、sRNA dsDNA ssRNA ssRNA ssRNA临床免疫检查课件51 传染源粪便血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液血（一）甲型病毒性肝炎甲肝是一种急性传染病经粪-口传播，可爆发流行，病后免疫巩固。不转变为慢性临床免疫检查课件52（一）甲型病毒性肝炎甲肝是一种急性传染病临床免疫检查课件52甲型肝炎病毒标志物检测1 甲型肝炎病毒抗原和HAV-RNA测定 与发病前两周即可于血中和粪便中检测，对早期诊断具有特异性。2 甲型肝炎病毒抗体测定 IgM阳性是早期特异性诊断指标，提示甲肝感染期； IgG阳性是恢复期指标，终身存在。临床免疫检查课件53甲型肝炎病毒标志物检测1 甲型肝炎病毒抗原

22、和HAV-RNA测（二）Hepatitis B Virus(乙型肝炎病毒)乙型肝炎的病原体在全世界广泛流行，估计全球半数以上人口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性感染中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率达9.8%临床免疫检查课件54（二）Hepatitis B Virus(乙型肝炎病毒)乙型Hepatitis B Virus临床免疫检查课件55Hepatitis B Virus临床免疫检查课件55HBV virionThe infectious virion is called the DANE particle.临床免疫检查课件56HBV virionThe infectious

23、virioBoth comprised of HBsAg临床免疫检查课件57Both comprised of HBsAg临床免疫检查HBV nomenclatureHBV: hepatitis B virusHBsAg: hepatitis B virus surface antigenHBsAb: hepatitis B virus surface antibodyHBcAg: hepatitis B virus core antigenHBcAb: hepatitis B virus core antibodyHBeAg: hepatitis B virus e antigenHBeAb

24、: hepatitis B virus e antibody临床免疫检查课件58HBV nomenclatureHBV: hepatitis抗原组成1.-HBsAg位于病毒表面，是一种糖蛋白4种亚型(adr,adw,ayr,ayw)欧美国家: adw我国汉族: adr我国少数民族: ayw判断HBV感染的指标之一刺激机体产生保护性抗体即抗-HBs临床免疫检查课件59抗原组成1.-HBsAg位于病毒表面，是一种糖蛋白临床免疫抗原组成2.- HBcAg位于Dane颗粒核心部分和肝细胞核内，在血清中不易检出游离的HBcAgHBcAg判断病毒复制活跃的指标,血液传染性强,预后差刺激机体产生抗-HBc(

25、非保护性抗体)抗-HBc包括IgM ,IgG, IgA在乙肝急性期、慢性肝炎、肝癌和HBsAg携带者中常可检出抗-HBc总抗体，主要反映抗-HBc IgG抗-HBc IgM在感染后最早出现，常提示病毒处于复制状态临床免疫检查课件60抗原组成2.- HBcAg位于Dane颗粒核心部分和肝细胞抗原组成3.- HBeAg位于HBV的核心,是一种可溶性蛋白抗原HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚酶在血中的消长动态相符合血中HBeAg的出现可作为HBV复制、病情活动及较强传染性的指标刺激机体产生抗-HBe抗-HBe能与受染肝细胞表面的e抗原结合,通过补体介导破坏受染的肝细胞,抗-HBe的出

26、现是预后良好的征象临床免疫检查课件61抗原组成3.- HBeAg位于HBV的核心,是一种可溶性蛋抗原组成4.- Pre-S抗原位于HBV的外衣壳上，有两种Pre-S1 ，Pre-S2Pre-S1刺激机体产生抗Pre-S1，能阻断HBV与肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒的作用Pre-S1抗原比HBeAg作为病毒复制指标敏感， Pre-S1抗原转阴越早， Pre-S1抗体转阳越早，病程越短，预后越好Pre-S2是HBV侵入肝细胞的主要结构成分，刺激机体产生抗Pre-S2是HBV的中和抗体抗Pre-S1和抗Pre-S2出现，表示病情好转，趋向痊愈临床免疫检查课件62抗原组成4.- Pre-S抗原位于

27、HBV的外衣壳上，有两种血源性传播输血、注射、外科和牙科手术、针刺等剃刀、牙刷和蚊虫叮咬等母婴垂直传播性传播HBV 传播途径临床免疫检查课件63血源性传播HBV 传播途径临床免疫检查课件635.病原学诊断(1)-抗原抗体检测项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBc IgM方法ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，最常用，定性)发光免疫分析(定量)反相间接血凝试验(少用)临床免疫检查课件645.病原学诊断(1)-抗原抗体检测临床免疫检查课件645.病原学诊断(2)核酸检测核酸杂交探针PCR引物临床免疫检查课件655.

28、病原学诊断(2)核酸检测核酸杂交临床免疫检查课件65HBsAg 感染的标志Anti-HBs 既往感染/接种疫苗Anti-HBc IgM 急性感染标志Anti-HBc IgG 既往或慢性感染HBeAg 急性病毒复制，有传染性 Anti-HBe 病毒不再复制HBV-DNA 急性病毒复制，比HBeAg更准确；主要用于监测治疗反应临床免疫检查课件66HBsAg 感染的标志临床免疫检查课件66血清学检测的临床意义HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义 急性或慢性感染(大三阳)+-+-+乙肝后期或慢性感染(小三阳)-+-潜伏期或急性乙肝早期-+痊愈或恢复期,有免疫力-+-痊愈

29、,有免疫力疫苗接种或曾经感染过,有免疫力临床免疫检查课件67血清学检测的临床意义HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-（三）丙型肝炎病毒RNA病毒从急性感染(或隐性感染)变成慢性肝炎的平均过程约10年，发展到肝硬变约20 年，少数患者恶变为原发性肝细胞性肝癌需30年左右临床免疫检查课件68（三）丙型肝炎病毒RNA病毒临床免疫检查课件68丙肝与乙肝的比较无症状及无黄疸病例较多，有些患者不易被发现传播方式与乙型肝炎相似，两者均可通过输血、 血制品、血液透析及静脉内滥用药物等途径传播丙型肝炎也可能有性接触传播及母婴传播，但不 如乙型肝炎发生机率高有无症状丙肝病毒 慢性携带者有向慢性肝炎或肝硬变发展的倾向，其发生率甚至比乙型肝炎更高。与乙型肝炎相似，丙型肝炎也可发展为原发性肝癌。临床免疫检查课件69丙肝与乙肝的比较无症状及无黄疸病例较多，有些患者不易被发现临丙型肝炎病毒标志物检测丙型肝炎病毒RNA测定 有助于HCV感染的早期诊断，阳性提示复制活跃，传染性强；阴性提示复制受抑，预后较好。丙型肝炎病毒抗体测定 IgM主要用于早期诊断，持续阳性作为转成慢性肝炎的标志，或提示病毒持续存在并复制。IgG表示已有HCV感染。临床免疫检查课件70丙型肝炎病毒标志物检测丙型肝炎病毒RNA测定临床免疫检查课件（四）丁型肝炎1984年在我国首次发现。丁型肝炎病毒（HDV）是RNA病