自身抗体检测及应用

1、自身抗体的检测及意义自身免疫(autoimmunity) 免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应 出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象自身抗体(autoantibody) 针对自身组织、器官、细胞及其成分的抗体。自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID) 自身免疫反应 导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。免疫系统紊乱 几个概念 自身抗体自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关性参与免疫病理性改变损伤常用的检测方法间接免疫荧光法（IIF）ELISA免疫印迹法（Western-blot）酶免疫斑点法常检测的自身抗体类风湿因子（RF）抗核抗体（ANA）抗

2、可提取性核抗原抗体（ENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗环瓜氨酸抗体（CCP）抗心磷脂抗体（ACA） 类风湿因子 （RHEUMATOID FACTOR, RF） 抗变性IgG Fc的自身抗体，主要类型是IgM型 检测方法： 1. 胶乳颗粒凝集实验 定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF 2. 速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE） 定量、准确、快速，测定IgM-RF 3. ELISA 定量、准确，可测定不同类型的RF 临床应用： （1）RF在多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。疾病阳性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度与R

3、A患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。抗核抗体（ANTINUCLEAR ANTIBODY，ANA）真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原检测的自身抗体的总称。ANA概念指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。广义：抗核酸（Nucleic acid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗体的总称某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富ANA中性粒细胞DNP(DNA-Histone)+抗DNP+补体均质体LE细胞LE细胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等结缔组织病，药物过敏，慢活肝等亦可阳性

4、。抗DNP取代LE细胞的检测+间接免疫荧光法+抗原HEp-2细胞肝组织切片待检抗体（血清）抗原抗体第二抗体间接免疫荧光法HEp-2细胞肝组织切片荧光标记抗体病人血清（待检抗体）分类和命名以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗体等；以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B 抗体等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；以抗原的化学性质进行分类命名，如抗DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体等。抗核抗体检测方法间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence, IIF）酶免疫斑点法 ELISA 免疫印迹法 （West

5、ern-blot） ANA谱条法ENA斑点法 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌蛋白型 中心体型 斑点型 线粒体型 波形纤维蛋白型 纺缍体型 核仁型 高尔基体型 细胞角蛋白型 纺缍丝型 着丝点型 溶酶体型 原肌球蛋白型 中间体型 周边型 颗粒型 纽带蛋白型 PCNA型 核点型(dots) 结蛋白(桥粒)型 IIF检测ANA荧光染色模型斑点型（nRNP/Sm） 高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。斑点型（SSA/SSB） 抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮 （100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。均质型 抗

6、dsDNA抗体 抗组蛋白抗体(histone)抗ssDNA抗体 抗核小体抗体(nucleosome)抗dsDNA抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。周边型 可见于胶原病、PBC、CAH等患者 核点型（DOTS） 见于SLE、SS、PBC、风湿病。 抗着丝点型 PSS局限型标志抗体。抗PM-Scl（PM-1）抗体 见于重叠综合征（多发性肌炎PM /皮肌炎 DM / 弥漫性PSS ） 抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体抗线粒体抗体（AMA）SLE标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体抗Jo-1抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（PM）标志抗体偶见于SLE和SS抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎 抗

7、ENA抗体谱ENA (extractable nuclear antigen)： 可提取核抗原的总称临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括： 抗Sm 抗U1-RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo-1 抗Scl-70 抗rib-P蛋白 检测方法 双向免疫扩散（ID） 对流免疫电泳（CIE） 免疫印迹法（Western-blot） ELISA 酶免疫斑点法 免疫印迹法 SDS电泳转移电泳酶免疫检测 是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。 抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cyto

8、plasmic autoantibodies, ANCA） 荧光染色型 靶抗原 胞浆型(cANCA) 蛋白酶3（PR3） 杀菌/通透性增高蛋白（BPI） 核周型(pANCA) 髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶（HLE） 非典型型(aANCA)兼有两种特性 ANCA荧光染色型与靶抗原周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)主要见于Wegeners肉芽肿及微小多动脉炎 ANCA临床应用 髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新 月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽

9、肿性血管炎相关、杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病 并与长 期慢性绿脓杆菌感染有一定关系 蛋白酶3（PR3）与Wegeners肉芽肿（WG）密切相关。 仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3 可超过95%， 活动期几乎100%阳性。 组织蛋白酶G (Cath-G) 白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白(LF)可见于SLE、IBD、PBC、PSC等 AKA主要见于RA，阳性率36%59%，特异性95%99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。抗角蛋白抗体（AKA） 一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括抗心磷脂抗体、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰

10、丝氨酸抗体。类型：IgG、A、M型，IgG型最常见，其次是IgM型，IgA型与自身免疫性疾病的关系较小。抗磷脂抗体（anti-phospholipid antibody, APLA）检测方法： 常用ELISA临床应用：在SLE中总阳性检出率达70%80%，与病情活动显著相关；ACA阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。 在RA患者阳性率为33%49%。 ACA阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。 与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性 部分自身免疫性疾病中 自身抗体的检出率自身免疫性疾病ANA阳性率（%）SLE80100MCTD95100RA2040PSS8595

11、PM/DM3050SS7080溃疡性结肠炎26慢性活动性肝炎3040其它风湿病2050ANA在自身免疫性疾病中的检出率 疾病类型 抗原类型阳性率%SLE dsDNA 3090 U1-nRNP1540 Sm530 SSA2060 SSB1020 PCNA3 核糖体（rib）520 心磷脂2040 新生儿LE SSA 100药物诱导LE 组蛋白 95 单链DNA80系统性红斑狼疮 (SLE) 抗原类型阳性率（%) U1-nRNP 95100 单链DNA 2050混合性结缔组织病（MCTD） 抗原类型 阳性率（%） IgM-RF 6590抗角蛋白抗体（AKA） 3659 单链DNA 8 组蛋白 少见

12、类风湿性关节炎（RA）抗原类型阳性率（%） SSA 4095 SSB 4095 ssDNA 3060 唾液腺流出道 4060 RF 6080原发性干燥综合征（SS）PSS类型相对应的抗原 阳性率（%）弥漫型 原纤维蛋白 510PM-Scl（PM-1）3Scl-702575RNA多聚酶4局限型 着丝点 8095进行性系统性硬化症（PSS） 抗原类型阳性率（%） PM-Scl（PM-1） 8 Jo-1 2535 Mi-1 10 Mi-2 5 Ku（重叠综合征） 3055 单链DNA 4050 PL-7 4 PL-12 3多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)自身免疫性慢性活动性肝炎(AIH)抗原类型阳性

13、率（%） 肌动蛋白（Actin）4090 ANA(板层素，SSA等) 3040 肝肾微粒体（LKM-1） 7可溶性肝抗原（SLA） 100 线粒体2型（AMA-M2） 510 线粒体9型（AMA-M9） 10原发性胆汁性肝硬化(PBC)抗原类型阳性率（%）线粒体2型（M2） 95线粒体4型（M4） 55线粒体8型（M8） 55线粒体9型（M9） 3585核点 30板层素 2 怀疑SLE，怎么办？问题常规检测程序ANA筛选 ENA抗体谱抗胞浆型抗体鉴定其它自身抗体免疫球蛋白、补体等检测+（） 95%99%可排除SLE SLE治疗缓解 病情特重（大量IC沉积消耗抗体）（）低滴度 常见于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可