血小板浓缩制品PRPPRFCGF综述

1、合用标准文案血小板浓缩制品血小板作为一种多功能细胞,不仅在血栓形成和止血中发挥作用,而且在血管发生、组织修复和炎症过程中也扮演重视要的角色1。血小板被激活后，可释放多种生物活性物质，在促使组织愈合方面起重要作用。目前的血小板浓缩制品经过几代发展主要有以下几种：富血小板血浆（plateletrichplasma，PRP），富血小板纤维蛋白（plateletrichfibrin，PRF）,浓缩生长因子（CGF，ConcentrateGrowthFactors）。一发展历史1984年，Assoion2等发现了人血浆中提取的富血小板血浆(plateletrichplasma，PRP)中含有多种生长因子

2、，当PRP与氯化钙以及牛凝血酶混杂后，各种生长因子即从血小板中的颗粒中释放出来。但是牛凝血酶的使用经常陪同着凝血因子、抗体的形成，而且存在着威胁生命的凝血纷杂发生的可能性3。作为第二代浓缩血小板，富血小板纤维蛋白（PRF）是由Choukroun。PRF是富纤维蛋白凝胶，由患者静脉中抽取的新鲜血液制作而成，属于新一代的血小板浓缩物，它制备简单无需任何生物增加剂的办理。在PRF经过离心分其他制备过程中，血小板被激活同时大量脱颗粒细胞中包括的重要的生长因子释放出来4。浓缩生长因子(CGF)是Sacco第一研发的5，与PRF相同，CGF由静脉血分离制备而成。但是，两项技术的离心速度有所不一样样。与PR

3、F不一样样，CGF技术采用的速度从2400到2700rpm不等，这是为了分别静脉血中的细胞，因此CGF中富含纤维蛋白凝块比PRF中的大得多，而且更粘稠，纤维蛋白的含量也更多。二详细介绍1PRP文档合用标准文案1.1PRP制取方法及组成结构PRP最早由Assoian于1984年提取制备2，是自己静脉血经梯度离心分层后位于白细胞上方的富含血小板的血浆部分，含有全血中70%以上的血小板，于其中加入凝结剂(常用10%氯化钙和凝血酶)可形成胶状物，激活后血小板颗粒释放出多种生长因子，如转变生长因子-(TGF-)、骨形成蛋白(BMPs)、血小板衍生生长因子(PDGF)、类胰岛素生长因子(IGF)、血管内皮

4、生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)等6-8。这些生长因子在PRP中浓度很高，依照不一样样的制作方法，约为体内正常浓度的几倍甚至几百倍9-11。PRP血浆成分中的纤维素，纤连蛋白及亲玻粘连蛋白，可作为生长因子的载体，同时也是一种特别优异的细胞黏附分子。1.2PRP的现状在过去的20余年间，PRP已经逐渐被应用于临床，其中包括促使软组织愈合和促使骨组织再生方面的应用。应用很多的领域主要有整形美容和创伤外科专业12，13。1998年PRP由Marx首次引入口腔医学领域中，并逐渐成为口腔医学的研究热点之一。其中PRP在口腔种植学骨增量方面相关的研究进行的很多，而

5、且获得了多数的必然。但是，PRP的应用素来争议不断，这些争议集中于其疗效的牢固性14-19和使用的安全性上。后者的矛盾最为尖锐。此矛盾的产生源于PRP在制备过程中需要加入异种凝血酶和抗凝血制品，这被以为可能以致免疫排斥反应的发生和感染性疾病的流传。2PRF2.1PRF制取方法及组成结构为了连续PRP的优势，同时防备争议，法国科学家Choukroun等于2000文档合用标准文案年提取制备了新一代自体血液制品Choukroun富血小板纤维蛋白（Choukrounplatelet-richfibrin，ChoukrounsPRF）20。ChoukrounsPRF是自己静脉血经离心分层后位于贫血小板血

