断血流皂苷A的药动学研究

1、断血流皂苷A的药动学研究【摘要】目的研究断血流皂苷A在大鼠体内的药动学。方法建立柱切换高效液相色谱法测定血浆中断血流皂苷A浓度的方法。色谱条件：预处理柱(P)：大连装Krasil18204，5；预处理流动相：甲醇-水；预处理流动相流速：1.0lin-1；分析柱(A)：Lihrspher100RP-18e(2504，5)；分析流动相：甲醇-0.01ll-1磷酸盐缓冲液(磷酸调pH=3.0)6040；分析流动相流速：0.6lin-1；分析柱柱温：45；检测波长：250n。安康大鼠禁食24h后，尾静脉注射断血流皂苷A溶液，测定不同时间的血药浓度。用3P87药动学程序对血药浓度一时间数据进展拟合。结果

2、大鼠在尾静脉注射断血流皂苷A后，其主要药动学参数为：Vt(0.310.05)Lkg-1，L(1.130.32)lin-1，Ke(0.900.18)h-1，t1/2(0.760.11)h，曲线下面积AU(24.984.82)(gh)l-1。结论断血流皂苷A在大鼠体内呈一室开放模型，进入体内迅速分布，代谢消除也较快。断血流皂苷A(linpdisideA)系从断血流中提取的主要成分,属于齐墩果烷型三萜皂苷类，含量较高，且化学性质稳定，断血流为20世纪70年代从民间验方挑选，经临床验证后被国家药典录入的少数几个单味药之一，其疗效确切，平安性高，被公认为中医临床首选口服妇科止血药。临床上断血流制剂被广泛

3、用于治疗各种出血、单纯性紫癜、原发性血小板减少性紫癜等症1。近年来，有关断血流的研究主要集中于有效成分的提娶鉴别、药理、药效及临床应用。而断血流药动学研究未见报道。为此，本文参照相关文献28，建立了柱切换高效液相色谱法测定血浆中断血流皂苷A浓度的方法，对大鼠静注断血流皂苷A后的药动学进展了研究，为其新剂型的研究和临床合理用药提供根据。1仪器、试药与动物Agilent公司1100系列高效液相色谱仪(包括DAD检测器)；FV-2A高压切换阀；高速离心机(上海安宁科学仪器司)；BSZ-2型自动双重水蒸馏系统(上海博通)；SartriusBP221S型电子天平(美国Sartrius公司)；TG328B

4、型析天平(万分之一天平)(上海天平仪器厂)。断血流皂苷A对照品中国药品生物制品检定所，甲醇为色谱纯，水为三重蒸馏水自制，其余试剂为分析纯。安康SD雄性大鼠(江西中医学院动物中心)，雄性，体质量(199.74.3)g，实验前大鼠禁食12h，可自由饮水。2方法2.1色谱条件预处理柱(简称P)：大连装Krasil18204，5；预处理流动相(简称PP)：甲醇-水；预处理流动相流速：1.0lin-1；分析柱(简称A)：Lihrspher100RP-18e(2504，5)；分析流动相简称AP：甲醇-0.01ll-1磷酸盐缓冲液(磷酸调pH=3.0)6040；分析流动相流速：0.6lin-1；分析柱柱温：

5、45；检测波长：250n。2.2对照品溶液的配制精细称取枯燥至恒重的断血流皂苷A对照品7.5g，置25l量瓶中，用分析流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得含断血流皂苷A为0.3gl-1的对照品溶液。2.3样品处理步骤取大鼠血浆样品1.0l，置2l具塞离心试管中，加0.3lL-1的三氯乙酸0.2l，离心(4000rin-1，10in)，精细量取上清液置于试管中，氮气吹干，残渣用15%甲醇溶液转入1l量瓶中，加15%甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。2.4柱切换系统及操作本实验应用自装定时装置，控制切换阀自动切换。该装置可预置T1(样品预处理时间)和T2(A与P串联时间)。样品进样的同时启动

6、该装置，首先使切换阀处于P与A并联的A(预处理)状态，经T1(2in)时间的预处理后切换阀自动切换至P与A串联的B状态，使保存在P上的样品组分被AP洗脱至A上，经T2(2in)时间后，即自动切回初始A状态；待下次进样时再次启动该装置重复操作。2.5专属性实验取空白大鼠血浆按样品处理步骤方法操作，其色谱图见图1(A)；空白大鼠血浆加断血流皂苷A对照品的色谱图见图1(B)；大鼠静脉注射给药断血流皂苷A后的血浆色谱图见图1()。由图1可知，在本色谱条件下，断血流皂苷A可以检测到，并且与血浆中的内源性物质别离良好。断血流皂苷A的保存时间约为7in。转贴于论文联盟.ll.2.6标准曲线取空白大鼠血清1l

