甲状腺微小乳头状癌的形态学和免疫组织化学研究

1、甲状腺微小乳头状癌的形态学和免疫组织化学研究【摘要】目的：观察甲状腺微小乳头状癌的临床病理并检测其免疫表型，讨论相关疾病的鉴别诊断。方法：光学显微镜下观察223例甲状腺微小乳头状癌的组织形态；对74例甲状腺微小乳头状癌、32例甲状腺增生性病变行免疫组织化学方法标记细胞角蛋白19K19、间皮细胞、细胞黏附凝集素3Galetin-3、D56，复习相关文献。结果：在223例甲状腺微小乳头状癌中以滤泡状排列为主者占38.6%86/223，核的特征不典型者占13.9%31/223。在74例甲状腺微小乳头状癌中K19、Galetin-3、D56阳性表达率分别为100.0、98.6%、98.6%、4.1%；

2、在32例增生性病变中4者阳性表达率分别为37.5、12.5%、18.8%、68.8%。结论：局部甲状腺微小乳头状癌细胞以滤泡状排列为主，核的特征不够典型，诊断较为困难。根据滤泡细胞增生活泼，细胞核具有乳头状癌的根本特点，病变与周围滤泡截然不同，且肿瘤性滤泡穿插于硬化间质或正常滤泡之间，可与增生性病变鉴别。K19、Galetin-3、弥漫性中强阳性表达，D56阴性表达对其诊断有重要价值，结合应用可以进步诊断的准确性和特异性。【关键词】甲状腺肿瘤癌，乳头状微小癌细胞角蛋白19半乳凝素-3上皮分化抗原簇56免疫组织化学【ABSTRAT】bjtive:Tinvestigatetheiunhisthei

3、alandrphlgialharateristisfthepapillarythyridirarina(PT),anddifferentialdiagnsisftherelateddisease.ethds:Therphlgialharateristisf223patientsithPTerebservedunderlightirspe.Seventy-furasesfPTand32asesfprliferativelesinfthyriderebservedunderlightirspeithstainsfheatxylinandesinandiunhistheialstaining.The

4、antibdyinludedK19,Galetin-3andD56.Results:Eighty-sixasesereflliular-patternedand31asesnulearfeaturesereuntypialin223asesfPT.ThepsitiveexpressinratesfK19、Galetin-3、D56ere100.0%,98.6%,98.6%and4.1%in74asesfPT,andere37.5,12.5%,18.8%,68.8%inprliferativelesinfthyrid,respetively.nlusin:SeasesfPTshaflliular

5、-patternedandthenulearfeatures.Itisuntypialparedithlassialpapillarythyridarina.Itanbedifferentiatedfrprliferativelesinithabsenefenvelpe,bviuslyvariusandunusuallyprliferatedflliularells,slertistra,neplastifllilesangthellagenandnralflliles.TheideandintensiveexpressinfK19,Galetin-3,andthenegativeexpres

6、sinfD56areextreelyusefulinthediagnsisfPT,fur-arkerpanelithK19,Galetin-3,andD56aniprvethespeifiityandaurayfthedifferentialdiagnsisfPT.【KEYRDS】Thyridneplasarina,papillaryirarinaytkeratin19Epitheliulusterdifferentiatin56甲状腺微小癌是指直径1以下的甲状腺癌，其中绝大多数是甲状腺乳头状癌papillarythyridarina，PT，称为甲状腺微小乳头状癌papillarythyrid

7、irarina，PT。随着安康体检工作对甲状腺疾病的重视和超声引导下甲状腺结节细针抽吸细胞学技术的日臻成熟和广泛开展，PT的检出率逐渐升高，手术切除的肿瘤越来越微小，病理诊断越来越困难。观察PT的病理组织学特点，寻找特异性标志物，建立可靠、可行的检测手段，对于甲状腺肿瘤的早期诊断具有重要临床价值。近年来关于PT的免疫组织化学iunhistheial，IH研究已有较多报道，主要是细胞角蛋白19ytkeratin19，K19、细胞黏附凝集素3Galetin-3、E-钙粘连素E-adherin、HBE-1等抗体1，关于间皮细胞esthelialell，、D56的报道较少。本研究复习相关文献，讨论PT

8、的病理组织学和免疫表型特点及其鉴别诊断。1材料与方法1.1材料搜集聊城市人民医院病理科2022年1月2022年12月行甲状腺手术患者的病理标本1491例。3名病理医师复查所有病例。其中PT441例，符合PT者223例，其中男28例，女195例，男女之比为16.96。年龄为2078岁，平均年龄45.7岁。选取32例甲状腺增生性病变包括腺瘤样增生26例、乳头状增生6例作为对照组，74例PT作为研究组，进展IH检测。1.2方法所有病例均经4%甲醛固定，组织块由全自动脱水机处理。IH预实验选取经典型PT、滤泡型PT、增生性结节各4例制备组织芯片，分别行48种抗体IH检查，包括常用抗体和科室常备抗体。针