6、浆层（Plateletpoorplasma，PPP）与红细胞碎片层之间的富含血小板的纤维蛋白凝胶。在制备过程中，ChoukrounsPRF的纤维蛋白原发生缓慢的聚合，形成三分子的立体网状结构，其凝胶组织拥有疏松、孔隙大、弹性好，滞留大量血小板及生长因子的特点。传统的PRP为四分子结构，而PRF经过缓慢自然的聚合，产生的纤维蛋白为三分子立体网状结构，其凝胶组织较为废弛，孔隙大，弹性高。组织细胞及循环血中的干细胞能更快的长入其中，细胞因子也被大量的滞纳，并与纤维蛋鹤发生化学键结合。PRF的纤维蛋白作为一种基质为细胞的附着，迁移以及分化供应了有利的场所22。生长因子主要包括转变生长因子-（Trans

7、forminggrowthfactor-，TGF-）、血小板衍生生长因子-AB(platelet-derivedgrowthfactor-AB，PDGF-AB)、类胰岛素生长因子-(insulin-likegrowthfactor-，IGF-)等。由于ChoukrounsPRF纤维蛋白原发生缓慢聚，使血小板和生长因子以化学键结合于PRF的纤维蛋白原上，利于其充发散挥共同作用21。纤维蛋白基质内还含有大量的免疫细胞，可能参加炎症反应的调治。2.2ChoukrounsPRF促使骨组织再生的系统、机理ChoukrounsPRF作用的发挥有赖于其富含血小板内的-颗粒脱颗粒后释放的多种生长因子。生长因子

8、能够引诱成骨细胞迁移、增殖、分化，促使骨愈合。ChoukrounsPRF内还富含散在的免疫细胞，这些免疫细胞能够释放多种炎症因子，可能参加炎症调治，从而减少周围软组织的炎症反应，同时拥有抗感染能力。Dohan等提出ChoukrounsPRF不仅含有大量血小板，而且能够加文档合用标准文案强机体的防守反应23。在制备ChoukrounsPRF过程中，收集的血液中未添加抗凝剂，也未使用凝血酶和氯化钙引诱血小板活化及纤维蛋白聚合，模拟生理性的凝血过程，发生了近似天然纤维蛋白网形成的缓慢聚合，形成三分子立体网状结构24。这种网状结构便于营养物质和氧气弥散至细胞周围，为成骨细胞的迁移、增殖及分化供应场所；

9、网状结构还能够够为骨愈合供应支架。与PRP比较，ChoukrounsPRF拥有更强的成骨能力。LingHe等研究以为ChoukrounsPRF拥有逐渐释放生长因子的生物特点，并使其保持较高水平25，从而表现更优越的成骨作用。孙洁等研究显示ChoukrounsPRF内大多数血小板外膜圆满，大量-颗粒圆满未破碎，从而证明PRF内大量血小板仍处于未圆满激活状态26。同时，DohanDM等研究以为PRF的网状结构将血小板、生长因子以化学键结合24。因此，随着纤维蛋白逐渐溶解，结合的生长因子缓慢释放，同时结合的血小板被激活后脱颗粒释放出生长因子，使生长因子连续发挥作用，延长了生长因子的作用时间，加强了成

10、骨奏效。还有研究提出，ChoukrounsPRF内的大量免疫细胞也能够使ChoukrounsPRF内释放的TGF-和VEGF在实验过程中素来保持较高水平27。上述研究证明ChoukrounsPRF拥有优异的成骨能力。2.3PRF促使软组织愈合影响的作用原理第一，PRF富含的多种生长因子可共同作用，促使型胶原及纤连蛋白的合成，促使基质干细胞的趋化及增殖，刺激成纤维细胞及血管内皮的分化增殖29，在组织愈合过程中起重要调控作用。其次，PRF的三维立体网状结构作为基质，为细胞的附着，迁移以及分化提供了有利的场所28，使组织细胞及循环血中的干细胞能更快的长入其中，而且，文档合用标准文案这种结构弹性好，孔

11、隙大，利于营养物质及氧气的弥散，加速愈合过程。第三，大量的滞纳的血小板及生长因子与纤维蛋鹤发生化学键结合，这种特别的结构与多种生长因子有较强的亲和力，从而使生长因子缓慢释放，延长PRF在创口的作用时间30。也有研究表示，PRF的立体结构能够滞纳大多数白细胞，调治炎症反应，并使多种细胞因子缓慢连续释放，对于组织修复产生积极奏效31-33。2.4ChoukrounsPRF的突出特点：制备操作简单；制备过程无需增加抗凝试剂及凝血酶制品，种植手术术前术中均可进行，不存在交错感染危险34，使用安全；圆满取自自体血，经济方便；制备过程模拟天然凝血过程，制得的纤维蛋白凝胶分子结构近似于天然血凝块中的纤维蛋白

