酶联免疫斑点技术在小儿结核性脑膜炎诊断

1、酶联免疫斑点技术在小儿结核性脑膜炎诊断讨酶联免疫斑点技术(ELISPT)在小儿结核性脑膜炎诊断中的应用价值。方法：搜集014岁疑似结核性脑膜炎患儿共17例进展ELISPT检测，对最终确诊病例进展分析，并与头颅T/RI检查、结核菌纯蛋白衍生物试验PPD试验、脑脊液检查、结核抗体检查、胸片结果相比照。结果：在最终确诊的13例结核性脑膜炎中，头颅T/RI、PPD、脑脊液、结核抗体、胸片在入院5d内的检查阳性率分别为30.8、30.8、23.1、12.5、30.8,而ELISPT阳性率为76.9，显著高于其它辅助检查方法P0.05)。结论：ELISPT检查灵敏、快速，对于小儿结核性脑膜炎有早期诊断价值

2、。酶联免疫斑点技术(enzye-linkediunsptassay,ELISPT)是一种从单细胞程度检测分泌抗体或细胞因子细胞的免疫学新技术1,2。近年来基于两种结核菌特异性抗原早期分泌抗原靶6(earlyseretryantigentarget-6,ESAT-6)、培养滤液蛋白10(ulturefiltrateprtEin-10,FP-10)的ELISPT技术以其敏感、特异、简便的优点被用于结核病的诊断，获得了较好的成效25，在欧美已被批准用于临床，但在国内尚处于试用阶段。我科将该项技术试用于小儿结核性脑膜炎结脑的辅助诊断，与其它常规辅助检查做比照，讨论ELISPT在小儿结脑中的诊断价值。1

3、资料与方法1.1临床资料搜集我科2022年9月2022年9月收治的014岁疑似结脑患儿共17例，诊断标准参照文献6，有其他明确中枢神经系统疾病者除外，并排除已经抗结核治疗超过1个月者。入选患儿男性8例，女性9例，年龄2个月14岁，平均6岁9个月，其中05岁7例，514岁10例，汉族6例，维吾尔族10例，蒙古族1例。1.2方法17例在入院5d内进展胸片、结核菌纯蛋白衍生物试验PPD、脑脊液、头颅T/RI检查，采集卡介苗接种史、卡介苗接种后疤痕、既往结核病史及结核病接触史资料，局部患儿进展了结核抗体检测。同期采集静脉血28l,别离出外周血单个核细胞，利用ELISPT试剂盒xfrdIunteLtd.

4、进展检测,每人份4孔，分别为测试孔A、测试孔B和阳性对照、阴性对照，所有试验操作步骤严格根据试剂盒内所附使用指导进展，最后用hapSptT型ELISPT酶联斑点图像分析仪北京赛智创业科技进展计数分析。根据临床需要在1540d进展头颅T/RI复查。1.3判断标准当阴性对照孔有05个斑点时，测试孔A或B斑点数阴性对照孔斑点数6；或当阴性对照孔斑点数6时，测试孔A或B斑点数2倍阴性对照孔斑点数时结果断定为阳性；假设阳性对照孔反响良好，但测试孔斑点数未达上述标准，那么为阴性。1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件进展数据分析,ELSPT与其他诊断方法阳性率比拟采用检验,检验水准0.05。2结果2

5、.2ELSPT试验结果在确诊结脑的13例中，经ELSPT检测阳性10例76.9，阴性3例23.1。非结脑病例中ELSPT检测无1例阳性。典型ELSPT结果见图1。注：每孔左上角数字为ELISPT酶联斑点图像分析仪自动计数结果图1典型ELSPT结果略表1ELSPT与其它各种方法检查阳性率的比拟略注：(1PPD试验结果以72h硬结直径5为阳性；(2以同时进展了ELISPT和结核抗体检测的人数进展配对检验3讨论结脑是最严重的肺外结核病，约占儿童结核病死亡的75%，延误诊断是死亡的主要原因7，早期诊断、合理治疗可以明显改善其预后。目前对小儿结脑诊断主要依靠病史、结核病接触史、PPD、颅脑影像学检查、脑

