芳酸及其醛类药物分析演示文稿

1、芳酸及其醛类药物分析演示文稿第一页，共六十八页。优选芳酸及其醛类药物分析第二页，共六十八页。什么是芳酸？苯环羧基其他取代基分类：苯甲酸类 水杨酸类 其他芳酸及其酯类第三页，共六十八页。第一节 典型药物分类与理化性质 （一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐一、苯甲酸类酸性（弱碱性）紫外吸收第四页，共六十八页。丙磺舒酸性紫外吸收S元素第五页，共六十八页。甲芬那酸第六页，共六十八页。（二）主要理化性质 1. 溶解性: 固体，有一定熔点。 除钠盐溶于水，其余不溶。 2. UV和IR光谱特性： 3.分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸 丙磺舒分解为SO2 4. 酸性：游离的羧基 第七页，共六十八页。 二、水杨酸

2、类 （一）典型药物结构水杨酸（salycylic acid，SA）结构羧基酚OH性质酸性FeCl3反应应用含量测定鉴别第八页，共六十八页。阿司匹林（Aspirin,ASA）结构： 羧基酯键性质： 酸性水解应用： 含量测定 （酸碱中和）鉴别、检查第九页，共六十八页。对氨基水杨酸钠（sodium aminosalicylate，PAS-Na)结构： 芳伯氨基酚OH性质：重氮化偶合应用： 含量测定FeCl3反应鉴别第十页，共六十八页。双水杨酯（salsalate)第十一页，共六十八页。贝诺酯（benorilate)第十二页，共六十八页。 1.酸性：具-COOH。酸性受苯环、COOH和其 它取代基的相

3、互影响。 取代基为吸e基，如X，NO2，OH时， 酸性; 为供e基，如CH3,NH2时，酸性 取代基位置：邻位OH取代酸性强，能与邻 位COOH形成分子内氢键（二）主要理化性质水杨酸 阿司匹林 苯甲酸 HCl 芳酸 H2CO3 苯酚第十三页，共六十八页。2. 溶解性: 均为固体，有一定熔点。除钠盐溶于水，其余不溶。3. UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。4. 芳伯氨基和酚羟基特性：5. 水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。第十四页，共六十八页。三、其他芳酸类 (一)典型药物结构布洛芬（ibuprofen）第十

4、五页，共六十八页。氯贝丁酯（clofibrate）第十六页，共六十八页。 (二)主要理化性质 1.溶解性：氯贝丁酯为液体；布洛芬为固体， 有一定熔点；水中不溶，有机溶剂中易溶 2.UV和IR特征吸收光谱：苯环 3.水解：氯贝丁酯具酯键 4.酸性：布洛芬第十七页，共六十八页。 一、与铁盐反应 1. 含有酚羟基药物可与FeCl3反应；能与FeCl3反应 不一定含酚羟基. 第二节 鉴别试验Ar-OH + FeCl3紫堇色配位化合物pH46第十八页，共六十八页。SAAspirin 水解SAFeCl3紫堇色 PAS-NaFeCl3紫红色中性或弱酸性紫堇色FeCl3第十九页，共六十八页。赭色3.丙磺舒2.

5、苯甲酸（中性或碱性水溶液） FeCl3NaOH钠盐FeCl3米黄色4.氯贝丁酯碱水解盐酸羟胺羟肟酸盐羟肟酸铁弱酸条件紫色FeCl3第二十页，共六十八页。 二、重氮化-偶合反应 含有芳伯胺基或潜在芳伯胺基的药物均可反应。-萘酚橙黄猩红 1. 直接反应 对氨基水杨酸钠 2. 水解后反应 贝诺酯具有潜在芳伯氨基 第二十一页，共六十八页。三、水解反应1.AspirinNa2CO3SA -NaCH3COONaHSACH3COOHmp:1561612.双水杨酯碱水解酸化SAmp：158溶于醋酸铵试液第二十二页，共六十八页。 1. 苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物 2. 丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO

6、3, 经硝酸氧化成Na2SO4 3. 丙磺舒高温加热分解，生成SO2气体，有臭味四、分解产物反应(SO42-的反应）第二十三页，共六十八页。 1. 测定max ；min 例：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml； max 265nm, 273nm; min245nm, 271nm。 2. 在max 处测定一定浓度供试液的吸收度A 例：羟苯乙酯，5g/ml max =295nm; A=0.48 五、紫外吸收光谱法第二十四页，共六十八页。 3. 在max 处测定供试液的百分吸收系数。 例：贝诺酯在max=240nm; = 730760 4. 在规定的波长测定吸收度比值 例：二氟尼柳

7、20g/ml; A251/A315 = 4.24.6 第二十五页，共六十八页。六、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱37002900cm-1N-H、 O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H第二十六页，共六十八页。37002900cm-1N-H、 O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱第二十七页，共六十八页。第三节 特殊杂质检查一、 Aspirin中特殊杂质的检查 1.溶液的澄清度：主要检查Na2CO3中不溶物 杂质：有苯酚、醋酸苯酯、水杨酸苯

