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文档简介

1、 1目的: 确认工作菌液在2-8条件下的贮存时间。 2范围:适用于金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌、 白色念珠菌和黑曲霉的工作菌液贮存。 3环境条件要求所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的单向流空气区域 隔离系统内进行,其全过程严格遵守无菌操作,能防止微生物再污染。 4验证方法的依据中国药典2010年版二部。 5验证前准备: 5.1验证用菌种 金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26003 铜绿假单胞菌CMCC(B) 10104 大肠埃希菌CMCC(B) 44102 枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63501 生孢梭菌CMCC(B) 64941 白色念

2、珠菌CMCC(F) 98001 黑曲霉CMCC(F) 98003 5.2培养基的制备: 营养肉汤培养基批号: 硫乙醇酸盐流体培养基批号: 营养琼脂培养基批号: 改良马丁琼脂培养基批号: 改良马丁培养基批号: 玫瑰红钠琼脂培养基批号: 以上培养基按照说明书配制后灌装于洁净的容器中,加塞,按经过验证合格的灭菌程序进行 灭菌,培养基的适用性检查应符合规定。 5.3稀释液的制备: 0.9无菌氯化钠溶液:取氯化钠9.0g,加水溶解至1000ml,121灭菌20min。 0.05聚山梨酯80无菌氯化钠溶液:取土温l,加0.9无菌氯化钠溶液至1000ml 121灭菌20min。 5.4菌原液制备: (1种

3、至营养肉汤培养基中,经30-35培养18-24小时。 1 工作菌液贮存时间验证方案 (2将生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基中经30-35培养18-24 (3)将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中,经23-28培养24-48小时。 实验人/日期: (4)接种黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上,2328培5天, 加入35ml含0.05(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后, 采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,备用。实验人/日期: 6.验证内容: 6.1菌种的确认 代数编号接种日期代数编号接种日期 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌

4、 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 6.2仪器设备: 实验中所用的玻璃仪器及金属器皿在使用前均经过170180干热灭菌至少60分钟。 隔水式恒温培养箱:GRP9050 型北京桑翌科技发展有限公司 生化培养箱:SHP-250型上海森信实验仪器有限公司 立式压力蒸汽灭菌器:LDZM75 上海申安医疗器械厂 天平:DT系列电子天平中国江苏常熟长青仪器仪表厂 电热鼓风干燥箱:101-3AB型天津泰斯特仪器有限公司 家用冰箱 6.3 验证过程 6.3.1新制备原菌液计数 (1珠 菌的菌原液,用稀释液0.9无菌氯化钠溶液,以十倍递增稀释法制备菌液,平皿法计数: 2 铜绿假单胞菌 大肠

5、埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 稀释度稀释日期计数(cfu/ml)计数日期 稀释度稀释日期计数(cfu/ml稀释度稀释日期计数(cfu/ml)计数日期 (2)取黑曲霉孢子悬液,用稀释液0.05聚山梨酯80 制备菌液,平皿法计数: 菌液名称 黑曲霉 6.3.2保存条件的确认: 将上述原菌液及各稀释级别菌液包扎好后,置冰箱(2-8 一次,计数方法严格同上,使操作带来的误差减少到最少。 6.3.3结果 金黄色葡萄球菌: 稀释度稀释日期计数(稀释度稀释日期计数(cfu/ml) 1 2 3 4 5 6 7 备注: 贮存天数 1 稀释度稀释日期计数(cfu/ml) 3 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 备注: 贮存天数 1 2 3 4 5 6 7 备注: 稀释度稀释日期计数(cfu/ml) 稀释度稀释日期计数(cfu/ml) 4 生孢梭菌: 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 黑曲霉菌: 3 6 9 12 15 备注

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