9、对预实验结果选取K19、Galetin-3、D56作为实验抗体。采用即用型非生物素ElivisinTPlus检测试剂盒，所用单克隆抗体均购于福州迈新生物技术开发，按产品说明书步骤进展染色操作。PBS替代一抗作为阴性对照。1.3PT的组织学观察指标肿瘤大孝生长方式、组织构造、核的特征、细胞质表现等。1.4PT的诊断标准主要诊断指标：核变大、拉长，呈卵圆形；核拥挤、重叠、极向紊乱；毛玻璃样核；核不规那么，核沟明显，核内包涵体。次要诊断指标：流产型乳头abrtivepapillae；明显拉长或不规那么的滤泡；浓缩的胶质；砂粒体；滤泡腔内多核组织细胞。出现至少3个主要指标，或2个主要指标+至少4个次要

10、指标可诊断为PT。1.5IH结果断定K19、Galetin-3均为细胞质染色，、D56均为细胞膜染色。参考Beesley2的评分方法：染色强度依次为无色0分、淡黄色1分、棕黄色2分、棕褐色3分；染色范围以阳性细胞所占百分比打分，未见阳性染色为0分、阳性细胞25%为1分、25%50%为2分、50%为3分。染色强度与染色范围的和即为IH反响结果，积分为0判为阴性，12分判为“+，34分判为“+，56分判为“+，阳性表达包括“+。1.6统计学处理采用SPSS13.0统计软件包进展分析，率的比拟采用2检验，以P0.01为差异有统计学意义。真实性指标计算方法：灵敏度Se=a/a+；特异度Sp=d/b+d

11、；准确度=a+d/a+b+d。其中a为真阳性例数，b为假阳性例数，为假阴性例数，d为真阴性例数。2结果2.1形态学特征在223例PT中，结节大小为0.11.0。镜下呈放射状生长者84例，有局部包膜者139例。间质明显硬化者170例，无明显硬化者53例。以乳头状排列为主者137例；以滤泡状排列为主者86例，占38.6%，其中完全呈滤泡样排列者33例。滤泡细胞均增生活泼，穿插于瘢痕样间质或周围正常滤泡之间，并与周围滤泡比照鲜明。PT核的特征典型者192例，占86.1%图1。核的特征不够典型者31例，占13.9%。在32例对照组中，以滤泡状排列为主者29例，以乳头状排列为主者3例。滤泡细胞增生较活泼

12、，多数结节内可见萎缩的滤泡，结节与周围的滤泡比照不鲜明。少数病例核轻度不规那么，其中偶见核沟者4例，灶性区呈毛玻璃样核改变者2例。细胞质均相对较少且淡染，未见鳞状化生改变，未见砂粒体和浓缩胶质改变。2.3免疫表型K19、Galetin-3、及D56在研究组中的阳性表达率分别为100.0%、98.6%、98.6%和4.0%，而在对照组中，4者的阳性表达率分别为37.5%、12.5%、18.8%和68.8%。2组比拟差异有统计学意义2=57.00，83.43，75.12，51.88，P均0.01，表1。K19、Galetin-3、的阳性表达见图2。2.44种抗体的灵敏度、特异度和准确度比拟根据统计

13、学处理中的公式计算K19、Galetin-3、及D56的灵敏度、特异度和准确度，结果见表2。转贴于论文联盟.ll.3讨论PT是指偶尔被发现的、直径1或更小的PT3。这类肿瘤常贴近甲状腺被膜，伴有硬化，多无包膜。最小的PT1常由滤泡构成，间质硬化和包膜浸润不明显。较大的PT常有间质硬化，可出现乳头状构造，甚至全部由乳头构成，但较少见。本研究显示PT有局部包膜者占62.3%139/223，呈放射状生长者占37.7%84/223，间质硬化显著者占76.2%170/223，以滤泡状排列为主者占38.6%86/223。以滤泡状排列为主的病例比例远高于进展期PT中滤泡型所占的比例，有包膜的病例多呈乳头状排

14、列，呈放射状生长者多为滤泡状排列。核具有典型PT的特征4，但局部病例核的特征不够典型31例，占13.9%，尤其是完全呈滤泡状排列的病例，核的不规那么性较轻，核沟、包涵体不易见到，核膜增厚不明显，核仁较小，病理诊断较困难。而某些增生性病变滤泡细胞增生较活泼，核轻度不规那么，可见灶性区毛玻璃样核改变，甚至可见核沟或包涵体，间质也可以出现硬化和钙化。PT尤其是呈滤泡状排列者需要与增生性病变相鉴别。其区别是PT滤泡细胞普遍增生活泼，核普遍较大、变长、变卵圆、不规那么，核沟和包涵体易见，核膜较厚，核仁较明显，细胞质普遍较丰富，细胞形态与周围滤泡细胞截然不同，肿瘤性滤泡在胶原化间质中呈浸润性生长，常见肿瘤

