立芷雪止血作用量效关系探讨实验研究

1、立芷雪止血作用量效关系讨论实验研究【摘要】目的讨论立芷雪发挥止血作用的量效关系。方法以NIH小鼠和新西兰兔作为实验动物，研究不同剂量的立芷雪对出血时间的影响，同时讨论立芷雪对新西兰兔FDP和FIB的影响。结果当剂量在0.023、0.07、0.21、0.63ku/kg时立芷雪对新西兰兔产生明显的止血作用，但0.63ku/kg组作用弱于0.21ku/kg组，但剂量到达1.90ku/kg、5.71ku/kg具有明显的抗凝成效；立芷雪在等效剂量时对小鼠出血时间的影响的实验也支持这一实验结果。同时立芷雪0.023、0.07、0.21、0.63ku/kg剂量组对新西兰兔FIB、FDP未见明显影响，但1.9

2、0ku/kg、5.71ku/kg剂量组具有明显减少FIB的成效以及明显增加FDP的作用。结论立芷雪对NIH小鼠产生最正确止血作用的剂量可能在0.581.74ku/kg之间;立芷雪对新西兰兔产生最正确止血作用的剂量可能在0.210.63ku/kg之间，剂量到达1.90ku/kg、5.71ku/kg具有明显的抗凝作用。【关键词】立芷雪；出血时间；纤维蛋白降解产物；血浆纤维蛋白原Thedse-respnserelatinshipfReptilasenhestatiehanisinrabbitsandie【Abstrat】bjetiveTevaluatedse-respnserelatinshipfR

3、eptilasenhestatiehanisinrabbitsandie.ethdsTheeffetsfdifferentdsesfReptilasenBT,FDPandFIBereexainedinanials.ResultsBTassignifiantlydelinedatthedsef0.023,0.07,0.21,0.63ku/kgfrReptilase,respetively,hiletheatinf0.21ku/kgassignifiantlystrngerthanthatf0.63ku/kg;henthedsereahedt1.90r5.71ku/kg,thefuntinfant

4、iagulatinuldbeexertedsignifiantly;theeffetfequivalentdsenBTinNIHiealssupprtedthatinNeZealandrabbit.TheeffetfReptilasenFIBandFDPatthedsef0.023,0.07,0.21and0.63ku/kgasntbservedinrabbits,thedsef1.90and5.71ku/kguldreduetheatinfFIBandinreasethatfFDP,respetively.nlusinTheptialdsefhestasiaatinfReptilaseayb

5、ebeteen0.58and1.74ku/kginNIHieandbeteen0.21and0.63ku/kginrabbits,andhenthedsereahedt1.90r5.71ku/kg,itpssessbviuslyinreasingantiagulatinfuntininrabbits.【Keyrds】reptilase;BT;FDP;FIB立芷雪Reptilase是从巴西锋芒蝮蛇Bthrpsatrx蛇毒中别离精制而成的酶性止血剂，主要含有两种成分：巴曲酶Batrxbin及微量的凝血因子脂依赖性激活剂因子激活物13。我国自1989年从瑞士引进巴塞尔.素高大药厂SlBasleLtd

6、消费的立芷雪以来，由于它具有速效、高效、长效、平安、方便且不受血浆凝血酶抑制剂影响的诸多优点，因此广泛应用于出血性疾病1，4，5。有文献报道1，4：立芷雪在大剂量时可作为抗凝药物使用，并且立芷雪药品说明书上也提及“应防止药物药物过量，否那么疗效会下降，但在动物实验研究方面未见相关报道。为了进一步的理解立芷雪药效作用特点，为临床合理用药提供根底研究的根据，笔者对立芷雪的止血作用进展了量效关系研究，以期为该药的临床应用提供根底研究的根据。1材料1.1动物新西兰兔：体重1.52kg，雌雄各半，86只，由广东省医学实验动物中心提供，答应证号：SXK粤2022-0002，粤监证字2022A001。NIH

7、小鼠：SPF级，雌雄各半，1820g，220只，由广东省医学实验动物中心提供，答应证号：SXK粤2022-0002，粤监证字2022A017。1.2受试药立芷雪：规格：1.0ku/安瓿，1.0ku5瓶/盒，深圳健安医药提供，批号：574405，进口注册证号：H20220102，巴塞尔.素高大药厂。1.3试剂酚磺乙胺注射液止血敏：山西晋新双鹤药业有限责任公司，批号：202211111，规格：0.25g/2l支。肝素钠注射液：江苏万邦生化医药股份，批号：0405113，规格：12500u/2l支。FDP血浆纤维蛋白降解产物试剂盒：法国思达高诊断公司，批号：052361。FIB血浆纤维蛋白原试剂盒：

