2022年药材显微鉴别法操作规程

1、药材显微鉴别法操作规程起草：起草：日期：审核：日期：批准：日期：生效日期：签字：1302034-01拷贝号：变更记载：制定变更缘由及目的：修订号批准日期生效日期执行 2022 000102生 产部份 质 量部份 企业治理部份分发部门供 应部份 财 务部份 总 工办份营 销部份 产品开发部份 办 公室份适用范围：适用于药材显微鉴别。职责QC定义饮片切片、粉末、解离组织或外表制片及含药材粉末试品，依据各品种鉴别项的规定制片。制剂依据不同剂型适当处理后制片。此法适用于：药材性状鉴别特征不明显或外形相像而组织构造不同；药材呈粉末状或已裂开，不易识别或区分；凡含药材粉末的制剂；用显微化学方法确定药材中有

2、效成分在组织中的分布状况及其特征。面的切片；对于粉末药材包括丸、散等成方制剂可直接装片或作适当处理后装片。药材切片标本的制作方法较多。在药材鉴定的争辩工作中往往将其制成石蜡切片永久切片保存。但由于制片技术简单，费时太多，不适用于日常检验。所以在中药鉴定工作中经常采用徒手切片或滑走切片法制片；为观看叶类、花类及全草类药材的叶片、花冠、萼片、苞片 等的表皮组织及其附属物的特征，还需要将其制成外表装片；为清楚地观看比较硬的细胞组 织，如导管、纤维、石细胞等的形态，往往还要进展“组织解离”后装片；观看花粉、孢子 等的形态特征或构造，需用花粉粒与孢子制片法制片；观看矿物药或较坚硬的动物类药材如 本规程以

3、中国药典现行版和局颁、部颁标准收载品种的显微鉴别工程要求为主，故主要介绍与临时制片技术有关的仪器、用具、试液和操作方法等。仪器与用具2.54物镜头、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像处理软件、滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超声仪等。用具包括粗镊及眼科弯镊与直镊眼科剪与手术剪、解剖针等。载玻片、盖玻片。、乳钵、量筒等。毛笔从刀上刷取切片用、铅笔HB、3H6H、带盖搪瓷盘布、绸布、滤纸、火柴等。试液水合氯醛试液常用封藏液，也是透化剂。可使干缩的细胞膨胀而透亮，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质、叶绿素及挥发油等，加热后透化效果更为明显。甘油醋酸试液斯氏液 此液为常用封藏液。专用于观

4、看淀粉粒形态，可使淀粉粒保持原形，便于测量其大小。甘油乙醇试液 此液为常用封藏液，也是软化剂。常用于保存植物性材料及临时切片，有软化组织的作用。苏丹III试液使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。钌红试液 此液可使黏液染成红色。本液应临用制。间苯三酚试液 此液与盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。典试液 此液可使淀粉粒染成蓝色或紫色；蛋白质或糊粉粒染成棕色或黄棕色。异。a-萘酚试液 此液可使菊糖染成紫红色，并很快溶解。硝酸汞试液 米隆氏试液此液可使糊粉粒染成砖红色。氯化锌碘试液检查木质化与纤维素细胞壁，前者显黄棕色，后者显蓝色或紫色。以上水合氯醛等试液，均应符合

5、中国药典 2022 年版一部附录 XV B 规定规定。制片横切片或纵切片1020m必要时可包埋后切片。选取平坦的薄片置载玻片上，依据观看对象的不同，滴加甘油醋在洒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。粉末制片：主要用于粉末状的药材观看水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。必要时，按上法加热透化。外表制片：凡较厚或颖药材用上述方法不能使之透化或不便于整体装片。将供试品潮湿软化后，剪取欲观看部位约4mm2，一正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。解离组织片：适用于厚壁组织或输导组织等的单个细胞的显微观看。2mm1mm木化组织少或分散存在，承受氢氧

6、化钾法；假设供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，承受硝铬酸法或氯酸钾法。氢氧化钾法5%氢氧化钾溶液适量，加热至玻璃棒挤压能离散为止，倾去硝铬酸法加水洗涤后，照氢氧化钾法操作装片。氯酸钾法置供试品于试管中，加硝酸溶液12及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐 倾去酸液，加水洗涤后，照氢氧化钾法操作装片。花粉与孢子制片取花粉、花药或小的花朵、孢子或孢子囊群枯燥的供试品浸于冰醋酸中软化，用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加配制的醋酐与硫酸9:1的混合液 13ml，23 分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2 次，取沉淀少量置载玻50%1%121g，6ml7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀

7、，用溶解适量，混匀，凝固后即得封藏。磨片制片坚硬的动物、矿物类药，可承受磨片法制片。选取厚度约 12mm 的供试材料，置粗磨石上，加适量水，用食指、中指夹住或压住材料，在磨石上来回磨砺，待两砺至透亮，用水冲洗，再用乙醇处理和甘油乙醇试液装片。含药材粉末的制剂显微制片按供试品不同剂型，散剂、胶囊剂内容物为颗粒状，应研细23包衣者除去包衣12乳钵中研成粉末，取适量粉末；蜜丸应将药丸切开，从切面由外至中心挑取适量样品或用水脱蜜后，吸取沉淀物少量。依据观看对象不同，分别按粉末制片法制片15。细胞壁性质的鉴别1显红色或紫红色。木栓化或角质化细胞壁：加苏丹试液，稍放置或微热，显橘红色至红色。纤维素细胞壁：

8、加氯化锌碘试液，或先加碘试液潮湿后，稍放置，再加硫酸溶液50；显蓝色或紫色。硅质化细胞壁：加硫酸无变化。细胞内含物性质的鉴别淀粉粒加碘试液，显蓝色或紫色。的无偏光现象。糊粉粒加碘试液，显棕色或黄棕色。进展试验。脂肪油、挥发油、树脂加苏丹试液，显橘红色、红色或紫红色。90%乙醇，脂肪油和树脂不溶解蓖麻油及巴豆油例外，挥发油则溶解。菊糖加 10%-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并溶解。黏液：加钌红试液，显红色。草酸钙结晶加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。加硫酸溶液12，渐渐溶解，片刻后析出针状硫酸钙结晶。碳酸钙结晶钟乳体：加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。显微测量系指用目镜测微尺，在显微镜下

9、测量细胞及细胞内含物等的大小。1820mm50100载物台测微尺 在特制的载玻片中心粘贴一刻有精细尺度的圆开玻片。通常将长1mm2mm100200110um，用以标定目镜测微尺。目镜测微尺的标定 用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜筒长度时，目镜测微尺上每一格所代表的长度。取载物台测微尺置显微镜载物台上，在高倍物镜或低倍物镜下，将测微尺刻度移至视野中心。将目镜测微尺正面对上放入目镜镜筒内，旋转目镜，并移动载物台测微尺， 使目镜测微尺的“依据两条重合线间两种测微尺的小格数，计算出目镜测微尺每一小格在刻物镜条件下相当的长度u。当测定时要用不同的放大倍数时，应分别标定。测量方法 将需测量的目的物显微 微片置显微镜载物台上，用目镜测微尺测量目的如纤维、导管、非腺毛等的长度时，需在低倍镜下测量。记录最大值与最小值um