15、性滤泡穿插于周围滤泡之间，并形成鲜明比照。目前普遍认为K19、Galetin-3、E-adherin、HBE-1、ret/PT等的阳性表达对诊断PT意义较大1。K19主要标记各种单层腺上皮，用于腺癌的诊断。多数文献报道K19在PT中呈细胞质弥漫强阳性表达，而在正常甲状腺组织、结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤中不表达或灶性表达5-7，K19是鉴别PT的良好标志物8。滕晓东等9认为K19阳性表达是滤泡细胞增生恶变的重要标志，不但可作为对甲状腺良、恶性的鉴别，尤其是对PT诊断的重要根据，而且还可以提示恶变倾向。在甲状腺良性病变中，假如有少量腺体呈K19中、强阳性而明显突出于背景滤泡，要仔细寻找原发灶，特别

16、是微小PT灶，以免漏诊。但Shelfhut等10认为K19在PT诊断中价值有限，其表达仅是增加了PT的可能性。本研究74例PT中K19均呈弥漫强阳性表达100.0%，增生性病变阳性表达率为37.5%，且均为灶性表达，提示K19对PT虽无特异性，但弥漫性强阳性表达对PT的诊断有重要意义。Galetin-3属凝集素letin蛋白家族成员，最近报道Galetin-3过度表达与多种恶性肿瘤，如胃肠、前列腺、乳腺、甲状腺等肿瘤亲密相关。li等11研究说明，Galetin-3在不同类型甲状腺癌组织中的表达有差异，其中在PT组织中的表达率最高，在甲状腺滤泡癌组织中有较高的阳性率，在结节性甲状腺肿和滤泡性腺瘤

17、组织中表达率较低，Galetin-3的表达与滤泡细胞的异型增生和恶变存在联络，其表达程度检测有助于判断良恶性。Sapi等12研究Galetin-3在62例甲状腺良性结节、74例PT、32例滤泡癌中的表达率分别为27.0%、91.9%、75.0%，指出Galetin-3在鉴别诊断甲状腺良性、增生性病变和PT中有一定的指导意义。本研究74例PT中73例Galetin-3中强阳性表达，增生性病变组仅4例阳性表达，其诊断PT的灵敏度、特异度和准确度分别为98.6%、87.5%和95.3%，是PT诊断与鉴别诊断较为理想的抗体。是用于间皮瘤诊断的相关抗体，用于甲状腺病理诊断的报道尚少。文献报道在PT中呈高

18、表达，是诊断PT的较好标志物13。王仪等14研究20例结节性甲状腺肿、50例甲状腺腺瘤、100例PT和8例甲状腺滤泡癌，表达率分别为25.0%、50.0%、100.0%和87.5%，在PT中敏感性更高，癌与非癌组比拟差异有统计学意义P0.01。本研究中的灵敏度为98.6%，准确度为93.4%，特异性81.2%，提示在PT诊断中特异性较差，需结合其他指标综合判断。D56是神经细胞黏附分子，主要用于视网膜母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤等肿瘤和NK细胞的研究15。其在甲状腺肿瘤诊断中的应用罕见报道。Deellay等16研究75例甲状腺癌72例PT、2例滤泡癌、1例嗜酸细胞癌、35例腺

19、瘤32例滤泡型、3例嗜酸细胞型和65例非肿瘤性病变25例结节性甲状腺肿、5例Grave并19例淋巴细胞性甲状腺炎、6例桥本甲状腺炎、10例非甲状腺疾病切除的正常甲状腺组织，以滤泡上皮D56阳性10%者为阳性表达，结果显示除PT包括乳头状型、滤泡型外，其他各组病变均阳性，其诊断PT的敏感性和特异性均为100.0%，指出D56是诊断PT非常有意义的抗体，特别是在鉴别滤泡型PT和其他滤泡性肿瘤中具有重要意义。本研究显示，D56在PT中3例阳性表达，在增生性病变中22例表达，2组比拟差异有统计学意义P0.01，D56诊断PT的敏感性为68.8%，特异性为95.9%，准确性为87.7%，提示D56在PT

20、的鉴别诊断中具有一定的意义。综上所述，局部PT以滤泡状排列为主，核的特征不够典型，需要与增生性病变相鉴别。根据病变滤泡细胞普遍增生活泼，细胞核具有PT的根本特点，肿瘤性滤泡穿插于硬化间质或周围滤泡之间，并与周围滤泡形成鲜明比照，多数病例可确诊。K19、Galetin-3和弥漫性中强阳性表达和D56不表达，对于PT诊断有重要价值，结合应用4种抗体可以增加PT诊断的特异性和准确性。【参考文献】1陈士超，何春年.用于甲状腺肿瘤鉴别诊断的相关分子标记物J.临床与实验病理学杂志，2022，233：350-353.2BeesleyF,lrenK.ytkeratin19andgaletin-3iunhist

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