微生物限度检查知识培训

1、.微生物限度检查知识培训1、微生物方法考证，要求菌株回收率70%，能否有上限要求？（如不得高于100%或许110%）。答：没有上限。但一般不会高于100%，因为加进去的菌量是相同的，假如超出100%可当作是操作上的偏差。按微生物的特征，假如不超出太多，是能够接受的，但没有详细上限。（本所控制在110%之内）。2、在微生物方法考证时，霉菌、酵母菌计数考证只用黑曲霉及白色念珠菌做方法学考证，在操作培育过程中发现：在玫瑰红钠琼脂培育生长的白色念珠菌的形态太小与营养琼脂上培育的细菌的某些形态大小相同，这样怎样判断营养琼脂上生长的菌落是不是白色念珠菌？为什么这两种菌落形态相像？答：菌落形态相像不等于就是

2、同一种菌。在考证时，营养琼脂的考证菌株为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，假如本底菌为0，则营养琼脂上长的菌应当不是白色念珠菌。要判断能否为白色念珠菌，应进行白色念珠菌的相应判定方法后才能确立。任何微生物都不行能不过从菌落就能够进行判断，只好判断为疑似，而后再做一系列相应的判定实验后才能进行判断。3、生孢梭菌的适合计数用培育基？（好多考证需对生孢梭菌进行计数）答：最简易的方法是用硫乙醇酸盐流体培育基。该培育基上层为含氧层，适合需氧菌生长，基层为厌氧层（基层高度最好7cm以上），适合厌氧菌生长。在培育1618小时这个时间进行察看，计数，超出20小时,因为生殖量大，培育基将浑浊，点计不清。

3、或许是用哥伦比亚琼脂培育基，浇注后，置厌氧罐（袋）里，再置培育箱培育，计数。4、微生物限度检查法中所用的培育基要进行合用性检查试验，请问这些培育基还需要做无菌检查试验吗？答：微生物限度检查，药典上没有特别说明对培育基作无菌性检查，但每次都要做阴性比较实验，阴性比较是检查整个查验系统能否被微生物污染，实质上也包.括了培育基的无菌性检查。5、微生物限度检查法中所用的培育基如：营养琼脂、EMB、Macl等培育基其分装容器需要早先灭菌吗？答：不用。只假如干净的就行，因为分装后还要灭菌。6、拥有抑菌性的供试品，细菌、霉菌、都是用薄膜过滤法来检查的，那么沙门菌能够用惯例法来检查吗？就是能够不经过过滤直接接

4、种到营养肉汤中吗？答：这要看你考证的结果。假如经过考证，你的品种是对沙门菌有克制作用，且用培育基稀释法不可以除去其抑菌性，则就必需考虑用薄膜过滤法。7、微生物限度检查中，稀释剂比较组，是在稀释液中加入50100cfu的菌，仍是把稀释液制成含量50100cfu的浓度呢？答：是把稀释液制成含50100cfu/ml菌的浓度。（在这里，我对上一次授课时对于稀释剂比较组操作的PPT进行纠正，对于离心薄膜过滤法的稀释剂比较组的操作应当是：含50100cfu/ml菌的稀释液离心取稀释液（与试验组相同取上层液）过滤、冲刷贴平板）8、稀释级比较组:含50100cfu/ml菌稀释液离心取供试液稀释液过滤、冲刷贴平

5、板。这里需要加供试液吗？能否应为上述离心后的菌液？答：不需要取供试液，只取“上述离心后的菌液”。对于这一状况，我在第7题里已经作了说明。9、当要做稀释剂比较组时，能否就是从制备供试品时就同时做一份不含供试品而是含菌50100cfu的样品？等于按同一个方法制备一个供试品，五个含菌稀释液比较组？答：是的。10、菌落计数能否需要将每日计数的数据登记在记录本上，能否能够只记录最后的数据？答：能够。每日计数的目的是预防菌落洋溢相互覆盖，扰乱最后的点计。你能够.用油性笔将每日点计的数记录在培育皿上，发报告时只需最后菌落数就行了。11、若样品中有不溶物（如片剂中的辅料颗粒），常常会影响培育先期的结果，药典要

6、求每日计数，所以报告中会出现第二、三日菌落数小于第一日的现象，请问该怎样向客户或监检机构解说这类结果？或许能否能够不计第一、二日菌落数，待辅料颗粒与菌落能够划分后再计数？答：报告书不需要显示第一、次日的结果，只需报告最后结果。原因请见第9题回复。或许是在营养琼脂中加入TTC试剂（每100ml加入0.1%）12、因为微生物查验的特别性，对于样品的微生物限度检查计数数据能否可登记在表格内（此表格仅含样品名称、批号及检查结果）。以后再将检测结果移至详尽记录中？答：原始记录应当只有1份。假如你说的详尽记录是属于一般记录，是没有必需的，假如是指报告书，就应当没问题。这要看你自己订的SOP。13、直接接种