8、法国思达高诊断公司，批号：050322。1.4仪器血凝仪：TRT1BEThrtier凝血时间测定仪德国BehnkElektrnik。高速离心机：SIGA3-18K。2方法2.1立芷雪对新西兰兔出血时间、FIB、FDP的影响新西兰兔86只，雌雄各半，检疫1周后选出72只，然后随机平衡分为9组：即空白对照组，止血敏对照组0.047g/kg，肝素对照组470u/kg，立芷雪16号组，其剂量分别为：0.023ku/kg、0.07ku/kg、0.21ku/kg、0.63ku/kg、1.90ku/kg、5.71ku/kg，按等效剂量折算，分别相当于临床用量1ku/(人次的0.5、1.5、4.5、13.5、

9、40.5、121.5倍，药物均用生理盐水配制，各给药组按设定剂量耳缘静脉iv缓推给药1次，给药容积5l/kg，空白对照组给生理盐水，给药后10in、30in、2h、24h、36h测定出血时间。测定方法：将兔耳尖部的缘静脉区剪毛消毒后，用消毒的手术刀片划破耳缘静脉区，至创面出血后计时，每隔半分钟用滤纸条轻轻蘸吸直至血液不再渗出，即滤纸条上不再沾有血迹为止，记录所需时间，即为出血时间，末次测完出血时间后，将动物处死并解剖进展大体病理检查。于给药后50in耳中动脉采血测FIB血浆纤维蛋白原和FDP(纤维蛋白降解产物)。所获数据用SPSS11.5进展统计分析。2.2立芷雪对NIH小鼠出血时间的影响NI

10、H小鼠216只，雌雄各半，随机平衡分为9组：即空白对照组，止血敏对照组0.13g/kg，肝素对照组1290u/kg，立芷雪16号组【其剂量分别为：0.06ku/kg、0.19ku/kg、0.58ku/kg、1.74ku/kg、5.22ku/kg、7.83ku/kg，按等效剂量折算，分别相当于临床用量1ku/(人次的0.5、1.5、4.5、13.5、40.5、60.75倍,说明：由于预试实验结果说明在大于10ku/kg时，小鼠会出现明显急性毒性反响，因此6号剂量组设定为5号剂量组的1.5倍】，每组24只，其中每组一半动物用于测定30in及24h的出血时间，另一半动物用于测定2及36h的出血时间。

11、药物均用生理盐水配制，各给药组按设定剂量尾静脉iv给药1次，给药容积10l/kg，空白对照组给生理盐水，给药后30in、2h、24h、36h测定出血时间。测定方法：剪尾法：第一次剪0.8，第二次剪0.2，剪尾后至创面出血后计时，每隔0.5in用滤纸条轻轻蘸吸直至血液不再渗出，即滤纸条上不再沾有血迹为止，记录所需时间，即为出血时间；说明：本试验出血时间超过25in那么以25in计，同时给动物进展止血处理。3结果3.1立芷雪对新西兰兔出血时间、FIB、FDP的影响3.1.1立芷雪对新西兰兔出血时间的影响实验结果表1说明：给药后10in：立芷雪1号组与空白对照组相比出血时间有减少的趋势，但差异无显著

12、性P0.05；2号组、3号组、4号组与空白对照组相比出血时间明显减少P0.01，其中，3号组出血时间稍短于2号组和4号组；立芷雪5号组、6号组与空白对照组相比出血时间明显延长P0.01，并有一定的量效关系。给药后30in：立芷雪1号组、2号组、3号组、4号组与空白对照组相比出血时间明显减少P0.05或0.01，其中，3号组出血时间短于2号组和4号组；立芷雪5号组、6号组与空白对照组相比出血时间明显延长P0.01，并有一定的量效关系。给药后2h：立芷雪1号组、4号组与空白对照组相比出血时间有减少的趋势，但差异无显著性P0.05，立芷雪2号组、3号组与空白对照组相比出血时间明显减少P0.05或0.

13、01；立芷雪5号组、6号组与空白对照组相比出血时间明显延长P0.05或0.01，但延长的程度较30in时轻。给药后24h：立芷雪1号组、2号组、3号组、4号组与空白对照组相比出血时间差异无显著性P0.05；但立芷雪5号组、6号组与空白对照组相比出血时间明显减少P0.05。给药后36h：立芷雪各剂量组与空白对照组相比出血时间差异无显著性P0.05。表1立芷雪对新西兰兔出血时间的影响注：与空白对照组相比出血时间缩短，*P0.05,*P0.01；与空白对照组相比出血时间延长，#P0.05,#P0.01，*P0.05,*P0.013.1.2立芷雪对新西兰兔FIB的影响FIB的影响实验结果表2说明：新西