8、酯等Aspirin可溶于Na2CO3 ，而杂质不溶由一定量的Aspirin在碳酸钠试液中应溶解澄清来加以控制酸性：芳酸 碳酸 酚第二十八页，共六十八页。游离水杨酸检查： SA：具酚-OH， 可与Fe3+呈色 Aspirin：无酚-OH，不与Fe3+呈色 比色法适用：原料药、片剂、肠溶片 HPLC适用：胶囊、泡腾片、栓剂3. 易炭化物检查：检查Aspirin中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。比色法第二十九页，共六十八页。二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查方法 主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基 酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要严格控制。 双相滴定法：利

9、用间氨基酚溶于乙醚，呈碱 性，样品用乙醚提取, HCl 滴 定,V0.3ml HPLC （USP）：内标法，以磺胺作内标第三十页，共六十八页。三、氯贝丁酯中特殊杂质的检查主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质GCHPLC：以4-乙氧基酚作内标挥发性杂质的检查方法 ：GC 色谱条件同对氯酚的检查1. 对氯酚检查第三十一页，共六十八页。 一、酸碱滴定法（以Aspirin为例） 原理：药物具-COOH；可用碱直接滴定第四节 含量测定（一）直接滴定法 ChP（2005版）1 ： 1第三十二页，共六十八页。条件：在中性乙醇中 以酚酞作指示剂 所含SA超过限量时，不宜直接滴定 3. 应用：多国药典

10、用于阿司匹林、双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。第三十三页，共六十八页。（二）水解后剩余滴定法 USP（29版）1.原理：2.方法：供试品1.5g0.5mol/LNaOH50.0ml煮沸10放冷酚酞0.25mol/LH2SO4(V)空白 (V0)定、过量剩余第三十四页，共六十八页。3.讨论：空白试验的目的 SA超过限量时也不适用4.计算：T的计算 含量的计算第三十五页，共六十八页。I 份NaOH 供试品I 份NaOH 空白VVOVo-V相当于Asipirin消耗NaOH的ml数剩余第三十六页，共六十八页。（三）两步滴定法用于：阿司匹林片/肠溶片的含量测定1

11、.原理：片剂中加稳定剂：酒石酸/枸橼酸 Aspirin SA+HAc水解酸性有干扰，所以采用两步滴定法第一步中和Aspirin + NaOH钠盐 + H2O水解产物SA + NaOHSA-Na + H2O酸性稳定剂+ NaOH中性盐第二步水 解与测定第三十七页，共六十八页。2.方法第一步： 中和供试品片粉适量中性乙醇20ml酚酞NaOH（0.1mol/L)滴定至粉红色第二步：水解与测定中和后的供试液0.1mol/LNaOH40ml水浴150.05mol/L H2SO4（V）空白（V0）第三十八页，共六十八页。3.讨论 适用于阿司匹林片、肠溶片 SA超过限量时也适用4.计算第三十九页，共六十八页

12、。 第一步：中和酸性杂质（四） 氯贝丁酯含量测定第二步：水解与测定第四十页，共六十八页。二、亚硝酸钠滴定法原理：对氨基水杨酸钠具芳伯氨基,在HCl中与 NaNO2发生重氮化反应Ar-NH2 + NaNO2 + 2HClAr-N2Cl + NaCl + 2H2O此法在下章重点讨论第四十一页，共六十八页。三、双相滴定法如苯甲酸钠的含量测定：不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。易溶于有机溶剂易溶于水碱性在水相和有机相中滴定1.原理第四十二页，共六十八页。2.方法溶剂：水乙醚指示剂：甲基橙滴定液：0.5mol/L HCl 水相 乙醚相滴定前： 苯甲酸钠甲基橙黄色滴定中：苯甲酸钠甲基橙NaCl苯甲酸

13、黄色终点：甲基橙稍过量HClNaCl苯甲酸橙红色第四十三页，共六十八页。分取乙醚层，5ml 水洗涤，洗液并入水层，加乙醚20ml，继续用HCl滴定至水层显持续的橙红色原因：将溶于乙醚中的少量苯甲酸钠提取至水中第四十四页，共六十八页。 （一）直接紫外分光光度法 贝诺酯的测定：四、紫外分光光度法原料药：对照品比较法片 剂：吸收系数法第四十五页，共六十八页。（二）离子交换-紫外分光光度法 方法：可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂 质后，在甲醇溶液中，226nm波长处，采 用对照品比较法测定含量。氯贝丁酯的测定原理：氯贝丁酯为酯结构，不能电离 对-氯酚、对-氯苯氧异丁酸等可酸性解离酸性杂质对-氯酚等