12、；富含血小板及各种细胞因子，拥有促使组织愈合的能力；含有免疫细胞释放的炎症因子和修复介质，拥有调治炎症反应和抗感染的能力35。在制备上，其突出之处在于不增加任何生物制剂，只需简单的离心，这就防备了过去血液制品存在的伦理道德争讲和疾病流传的风险。在生物性能上，其突出之处在于富含拥有调治组织修复能力的血小板及其活化后释放的多种细胞因子36，如转变生长因子（transforminggrowthfactor-1，TGF-1），血小板衍生生长因子（platelet-derivedgrowthfactor-AB，PDGF-AB），血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfact

13、or，VEGF）以及胰岛素样生长因子（insulin-likegrowthfactor-，IGF-），这些生长因子能够有效的调控成骨细胞，成纤维细胞等与组织修复亲密相关的细胞的增殖、分化以及凋亡37-40。最值得关注的是，由于ChoukrounsPRF的制备过程促发纤维蛋白的缓慢文档合用标准文案聚合，使得其内的各种细胞因子有充分的时间和条件与纤维蛋白分子发生化学键结合，以及发挥相互的共同作用41，这将大大减少细胞因子的流失，加强其生物学功能。由于ChoukrounsPRF生物学功能的发挥有赖于其特其他分子结构，因此，分子结构也是其突出特点之一。ChoukrounsPRF的纤维蛋白聚合过程为缓慢

14、自然的聚合，产生的纤维蛋白分子为三分子结构，呈立体网状，形成的凝胶较为废弛，拥有较大的孔隙及优异的弹性。这是ChoukrounsPRF不一样样于PRP的显然特点。由于PRP为人工加入的凝血酶促发的纤维蛋白聚合，聚合速度快。因此产生的纤维蛋白为四分子结构，较为致密，不利于细胞因子的滞纳和细胞的长入。2.5小结ChoukrounsPRF用于口腔种植领域拥有以下优势：1、圆满取自自体血，未加入任何人工生物制品，既防备了伦理道德的争议，又防备了血液交错感染的风险；2、富含大量血小板、生长因子，拥有促使骨组织再生的功能；3、富含大量免疫细胞，能够减少组织愈合过程中的炎症反应及拥有抗感染能力；4、Chou

15、krounsPRF形成的网状结构利于成骨细胞迁移，增殖及分化，充发散挥生长因子的作用，同时为组织愈合供应支架；5、制备过程简单，便于操作。3CGF3.1CGF的制备方法浓缩生长因子(CGF)是Sacco第一研发的5，与PRF相同，CGF由静脉血分离制备而成。但是，两项技术的离心速度有所不一样样。第一收集10ml患者的静脉血，注入试管中，注满后勿摇动，马上放入Medifuge（Silfradent意大利）离文档合用标准文案心加速机的转筒中。设定制备CGF程序，旋转12分钟后，可见试管中分为三层（最上层为血清，中间纤维蛋白层，基层为红细胞及血小板），将血清分别出来，并积蓄在特定的积蓄器皿中。CGF

16、被分别出来，并积蓄在稀释的抗菌溶液中Lincocin600mg）。基层的红细胞部分及血小板马上积蓄在器皿中，其中富含红细胞、血小板以及铁、钙和其他基本元素、能够用来制备截骨术中的填料，以便混杂生物质料及自体骨。将CGF切割成1-2mm的微粒，随后依次与收集的红细胞部分和骨代资料混杂，为增加混杂物的娇贵度，可增加一些血清。使用特定的收集设备（Silfradent意大利）旋转6秒钟左右将其混杂并搅匀，将这种密度大的糊状粘结剂嵌入骨缺损处。其他CGF拥有极大的可模制性，经过压缩，这种凝结物可能表现为薄膜的形式，或是凝结物自己破碎而产生的碎片，经过用手术钳压制获得CGF隔膜，今后在受损地域敷上CGF隔