14、兰兔耳缘静脉给药后50in，立芷雪5、6号组与空白对照组相比FIB浓度明显降低P0.01，但立芷雪其余各剂量组与空白对照组相比FIB浓度差异无显著性P0.05。表2立芷雪对新西兰兔FIB的影响注：与空白对照组相比FIB含量降低，*P0.05，*P0.01；*P0.05,*P0.013.1.3立芷雪对新西兰兔血浆FDP半定量法的影响实验结果表3说明，新西兰兔耳缘静脉给药后50in，与空白对照组相比，立芷雪各剂量组FDP的含量随剂量增加而增加，具有较好的剂量关系，与血浆FIB检测结果提示的临床意义根本一致。表3各组血浆FDP测定结果3.1.4立芷雪对新西兰兔血液流变学的影响各组动物实验完毕后处死剖

15、检，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、消化及呼吸系统等肉眼均未见异常。3.2立芷雪对NIH小鼠出血时间的影响实验结果表4说明：给药后30in：立芷雪1号组与空白对照组相比出血时间有减少的趋势，但差异无显著性P0.05；2号组、3号组、4号组与空白对照组相比出血时间明显减少P0.01，其中，3号组出血时间稍短于2号组和4号组；立芷雪5号组、6号组与空白对照组相比出血时间明显延长P0.05或0.01。给药后2h：立芷雪1号组与空白对照组相比出血时间有减少的趋势，差异无显著性P0.05；立芷雪2号组、3号组、4号组与空白对照组相比出血时间明显减少P0.05或0.01，但立芷雪2号组、3号组减少的程度较

16、30in时轻，并且4号组出血时间短于3号组和2号组；立芷雪5号组、6号组与空白对照组相比出血时间明显延长P0.05或0.01，但延长的程度较30in时轻。给药后24h：立芷雪1号组、2号组、3号组、4号组与空白对照组相比出血时间差异无显著性P0.05；但立芷雪5号组、6号组与空白对照组相比出血时间明显减少P0.05或0.01。给药后36h：立芷雪各剂量组与空白对照组相比出血时间差异无显著性P0.05。表4立芷雪对小鼠出血时间的影响注：与空白对照组相比出血时间减少，*P0.05,*P0.01；与空白对照组相比出血时间延长，#P0.05,#P0.01，*P0.05,*P0.014讨论立芷雪具有强烈

17、的止血作用，但这种作用只在血管破损处发生，立芷雪在正常血管内无凝血作用，相反会降解纤维蛋白原，因此在大剂量时50100ku/次，及止血剂量的50100倍作为抗凝血药物使用1,2,4。因此，笔者讨论了不同剂量的止血作用，希望能为临床合理评价该药及应用该药提供根底研究的根据。根据上述实验结果可以认为：当剂量在0.023、0.07、0.21、0.63ku/kg时立芷雪对新西兰兔产生明显的止血作用，但0.63ku/kg组作用弱于0.21ku/kg组，但剂量到达1.90ku/kg、5.71ku/kg具有明显的抗凝成效；立芷雪在等效剂量时对小鼠出血时间的影响的实验也支持这一实验结果。同时立芷雪0.023、

18、0.07、0.21、0.63ku/kg剂量组对新西兰兔FIB、FDP未见明显影响，但1.90ku/kg、5.71ku/kg剂量组具有明显减少FIB的成效以及明显增加FDP的作用。从而可以推测立芷雪在过大剂量使用时可以使实验兔的纤溶亢进，从而发挥抗凝作用。这与文献报道4“立芷雪降解纤维蛋白原而生成纤维蛋白，进而形成FIp(纤维蛋白多聚体)，FIp在正常血管内生成FDP有关，由于立芷雪剂量过大，生成FDP的量大于被体内吞噬系统吞噬、代谢的量，从而发挥抗凝血作用这与文献报道4“立芷雪降解纤维蛋白原而生成纤维蛋白，进而形成FIp(纤维蛋白多聚体)，FIp在正常血管内生成FDP有关，由于立芷雪剂量过大，生成FDP的量大于被体内吞噬系统吞噬、代谢的量，从而发挥抗凝血作用相一致。进一步分析可以认为立芷雪对新西兰兔产生最正确止血作用的剂量可能在0.210.63ku/kg之间按等效剂量折算为成人临床用量为4.513.5ku/(人次；剂量到达1.90ku/kg、5.71ku/kg具有明显增加纤溶的作用从而表现出明显的抗凝成效。立芷雪对NIH小鼠产生最正确止血作用的剂量可能在0.581.74ku/kg之间按等效剂量折算为成人临床用量为4.513.5ku/(人次；剂量到达5.22ku/kg