14、也有吸收，干扰测定。第四十六页，共六十八页。（三）柱分配色谱-紫外分光光度法USP(29)采用此法同时测定Aspirin胶囊中 Aspirin和SASA的限量测定 色谱柱的制备硅藻土-磷酸 玻璃棉硅藻土，FeCl3-尿素第四十七页，共六十八页。供试液：CHCl3洗脱液1：CHCl3硅藻土，FeCl3-尿素 玻璃棉1:Aspirin先洗脱2:SA后洗脱硅藻土-磷酸洗脱液2：冰HAc-乙醚SA的限量测定洗脱液3： CHCl3第四十八页，共六十八页。讨论：SA与FeCl3-尿素生成紫色水杨酸铁配位化合物，保留于硅藻土色谱柱上用CHCl3洗脱时，高浓度尿素使配位化合物移动较慢，Asipirin先洗脱出

15、以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配位化合物解离，SA游离出来，继而被CHCl3洗脱 max=306nm ， A供A标第四十九页，共六十八页。 玻璃棉供试品液：CHCl3-HCl洗脱液1： CHCl3 中/碱性杂质先洗脱max=280nm，Aspirin(mg)=C(Au/As)硅藻土-NaHCO3洗脱液2：冰HAc-CHCl3 10ml洗脱液3：冰HAc-CHCl3 85ml2.Aspirin的含量测定Aspirin后洗脱第五十页，共六十八页。在硅藻土-NaHCO3色谱柱中，Aspirin及SA成钠盐保留于柱上，先用CHCl3除去中性或碱性杂质，再用醋酸酸化，使Aspirin游离，以CHCl3洗

16、脱后测定其含量。第五十一页，共六十八页。 ChP(2005)：阿司匹林肠溶胶囊、泡腾片、栓剂等含量测定采用此法 USP（29）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法五、HPLC第五十二页，共六十八页。阿司匹林肠溶胶囊的含量测定色谱条件：色谱柱C18；流动相为1冰醋酸-甲醇 (50:50);检测波长280nm系统适用性试验：n1500; Aspirin与水杨酸钠 的R 1.5计算：第五十三页，共六十八页。 一、血清中Aspirin和SA的HPLC 色谱条件：色谱柱为ODS-C18(150mm 4.6mm, 5m)流动相为甲醇-水-正丁醇-磷酸(300 :200 :

17、10：0.05)检测波长为237nm；内标物为苯甲酸 血清样品预处理 血清100l + HClO450l + 不同浓度Aspirin和SA + 内标液 涡旋混合2min 离心5min 取上清液20 l进样。第五节 体内药物分析第五十四页，共六十八页。 回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归 Aspirin的回归方程：Y =5.810-3 +5.2910-2X r= 0.9996 SA的回归方程：Y = 6.010-3 + 8.3310-2X r = 0.9981 Aspirin和SA的线性范围分别为：120g/ml; 230g/ml 回收率：空白血清 + 五种不同浓度测定， Aspirin

18、为96.0%106.0%; SA为92.0%119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）第五十五页，共六十八页。色谱条件：色谱柱为LiChrospher100RP(125mm4mm, 5m) 流动相为25%乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。 检测波长为254nm；内标物为依他尼酸。尿样品预处理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后 用0.5ml蒸馏水活化。 2.0ml尿样 + 内标300l(10g/ml) 上柱 1.0ml水洗 脱生物杂质 再用甲醇0.5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内 标。洗脱液0.45m浸滤膜滤过，取5l直接进样分析。 二、尿中丙磺舒的固相萃取净化-HP

19、LC (运动员违禁药物)第五十六页，共六十八页。线性关系和回收率：取空白尿样2.0ml +不同浓度丙磺舒+内标液，按上述方法分析(浓度范围为0.1g/ml100g/ml) A丙/A内对C丙回归。回收率：丙磺舒为100%3%(n=14)；内标为101%3%(n=12)；人尿样测定：丙磺舒(单剂量500mg)尿排泄药-时 曲线(见P154)第五十七页，共六十八页。 三、HPLC测定人血浆中布洛芬含量 色谱条件： 色谱柱为Shim-packCLC-ODS(150mm6mm, 10m) 预柱为YWG-C18；流动相为甲醇-20mol/L磷酸二氢钾缓 冲溶液(70:30, pH=4.0); 流速为1.0

20、ml/min; 检测波长为221nm；内标物为肉桂酸。 样品预处理：取肝素抗凝血浆0。24ml+内标液+甲醇0.5ml,振荡混匀，离心(1000r/min)15min,取上清液10 l直接进样分析。布洛芬和肉桂酸tR为5.15和2.85min。第五十八页，共六十八页。回归方程：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：Y = 4.05 10-2C 2.0 10-3, r = 0.9999。回收率测定：空白血浆 + 布洛芬对照品高、中、低三种浓度，按样品处理项下测定，测得平均回收率为99.2 1.6%。精密度：日内精密度为RSD1.8%；日间精密度为2.8%。第五十九页，共六十八页。试验结果：1.血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱，回收率高，分析速度快(6min完成)，分离效果好。2.口服一次后Tmax = 30min90min；体内维持4h6h。与文献报道的结果一致。3.本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。 人血浆样品测定