17、膜，由于隔膜拥有必然的粘附力与弹性，使这些地域得以粘结愈合，手术结束时能够用少许血清来冲刷伤口。3.2CGF的主要成分及生物学特点CGF作用的发挥有赖于其高浓度的各种生长因子及纤维蛋白原所形成的纤维网状支架。制备CGF过程中特其他变速离心使得血小板被激活，其中的血小板颗粒释放出各种生长因子，他们能促使细胞增殖、基质合成和血管生成，而纤维网状支架又能支持生长因子所引诱生成的再生组织。其中的浓缩生长因子包括血小板衍生生长因子(PDGF)、转移生长因子-(TGF-)、类胰岛素生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)以及成纤维细胞生长因子（FGF、骨形成蛋白(BMPs)

18、等。他们各自作用分别为：文档合用标准文案(1)血小板衍生生长因子PDGF是一种相对分子量大体为30kD的糖蛋白，第一在血小板的颗粒中发现也可由巨噬细胞、上皮细胞等合成和分泌，是最早出现在伤口的生长因子，可促使结缔组织的修复和再生42。PDGF在血小板中有3种同分异构体：PDGF、PDGF和PDG，在人类主要以PDGF杂二聚体存在。在机体碰到伤害时。PDGF从脱颗粒的血小板中释放激活其靶细胞(如巨噬细胞、成纤维细胞、骨髓干细胞等)的细胞膜受体，细胞浆内的信号蛋白获得高能磷酸键，信号蛋白活化后引起一系列反应。包括促使伤口处细胞的有丝分裂，形成功能性毛细血管巨噬细胞发挥吞噬作用并释放生长因子等。PD

19、GF主要拥有丝裂原作用，作为一种促有丝分裂因子，在伤害部位表达较高，促使细胞趋化、增殖，而且可增加胶原蛋白的合成能力43。(2)转移生长因子-(TGF-)有两种形式，即TGF-1和TGF-2，相对分子量大体为25kD。在血小板、巨噬细胞等内合成。由血小板脱颗粒释放或活化巨噬细胞分泌，以旁分泌形式作用于成纤维细胞、骨髓干细胞和前体成骨细胞。这些细胞又可合成和分泌TGF-，以旁分泌或自分泌形式发挥作用42。因此，Marx等以为TGF-是能支持长远组织愈合的骨再生因子。TGF的主要功能是促使前体成骨细胞趋化和有丝分裂。促使伤口处胶原基质中的成骨细胞齐聚。其他，TGF能够控制破骨细胞形成和骨吸取，使得

20、骨形成大于骨吸取。(3)类胰岛素生长因子(IGF)是拥有多种生理功能的生长因子，它对多种细胞拥有促使有丝分裂的作用，包括成骨细胞、圆滑肌细胞、骨骼肌细胞、角质细胞等。作为促使细胞增殖的另一种表现，IGF能够控制很多细胞在成熟从前的凋亡。其他，它还参加皮肤、骨骼和神经系统的发育和分化44。其作用系统是：IGF与细胞受体结合发生受体自己磷酸化，后激活酪氨酸蛋白酶。促文档合用标准文案使胰岛素受体底物磷酸化，从而调治细胞的生长、发育和代谢。(4)血管内皮生长因子(VEGF)是1989年Ferrara等第一从牛垂体的滤泡状细胞中纯化的同源二聚体糖蛋白。其主要生理作用是：VEGF与受体结合后促使微血管周围

21、内皮细胞的增殖、迁移，并改变其基因表达；加强血管通透性，促使血浆蛋白的溢出，形成富含纤维素并有利于新血管形成的细胞外基质。在骨折部位存在氧梯度，在低氧状态下，VEGF表达增高，促使成骨细胞的分化，提高碱性磷酸酶的表达，促使骨折愈合45。(5)表皮生长因子(EGF)是一种由53个氨基酸组成的低分子量单链多肽，拥有多种生物学活性。其中以刺激体内多各种类组织细胞分裂和增殖最为突出。其他，EGF能促使基质合成和聚集。促使纤维组织形成46。(6)成纤维细胞生长因子（FGF）对骨再生和发育以及骨折的恢复起重要作用。他们的主要任务是引诱骨再生，而骨再生是骨组织形成过程中最重要的阶段。(7)BMPs（bone

