免疫学应用-本科课件

1、免疫学应用免疫教研室 赵俊杰 2012.5 掌握：抗原或抗体检测的基本原理；凝集反应、沉淀反应的概念及方法。人工主动免疫和人工被动免疫的概念和特点。 熟悉：熟悉免疫标记技术的常见方法；免疫预防和免疫治疗的基本概念和种类。 了解：细胞因子的检测。免疫重建的概念；常用免疫增强剂、免疫抑制剂及新型疫苗的发展。 目的要求免疫学检测 免疫预防 免疫治疗免疫学检测 利用免疫学原理建立的免疫学检测技术主要应用于对多种免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应和肿瘤等）的诊断、疗效评估、发病机制探讨、以及对抗原性物质或免疫细胞的定性、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞受体的检测等。

2、抗原或抗体检测 免疫细胞的检测 免疫分子的检测抗原-抗体检测技术应用1.已知的抗原检测未知的抗体2.已知的抗体检测未知的抗原3.体内各种大分子物质4.已知抗体检测半抗原抗原抗体反应的特点 特异性：抗原表位和抗体可变区之间的空间构象互补 可见性：抗原抗体比例 可逆性：非共价可逆性结合 1 电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。2 温度：一般常使用反应在37度水浴或孵育箱中进行。3 酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度一般为PH68。4.抗原和抗体的性质抗原-抗体反应的影响因素抗原-抗体反应检测方法 凝集反应 沉淀反应 补体参与的反应 免疫标记技术凝集反

3、应（agglutination） 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集 现象，称为凝集反应。 直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。 间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。沉淀反应（ precipitation ） 可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等）与相应抗体结合后，在一定条件下，出现肉眼可见的沉淀。补体参与的反应 补体结合试验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素（红细胞的特异抗体）是否发生溶血反应作指示的一种高灵敏度的抗原与抗体结合反应。二 免疫细胞的检测 检

4、测各群体淋巴细胞的数量与功能是观察机体免疫状态的重要手段。外周血是病人主要的检测标本，但仅代表再循环的淋巴细胞。实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作为标本进行检查。PBMC多形核白细胞红细胞血浆分离液玻璃平皿单核细胞吸附,未吸附的为淋巴细胞.根据比重的不同将血液离心分层取PBMC（1）免疫细胞亚类及计数 1.外周血单个核细胞的分离 常用密度梯度离心法 2.亚群的分离 尼龙棉柱分离-B细胞 E花环分离-T细胞 流式细胞术 免疫磁珠TE花环 3.淋巴细胞亚群的计数 根据表面标志不同，分类计数 免疫荧光 CDC （2）免疫细胞功能测定 1、T细胞功能试验： T细胞增殖试验 3H-TdR掺入法 MTT法

5、 细胞毒试验 2、B细胞功能测定：溶血空斑试验 3、皮肤实验： 检测细胞免疫功能三 免疫分子的检测1. Ig检测 已知抗原检测 已知抗体定性、定量检测：免疫比浊等2. C检测 免疫比浊、 ELISA、RIA等。3. CK检测 增殖法、集落形成法、胞毒活性测定 PCR、原位杂交技术等。4. CD分子等检测 相应抗体鉴定5. HLA分型 中国古代种人痘Boy with smallpox 1979年WHO宣布在全球范围内消灭了天花病毒。 人工主动免疫：是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，剌激机体产生特异性免疫力。 1、灭活疫苗：用物理或化学的方法将病原微生物杀死制备而成的制剂。又称死疫苗。2、减毒活

6、疫苗：用人工变异或从自然界筛选获得的减毒或无毒的活的病原微生物制成的制剂。又称活疫苗。3、类毒素：用0.3-0.4%甲醛处理外毒素，使其失去毒性，保留抗原性的物质。4、新型疫苗：亚单位疫苗、合成疫苗、基因工程疫苗 人工被动免疫：指应用人工的方法直接给机体输入免疫效应分子，使其获得特异性免疫力，到达紧急预防和治疗的目的。 1、抗毒素：是抗细菌外毒素的抗体。多为马血清制剂，具有抗体性和免疫原性。 2、人丙种球蛋白：从正常人血浆或健康产妇胎盘中提取制成。 3、人特异性免疫球蛋白：来源于恢复期病人及含高价特异性抗体供血者血浆，或接受类毒素和疫苗免疫者的血浆。 项 目人工主动免疫人工被动免疫输入物质 抗

7、原 抗体产生免疫力时间 慢（2-3周） 快（输注即生 效）免疫力维持时间 数月至数年 2-3周主要用途 预防治疗或紧急预防人工主动免疫和人工被动免疫的特点免疫预防主要方式是通过接种疫苗实现理想疫苗： 安全 有效 实用我国推荐的儿童免疫程序年 龄疫 苗出生时卡介苗2个月三价脊髓灰质炎疫苗1三价脊髓灰质炎疫苗2,百白破13个月三价脊髓灰质炎疫苗3,百白破24个月5个月百白破38个月麻疹疫苗1.52岁百白破44岁三价脊髓灰质炎疫苗4 7岁卡介苗麻疹疫苗白喉破伤风二联疫苗12岁卡介苗(农村) 新疫苗 类型： 亚单位疫苗 合成肽疫苗 基因工程疫苗结合疫苗载体载体氨基酸载体免疫治疗概念： 指针对机体低下或

8、者亢进的 免疫状态，人为地增强或抑制机 体的免疫功能的治疗方法1.特异性免疫治疗主动免疫治疗：人为提供具免疫原性的 制剂，使机体主动产生特异免疫力被动免疫治疗：人为提供现成免疫物质， 直接发挥免疫效应。免疫增强疗法：感染、肿瘤、 免疫缺陷病的治疗2.非特异性免疫治疗免疫抑制疗法：移植排斥、自身免疫病、 超敏反应病采用免疫增强剂进行的免疫治疗免疫因子：有转移因子和免疫核糖核酸化学合成药物：如左旋咪唑和西咪替丁微生物制剂：有卡介苗和短小棒状杆菌中药制剂：如香菇、灵芝、黄芪等 上述免疫增强剂能非特异增强机体免疫功能。采用免疫抑制剂进行的免疫治疗化学合成药物：如激素和某些抗肿瘤药物真菌代谢产物：如环孢素、FK-506等传统中药： 如雷公藤多甙 免疫抑制剂主要用于抗器官移植排斥反应及自身免疫性疾病。3.免疫重建与免疫替代疗法前者指针对免疫缺陷病人输入造血干细胞而重建免疫系统；后者指输入机体缺乏的免疫活性物质，以暂时维持免疫功能。 名 称 用途或特点免疫增强疗法 感染、肿瘤、免疫缺陷病的治疗免疫抑制疗法 移植排斥、自身免疫病、 超敏反应病主动免疫治疗 人