独一味药材中四种环烯醚萜苷的含量测定

1、独一味药材中四种环烯醚萜苷的含量测定【摘要】目的建立独一味中四种环烯醚萜苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱atersSyetry(3.5，3.5100)，柱温：25，流动相为甲醇-水梯度洗脱(08in，12%15%;811in，15%27%;1115in，27%;1518in，2740%;1825in，40%48%;2527in，60%甲醇)，流速1.0l/in，检测波长235n。结果Sesaside在0.2361.18g、Shanzhisideethylester在0.4402.20g，7,8-dehydrpensteside在0.0940.470g，8-aetylshanzh

2、isideethylester在0.7503.75g的浓度范围内线性关系良好，回收率均在96%104%之间，RSD均小于5%。结论此方法准确可靠，重复性好，结果稳定，可作为该产品质量控制的方法。【关键词】独一味;高效液相色谱;环烯醚萜苷独一味Laiphlisrtata(Benth.)Kud为唇形科植物，以全草或根及根茎入药，是藏、蒙、纳西族等少数民族常用草药，生长于海拔3000以上的石质高山草甸、河滩地，分布于甘肃、青海、西藏、四川等藏区，具有止血、镇痛消肿、活血化瘀、续筋接骨等成效1。以独一味开发出的国家新药独一味胶囊临床用于治疗骨外伤、术后疼痛、妇科疾病等获得了满意的疗效。?中国药典?2(

3、2022年版部)仅收载木犀草素做对照，以HPL测定了独一味及胶囊中的含量3，而研究说明独一味总环烯醚萜苷类成分具有很好的止血、促凝血作用，是其中的止血活性成分4，5。为了更有效地控制独一味的质量，本实验采用高效液相色谱梯度洗脱法同时测定了四种环烯醚萜苷成分的含量，以确保产品质量。本实验建立的测定方法准确可靠，重复性好，灵敏度高。1仪器与材料独一味药材药材市场购置，由刘毅副教授鉴定为唇形科植物独一味Laiphlisrtata(Benth.)Kud.的枯燥根;对照品Sesaside(纯度99.87%)，Shanzhisideethylester(纯度99.01%)，7,8-dehydrpenste

4、side(纯度98.25%)，8-aetylshanzhisideethylester(纯度98.63%)均为本实验自制，核磁共振检测;甲醇为色谱纯(SharlauheieS.A.)，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：atersSyetry柱(3.5，3.5100)，柱温：25，流动相为甲醇-水梯度洗脱(08in，12%15%;811in，15%27%;1115in，27%;1518in，27%40%;1825in，40%48%;2527in，60%甲醇)，流速1.0l/in，检测波长235n。2.2系统适应性及专属性实验分别取对照品溶液、供试品溶液各5l进样，记录色谱图见

5、图12。在上述色谱条件下Sesaside出峰时间为3.527in，Shanzhisideethylester出峰时间为6.605in，7,8-dehydrpensteside出峰时间为14.459in，8-aetylshanzhisideethylester出峰时间为19.775in。供试品在相应位置有显著峰。以Shanzhisideethylester计，理论塔板数1500，两峰的别离度1.5。实验结果说明该方法能使独一味环烯醚萜苷较好别离，色谱系统的适应性及专属性良好。图1对照品的HPL图谱图2独一味药材的HPL图谱2.3标准曲线的制备精细称取经五氧化二磷减压枯燥24h的Sesaside、

6、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester对照品，加甲醇制成每毫升含Sesaside0.472g，Shanzhisideethylester0.880g，7,8-dehydr-pensteside0.188g，8-aetylshanzhisideethylester1.50g的混合标准溶液。精细量取上述对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0l，分别置于6个5.0l量瓶里，甲醇定容，即得对照品溶液。分别进样5l，以峰面积为纵坐标，以进样量为横纵坐标进展线性回归，得各成分回归方程见

7、表1。表14种成分的回归方程ethylesterY=-7.37104+1.41106X0.99960.7503.752.4供试品溶液的制备独一味药材研细，过60目筛，精细称取细粉0.5g，置25l具塞锥形瓶中，加70%甲醇25l，称定重量，超声20in，冷却，用甲醇补充重量，过滤，精细汲取续滤液1.0l，至5l容量瓶中，70%甲醇定容，摇匀;用0.22微孔滤膜滤过即得。转贴于论文联盟.ll.2.5仪器精细度实验取供试品溶液，连续进样6次，10l/次，记录峰面积，结果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetyl-shanz

8、hisideethylester峰面积的RSD分别为1.53%，3.25%，2.76%，1.97%，表示精细度良好。2.6稳定性实验取供试品溶液于0，2，4，6，8，10h进样分析，每次10l，记录峰面积，结果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester峰面积的RSD分别为3.61%，1.20%，2.01%，3.37%。结果说明供试品溶液中Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisidee

9、thylester在10h内稳定。2.7重复性实验取同一批独一味，按照“2.4项下方法制备6份样品液，分别测定峰面积，结果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester的RSD分别为2.75%，3.86%，3.24%，2.66%。2.8加样回收率实验精细汲取含量的独一味样品，6份，分别精细参加Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhi-sideethylester混合对照品溶液适量，按照“2.

10、4项下方法制备样品液，进样10l测定峰面积，结果Sesaside、Shanzhisideethylester、7,8-dehydrpensteside、8-aetylshanzhisideethylester的平均回收率分别为96.75%，103.21%，103.77%，99.85%，RSD分别为2.86%，3.68%，2.77%，1.55%。2.9样品含量测定取独一味样品，按上述“2.4方法制备样品溶液，分别精细汲取10l供试品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，用外标法测定样品中环烯醚萜苷的含量。3批药材的测定结果见表2。表2独一味中Sesaside,Shanzhisideethyle

11、ster，7，8-Dehydrpensteside,8-Aetylshanzhisideethylester的测定结果3结论研究说明独一味总环烯醚萜苷类成分具有很好的止血、促凝血作用，是其中的止血活性成分3，本研究采用RP-HPL法对独一味药材中的Sesaside，Shanzhisideethylester，7,8-Dehydrpensteside，8-Aetylshanzhisideethylester4个环烯醚萜苷进展定量测定，对独一味药材具有更实在际的指导意义。试验时考察了乙腈-水、乙腈-0.4%磷酸水、甲醇-水、甲醇-0.4%磷酸水4种流动相，并尝试了这4种流动相的多种线性梯度洗脱，结果说明甲醇-水系统最正确，并进展了梯度洗脱条件的优化。采用该系统各个色谱峰的峰形和别离度都较好，基线稳定。因此选用该系统为独一味药材含量测定的流动相。此方法准确可靠，重复性好，结果稳定，可作为该药材质量控制的方法。【参考文献】1张凤，孙连娜，陈万生.独一味的化学成分及药理作用J.药学理论杂志，2022，26(3)：169.2国家药典委员会.中国药典S.北京：化学出版社，2