磁分离酶联免疫测定技术在甲状腺激素测定中的应用价值

1、磁别离酶联免疫测定技术在甲状腺激素测定中的应用价值【摘要】引进加拿大BiheIunsystes公司的磁别离酶联免疫技术(AIA)做甲状腺激素测定，灵敏度可达11012g检测级。经一年的实验，本文认为AIA是一种灵敏、快速、特异性强、重复性好、显色稳定的试验。本文用来自内蒙古各地的153名安康人做正常参考值测定，与上海和网外正常参考值比拟，结果发现：内蒙地区男、女甲状腺激素程度与上海地区比拟有显着差异，P0.01，促甲状腺激素(TSH)无差异。内蒙地区与国外正常参考值比拟除总T3无差异外，P0.05，其余均有显著性差异，P0.01。用上海地区正常参考值，断定328名患者甲状腺激素结果异常，而套用

2、内蒙地区正常参考值，328名中只有161名甲状腺激素异常，167名结果正常。本文又对可能影响AIA试验的因素：高血脂、高血糖、高血红蛋白血清做了交互影响试验，结果：甘油三酯达3.23l/L时，对试验有影响，F=11.65，血清中血糖20l/L，血红蛋白达13g/L，对试验无影响。【关键词】磁别离酶联免疫甲状腺激素测定甲状腺激素的方法很多，如放射免疫，酶标免疫，但他们都有这样或那样的缺点和缺乏。如：使用同位素标记，具有放射危害，对环境污染，试剂含有致癌物质，试剂有效期短，不合适中小医院。磁别离酶联免疫技术(AIA)是80年代中期瑞士史洛诺(Sern)诊断中心创造的一项高灵敏度的酶免技术，该技术中

3、的“免疫磁性微粒是医学生物学领域别离材料方面的一项重大科技成果，是对微量生物活性物质别离纯化的关键材料。它具有灵敏、快速、特异性强、重复性好、无放射致癌物质、试剂有效期长的优点。与放射免疫法比拟，两法结果符合率达9272，呈高度相关，(r=0.974，P0.0001)，用AIA测甲状腺激素在自治区尚属首家，Biheiunsystes公司试剂盒中带有国外的正常参考值，他们又委托上海市第一人民医院做了国内的正常参考值，但在实验中，我们发现：(1)甲状腺激素程度与上述两地有很大差异，容易给临床医生造成误导。(2)血清中脂类高会影响试验结果。那么高糖、高血红蛋白血清是否也会影响试验结果呢?我们采用正交

4、设计，对三种影响因素进展交互影响试验。本文意在对AIA在甲状腺激素测定中的应用价值做一些讨论，使AIA这一高新技术在内蒙地区得到推广。1实验原理待测抗原在匀相状态中与酶抗体和荧光素抗体结合，然后参加已预先标记了抗荧光素抗体的磁性微粒。(大量的1大小的磁性微粒在匀相状态接触面积大大高于酶标，放免中使用聚乙烯板、聚乙烯管)标本中的抗原与酶标抗体，荧光素抗体，抗荧光素抗体，磁性微粒形成聚合物。在磁场的作用下，聚合物被沉淀，未结合的物质被洗去。参加底物显桃红色后，在SERZYE-I型磁别离酶联免疫内分泌定量测定仪上采用三波长同时检测(目的是消除干扰因素，拓展测量范围)，然后读取结果。2材料和方法2.1

5、仪器SERZYE-I型磁别离酶联免疫内分泌定量测定仪，三波长，软件可储存标准曲线，自动拟合最正确曲线，自动计算并打印浓度值。磁别离器(专用试管架，底部为永久性磁板)，混匀器。2.2试剂加拿大Biheiunsystes公司进口T3、T4、FT3、TF4、TSH试剂盒，有效期六个月。2.3调查对象(1)来自全区各地安康体检者，经实验室检查，肝功、血脂、血糖、血常规、尿常规正常者。共153人，其中男性77人，女性76人，年龄1870岁。清晨空腹抽血，别离血清，-18保存，分析前一次复融，充分摇匀使用。(2)将正常人血清测TG、GUL、HB，分别记为A1、B1、1程度。另用正常人血清配高TG、GUL、

6、HB，分别记为A2、B2、2程度。A2、TG：3.23l/L，B2、GUL：20l/L，2、HB：13g/L。转贴于论文联盟.ll.(3)用甲状腺激素正常参考值，结合临床病症，B超诊断，治疗后结果观察等作为最终确诊，对328名患者作准确度评价。2.4方法(1)抗原、抗体反响，标本与反响试剂参加专用试管后，37保温，形成抗原抗体复合物。(2)磁抗体别离，参加磁性抗体，使之与复合物结合。在磁场的作用下沉淀，并洗去未结合的物质。(3)以单磷酸酚酞为基质，抗体、抗原复合物中的标记酶(ALP)，催化基质分解生成酚酞，在碱性环境中显桃红色，颜色的深浅与激素的量成正比(竞争法成反比)。(4)比色定量将已显色

7、的测定管在SERZYE测定仪利用三波长比色原理，滤去不良因素，拓展比色范围，计算出测定管激素含量。3讨论磁别离酶联免疫测定技术(AIA)是80年代中期瑞士史洛诺(Sern)诊断中心创造的一项高灵敏度的酶免技术。该技术中的“免疫磁性微粒是医学生物学领域别离材料方面的一项重大科技成果。是快速、准确别离微量物质的关键材料。史洛诺(Sern)比色仪也是一个高科技产品，它采用三波长原理，550波长时吸光度最大(对反响终产物)，492波长吸光度是550波长的五分之一，因此对高浓度标本无需稀释即可进展比色，结果乘以5，仪器自动转换，630波长，可过滤因擦痕手英脏物比照色所产生的影响。AIA试剂无放射元素，无

8、致癌物，有效期长，并具有操作简单，实验时间短，抗原抗体反响迅速、平安，特异性强，重复性好，显色稳定的优点。与目前广泛应用的放射免疫法比拟，两法结果符合率达92.72，呈高度相关，r=0.974，P0.0001。这些已被国内文献所肯定。本文采用AIA法测定来自内蒙各地安康体检者153名(男77名，女76名)甲状腺激素，包括总T3、总T4、TSH、FT3、FT4。与上海地区正常参考值比拟，结果发现，上海地区男性总T3、总T4、FT3、FT4与内蒙地区男性比拟有显著性差异，P0.01；上海地区女性FT3、FT4与内蒙地区女性比拟有显著性差异，P0.01，总T3有差异，P0.05，国内与国外正常参考值

9、比拟：总T4、FT3、FT4、TSH有显著性差异，P0.01。我们认为，造成这些差异的原因可能是，人种，民族，饮食习惯，地理环境，气象条件及甲状腺疾病高发区等因素。终究何种因素占主导，有待进一步讨论。在正常血清中参加高脂血清，最终浓度为323lL(是正常人的2倍)，是许多中老年人很容易到达的程度。经统计学处理，对T3试验有影响，F=11.65，对其余指标无影响。高糖血清20l/L，血红蛋白13g/L，对试验无影响。这说明AIA试验别离抗原、抗体完全，特异性强，影响因素(无论是单一因素，还是多种因素)较小，是一种非常先进的试验。我们结合临床患者病症，B超诊断，治疗后结果观察和临床医师的最后诊断，做了准确评价。经统计学处理，灵敏度95，特异性946、误诊率5.4，漏诊率5、符合率96。这证明AIA是一项诊断甲状腺疾病灵敏度高，特异性强，重复性好的试验方法，为我区医生对疾病诊断与疗效