6、脊液检查等综合判断。由于疾病开展阶段及自身免疫力的不同,小儿结脑临床表现复杂多样,特异性差，早期诊断困难，容易延误诊断甚至误诊。ELISPT能高效地检测抗体/细胞因子分泌细胞，具有高度的敏感性8；而两种抗原ESAT-6、FP-10只存在于结核分枝杆菌和少数非结核分枝杆菌,在卡介苗及大多数非结核分枝杆菌中不存在,故ELISPT检测不会因既往卡介苗接种而出现假阳性反响9。Liebeshuetz等5在南非的一项前瞻、双盲队列研究结果说明ELISPT诊断儿童结核病的敏感性为83，显著高于结核菌素皮肤试验63，并且受小于3岁、合并人类免疫缺陷病毒HIV感染或营养不良等因素影响较校Nil等10研究也说明，

7、在确诊的儿童结核病例中，ELISPT具有较高的敏感性83。孟成艳等11报道了1例ELISPT在成人不典型结核性脑膜炎诊断中的应用，获得了良好的指导效果。临床上小儿结脑常没有明显的分期界限。局部病例起病急,前驱病症不明显6，12,首发即表现为频繁抽搐、意识障碍，临床表现急、重，早期诊断困难，误诊率高，而ELISPT可以灵敏地检测出结核感染2,3,14，能在发病早期为临床提供可靠的病因诊断根据，防止延误治疗时机。本组13例确诊病例中，有6例院外误诊，误诊率高达46.2，而入院后其中4例66.7ELISPT阳性，为临床诊断确实立提供了有益的指导，提示ELISPT检测在疾病早期有重要的鉴别诊断价值。本

8、研究中ELISPT诊断小儿结脑的阳性率为76.9，较文献报道的敏感性835,10稍低，但这些文献均以儿童活动性结核病为研究对象，而非单独的结脑病例，这种差异一方面可能由于同一方法对不同部位疾病的诊断敏感性有所不同，另一方面本组病例数较少也可能导致这种差异，有待于今后大规模、前瞻性的研究可以更有力的证明ELISPT对小儿结脑的诊断价值。ELISPT诊断小儿结脑较其它传统辅助检查方法更灵敏，结果更客观，而且操作简便、快速(24h可出结果)，可作为小儿结脑有价值的辅助诊断根据，适用于小儿结脑的早期、快速诊断，尤其对于那些临床表现不典型、常规辅助方法不能明确诊断的疑似结脑病例具有较高的诊断价值，与其它

9、传统诊断方法相结合，可望进步早期诊断的准确性。【参考文献】1zerkinsky，NilssnLA，NygrenH，etal.Aslid-phaseenzye-linkediunspt(ELISPT)assayfrenueratinfspeifiantibdy-seretingellsJ.JIunlethds.1983,65(1-2):109-121.2LalvaniA,PathanAA,ShaneH,etal.RapiddetetinfybateriutuberulsisinfetinbyenueratinfantigenspeifiTellsJ.AJRespirritareed，200l，1

10、63(4)：824-828.3hapanAL,unkanta,ilkinsnKA,etal.RapiddetetinfativeandlatenttuberulsisinfetininHIV-psitiveindividualsbyenueratinfybateriutuberulsis-speifiTellsJ.AIDS,2002,16(17):2285-2293.4EierT,EulenbruhHP,rightn-SithP,etal.Sensitivityfaneerialenzye-linkediunsptassay(TSPT-TB)frdiagnsisftuberulsisinlinialpratieJ.EurJlinirbilInfetDis,2022,24(8):529-536.5LiebeshuetzS,BaberS,EerK,etal.DiagnsisftuberulsisinSuthAfrianhildrenithaT-ell-basedassay:aprspetivehrtstudyJ.Lanet,2022,364(9452):2196-2203.6胡亚美，江载芳.诸福棠实用儿科学.上册.第7版.北京:人民卫生出版社，2002