7、法培育后的菌落报告：原液230cfu,稀释10倍后40cfu,请问按2010版药典的菌落数报告规则怎样报告菌落数？答：报告菌落数为4010=400cfu。应以菌落数乘以稀释倍数后的最大值作为报告结果。14、05版药典供试品离心5分钟，而10版药典改用离心3分钟，本来按5分钟考证的产品能否需要从头考证？答：是的。需要再确认一下。15、10版药典附录微生物限度检查法中结果判断的菌落计数单位是以“cfu”表示，但正文品种项下是以“个”表示，最后应以哪位为准呢？答：应当是以cfu为单位。正文是因为印刷时没一致修悔过来，对于这个问题，在补充本上订正过来。（在补充本没出来以前，正文品种仍是以个为单位）16

8、、为什么控制菌液的浓度为50-100cfu/ml。答：50-100cfu在平板上比较好点计，菌落不简单重叠。少于50，则实验偏差会.增大，重现性不好，大于100则简单造成菌落太密或重叠不好计数。17、药典上控制菌检查的方法考证，不过说把菌加至增菌培育基中检出即可，那我们实质做考证与记录时，能否要做增菌此后的步骤呢？答：要。否则你怎么知道检出来的菌是你加进去的试验菌呢？18、采纳薄膜过滤法查验，阳性菌，计数能否也用此方法计数？答：是的。19、对于10版药典延伸培育时间，控制菌35-37改为30-35培育温度，一些已经考证（按05版药典）检品能否需要从头考证？能否有必需进行延伸时间前后菌生长状况变

9、化的考证试验？答：当前没有有关性规定，我们以为可按本来已经考证的方法，用2010年版的培育时间和温度再确认一下，假如结果切合药典要求，则可用。假如不行行，则调整后再进行考证。20、若无需都从头考证，那么参照标准为05版药典，又能够经过什么文件来改正为参照10版药典？答：请看上一题。21、查验控制菌用培育基促生长能力的检查，也需要比较培育基吗？比如：大肠埃希菌用的BL增菌液。答：是的。请看附录“微生物限度检查法”中的表2。22、10版药典增添贴膏剂的检查，狗皮贴膏药属于贴膏剂吗？答：应当是的。请比较中国药典一部附录P8进行确立。23、请问若试验条件限制未能使用匀浆仪制备非规定灭菌制剂能否可采纳温

10、热（不超出45）的稀释液？答：假如能够充分分别样品，能够的。.24、请问若采纳薄膜过滤法进行考证，因为过滤难度大，能否能够每膜过滤相当于供试品0.1g，报告以结果乘以10？答：考证计数时能够的，考证控制菌时查验总量应达到药典要求，假如一张膜查验量达不到，可分几个膜。25、请问采纳静置分层取上清液薄膜过滤，能否需要加稀释剂比较组？答：个人看法能够不用,但未经考证。26、供试品静置分层取上清液进行试验，静置35分钟，能否经过考证供试品的本底菌不会沉究竟部？答：未经考证。27、培育基合用性检查，克制能力检查用菌种是哪些？答：控制菌的培育基合用性检查,请看药典“微生物限度检查法”中表2，计数用培育基请

11、看“计数培育基的合用性检查”。28、投猜中有神曲提取物，限度应界定为多少？答：不是药材原粉投料，标准均按“不含药材原粉的制剂”履行。29、微生物限度检查里有关经验类的东西都一定经过考证才能够使用,那么考证的内容包含哪些数据应记录，能否也应当有文件与记录？答：参照药典，你是作什么样的查验，就作什么样的考证，有考证就应当有记录。30、比方10倍稀释级菌落数为0，100倍稀释级菌落数为2，按2005年版药典应以低稀释级菌落数报告为10，仍是按最高均匀菌落数乘以稀释倍数报告为个/g，能否理解正确？答：按中国药典2005年版报告应为10个/g（或ml），按中国药典2010年版报告应为200cfu/g（或

12、ml）。31、计数方法的考证：履行新版药典能否就延伸培育时间做方法考证？答：是。.32、平皿法中提到“每个稀释级每种培育基起码查验2ml供试液”，是每皿注2ml仍是每皿注1ml？如要做0.5ml或0.2ml，本级能否还需做1ml?答：惯例平皿法时每皿注1ml，做2个皿；培育基稀释法（即每皿0.5ml或0.2ml）时，供试液总量也应是2ml，每1ml菌落数共计后，2ml的菌落数再均匀；本级就不需做1ml了，但下一级就只做1ml/皿就行了。33、在细菌霉菌计数检查中，老师提到的每个稀释级每种培育基起码查验2ml供试液，但2010版药典上并无要求要这样做，那应以哪个做法为准？答：药典中对平皿法的描绘