7、，参加上述对照品溶液0.5，0.7，0.9，1.1，1.3，1.5l，置于10l棕色量瓶中，加甲醇至刻度，得到浓度为0.015，0.021，0.027，0.033，0.039，0.045gl-1的系列对照品溶液。按照“2.3项下样品处理步骤制备成对照品溶液，在拟定色谱条件下精细汲取10l注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(X，g)对峰面积进展线性回归，得方程为：Y=0.3113X-0.0441r=0.9995结果说明断血流皂苷A在1545gl-1范围内具有良好的线性关系。2.7日内和日间精细度取一定量高、中、低3种浓度断血流皂苷A对照品大鼠血浆液，按“2.3项下样品处理步骤处理，采用断血流皂

8、苷A血浆柱切换高效液相色谱法测定，在1天内连续测定6次，得日内精细度分别为1.22，0.81和0.39(n=6)；连续3d测定，测得各浓度的日间精细度RSD分别为：1.67、0.74和0.45(n=6)。2.8重复性实验取断血流皂苷A对照品大鼠血浆液，按“2.3项下样品处理步骤处理制备6份对照品溶液，采用断血流皂苷A血浆柱切换高效液相色谱法测定，得RSD为2.1n=6，说明本方法重复性良好。2.9样品稳定性实验取一定量高、中、低3种浓度断血流皂苷A对照品大鼠血浆样品，分别进展样品处理液稳定性实验：进样条件下样品处理液在5放置0，4，10，20，40h进样分析；样品冷冻放置稳定性试验：20冷冻储

9、藏，分别放置0，6，20，40d后按“2.3项下样品处理步骤处理进样分析；室温放置稳定性试验：室温放置0，1，2，4h后按“2.3项下样品处理步骤处理进样分析。所用测定结果准确度均在89%112%范围内，RSD均5，断血流皂苷A在上述条件下均稳定性良好。2.10净化回收率取一定量高、中、低3种浓度断血流皂苷A对照品血浆液，按前述色谱条件测定含量5次，另取一样进样量断血流皂苷A对照品溶液，直接进样测定。按峰面积计算，得血浆净化回收率。结果见表1。表1净化回收率略2.11方法回收率于空白大鼠血浆中参加一定量高、中、低3种浓度断血流皂苷A对照溶液，按“2.3项下样品处理步骤处理，按前述色谱条件测定含

10、量5次，求出回收量浓度即实测值与参加量浓度之比，即为断血流皂苷A血浆空白加样回收率。结果见表2。表2方法回收率略2.12药动学研究方法随机取大鼠6只。按10gkg-1尾静脉注射断血流皂苷A，给药后5，10，20，50，90，150，240in时分别从眼眶取血，肝素抗凝，按“2.3步骤别离血浆，并于-20保存。采用柱切换高效液相色谱法测定断血流皂苷A的血药浓度，大鼠iv给药后的平均药物浓度一时间曲线见图2。将不同时连续血流皂苷A的血药浓度用3P87软件处理，说明大鼠在尾静脉注射断血流皂苷A后，其血药浓度随时间变化符合一室开放模型，主要药动学参数为：Vt(0.310.05)Lkg-1，L(1.13

11、0.32)lin-1，Ke(0.900.18)h-1，t1/2(0.760.11)h,曲线下面积AU(24.984.82)(gh)l-1。3讨论本实验首次建立了生物样品中断血流皂苷A的HPL测定法，断血流皂苷A与血及各组织中的其他成分完全别离，测定结果不易被干扰，方法回收率较高，精细度良好。本法操作简便、本钱低廉，适用于断血流皂苷A的药动学研究。断血流皂苷A在大鼠体内呈一室开放模型，进入体内迅速分布，代谢消除也比拟快，其生物半衰期为46in。【参考文献】1LeeJH，KiJ，KiPharakinetianalysisfrhEininrheuundulatuLJ.JEthnpharal，2022

12、，84(1)：5.2潘丽怡，车庆明，何红.灯盏花乙素的药动学研究J.中国药学杂志，2022，41(9)：689.3葛庆华，周臻.灯盏花素在犬体内的药动学和绝对生物利用度研究J.中国医药工业杂志，2022，34(12)：618.4庞志功，汪宝琪，李海峰.紫草素复方的药动学研究J.西安医科大学学报，2001，22(4)：319.5项琪，程刚，陈济民.芍药甘草汤在大鼠体内药动学研究J.中国药学杂志，2000，35(9)：615.6邹节明，孟杰，颜正化，等中药复方有效成分淫羊藿苷的药动学研究J.中草药，2002，33(1)：55.7GuY，angGJ，FaeettJP.DeterinatinfastragalsideIVinratplasabyliquidhratgraphyeleetrsprayinizatinassspetrnetryJ.JhratgrB，2022