22、morphogeneticproteins）：BMP是一种疏水性酸性多肽，与羟基磷灰石有较高的亲和力，在诸多因子中唯一能够单独引诱骨组织异位成骨。这种活性蛋白使未分化的间充质细胞化学趋化、齐聚、定向分化为成骨细胞，合成胶原促使骨基质形成，形成钙化的骨组织。目前确定的已有20种BMPs，以BMP-2为中心，组成网络化自己调治骨髓基质干细胞的引诱成骨分化47。除了以上提到的这些生长因子外，CGF中还拥有特其他网架结构。采用Medifuge分相器进行精准的分别办理，经过纤维蛋白原分子(FG)的聚合作用，获得的纤维蛋白块可组成三维聚合物网络，内部纤维交错，均以凝胶状态单相连接。在聚合过程中，纤维的直径

23、不断增加，直至发生相互作用。纤维蛋白为富含弹性的有机纤维蛋白网格，纤维单体间的浓缩是三分子和多分子性的，这种纤薄，文档合用标准文案娇贵，弹性及可浸透的网状结构使得骨细胞、红细胞、白细胞、血小板及抗体易于增殖。CGF纤维蛋白分子结构为三键式联系，呈立体网状结构，可有效的滞纳血小板及各种循环分子（如细胞因子）。3.3小结与展望CGF能够促使血管有效增加，它使原有骨量的保持或重建成为可能，CGF可以加速移植的生物质料的交融与重整，几乎不会引起任何感染。纤维蛋白能单独引起血管再生，这一极其重要的特点能够经过纤维蛋白胶的三维结构来讲解，此外还有困在其中的细胞因子的结合作用，纤维蛋白原和纤维蛋白降解产物促

24、使了中性粒细胞的迁移，增大了其表面上的受体CD11和CD18的容量，使中性粒细胞能够粘附内皮细胞并游出，同时还能够够使中性粒细胞粘附到纤维蛋白原上，这些要素还能够形成噬菌作用和酶降解过程。纤维基质能对上皮细胞和成纤维细胞起作用，从而引导受伤部位所覆盖地域的愈合。所有这些要素使我们能够将CGF视作一个纤维蛋白凝结物，它能引起微脉管化，影响上皮细胞在其表面上的迁移。CGF应用于伤害的组织时，经过引导伤害组织的再血管化，免疫调治以及捕获循环血中的干细胞，最后促使组织愈合再生。在离心作用过程中，特别是聚合阶段，纤维蛋白胶凝块的发育与生长使链结构向各个方向膨胀。这样，很多细胞成分被阻截，从而起到多种治疗

25、作用，比方：血浆和血小板细胞因子起到修复、消炎和止痛（TNF-a）的作用；血小板传达信号，释放各种生长因子，其中最重要的是PDGF、TGF-1和IGF-1，促使骨再生。因此，我们获得体积较大、具有极强抵抗力的纤维蛋白胶凝块，可将其用于牙洞填充物、膜支撑体、自体膜修复、与其他填充资料混杂等一系列治疗过程。CGF拥有促使组织生长和愈合能力，有利于所有再生组织的恢复。由于CGF的特别结构，使得其拥有极强的可文档合用标准文案模制性，因此在必然程度上能够代替GBR（引导骨再生技术）中的隔膜，但其在组织中的吸取时间以及间隔软组织向骨缺损区内部生长的确切系统还尚不明确，因此这也将是未来的一个研究方向。其他C

26、GF技术在马上种植、颌骨囊肿的治疗、拔牙位点的保存、促使骨折愈合等领域也有着广泛的研究远景。参照文件巅峰,王捷熙,韩颖.富血小板血浆应用于创伤修复的研究进展J.JournalofExperimentalHematology,2009,17(3):840-843.DohanDM,ChoukrounJ,DissA,etal.Platelet-richfibrin(PRF):asecond-generationplateletconcentrate.PartII:platelet-relatedbiologicfeaturesJ.OralSurgOralMedOralPatholOralRadiol

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