13、：平皿法“取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入1520ml温度不超出45的熔解的营养琼脂培育基或玫瑰红钠琼脂培育基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培育基，混匀，凝结，倒置培育。每稀释级每种培育基起码制备2个平板。”这里的描绘是以惯例平皿法进行描绘的，所以“每稀释级每种培育基起码制备2个平板”，也就是2ml的量。对于培育基稀释法，请看药典供试液的制备中3.(6)。34、10版药典要求检查沙门菌的供试品，其查验量应增添20g或20ml，（此中10g或10ml用于阳性比较试验）能否指20g或20ml样品中10g或10ml直接用于沙门菌控制检查，另10g或10ml加pH7.0的缓冲液100ml作为

14、1：10的供试品溶液作为细菌，霉菌，酵母菌的查验吗？仍是指20g都用于沙门菌检查？答：20g都是用于沙门菌检查。沙门菌的检查法是：取3份200ml营养肉汤，其2份分别加入10g或10ml样品，取此中1份加入10100cfu菌液作阳性比较。第3份加入10ml稀释剂作阴性比较进行检查，所以。细菌，霉菌，酵母菌查验的样品不包含在这里。35、沙门菌检查为10g或10ml，为什么一次检查量又为20g或20ml？（P130）答：此中10g（或10ml）是查验用的，另10g（或10ml）是用于阳性比较试验的。请看上一题目解说。36、采纳薄膜过滤法时，滤膜采纳何种方法灭菌最好？答：据我们经验，最好采纳一次性过

15、滤器。假如用多次使用的过滤器，则滤膜用.湿热灭菌比较好，因为干热灭菌后，滤膜较脆，试验时不简单保证滤膜完好。37、方法学考证时，采纳平皿法稀释级计数，能否要做稀释级比较组？答：稀释级比较组？是指本底菌组吗？假如是，那就要。因为要平行试验，才能知道同一稀释级的本底菌是多少。假如是指稀释剂比较组，就不用，因为所用的稀释剂是药典规定的，是无毒性的稀释剂。38、方法考证的培育基稀释法考证（样品0.2ml）只做2个平皿，每个平皿的加菌量是多少？假如同步加0.2ml菌，其加菌量就达不到50100cfu。答：无论每皿加的供试液的量是多少，每皿加菌液的量都是1ml,即都是50100cfu。39、平皿法（稀释法

16、）计数考证时，取最低稀释供试液如0.5ml和50100cfu试验菌，那50100cfu的试验菌是指50100cfu仍是50100cfu0.5ml？我们是要加1ml仍是0.5ml的试验菌？答：平皿法（稀释法）计数考证时，每皿要加的菌液是50100cfu，一般我们配制的菌液浓度是50100cfu/ml，所以就加1ml。假如你配制的菌液不是这个浓度，你能够折算，只需加的菌数是50100cfu/皿就行了。40、细菌霉菌方法考证，同时做1ml，0.5ml，0.2ml供试品组及供试品考证组时，菌液能否也按1ml，0.5ml，0.2ml分别加入？此时1ml，0.5ml，0.2ml供试品考证组中的菌数可否也达

17、到50100cfu？答：考证时，无论是1ml，0.5ml，0.2ml的供试液，每皿的加菌量都是50100cfu，1ml（假如你配制的菌液浓度是50100cfu/ml）。41、培育基稀释方法考证，每皿0.2ml，加菌液0.2ml，那么0.2ml的菌液计数能否在50100cfu0.2ml。答：请看上一题的解说。42、微生物限度检查霉菌、酵母菌要求不超出100的状况下，这两种菌是不是要分开来检，用不一样培育基检测？当前只用玫瑰红钠琼脂培育基检测这两种菌，有.没有必需改正？答：按药典规定，一般品种是用玫瑰红钠琼脂培育基检测这两种菌；含蜂蜜、王浆的液体系剂，用玫瑰红钠琼脂培育基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨

18、葡萄糖琼脂培育基测定酵母菌数，归并计数。43、测表面微生物时，直接接触药品与间接接触药品的限度（25）一致，能否有不当，假若有不一样建议，可否供给其计数方法？此外，假如检测到菌落数超出以上，那么报告规则的菌数也是取两位有效数字吗？答：“测表面微生物”？这应当是药包材的检测标准吧？因为我们还没有展开这项业务，所以对其标准状况不认识，但既然已经成为标准，就一定有其合理性，若有不一样建议，可向标准制定部门反应，并提出你以为合理的解决方法。微生物的报告规则一般都是取两位有效数字。44、内包装资料PVC硬片，铝箔等样品的微生物查验（限度）方法？答：是药包材的查验？应当有相应的查验方法吧！45、控制菌检查

19、，大肠埃希菌IMViC试验，结果显示未检出，有没有硬性规定一定要进一步判定？答：对于大肠埃希菌检查，IMViC试验已经是判定试验了，假如IMViC试验结果显示未检出，那么就能够报告未检出大肠埃希菌。46、菌数报告按两位有效数字报告，是按数字修约方法进行数据修约，仍是只用保存两位有效数字，如菌数为364报告菌数为360，仍是370；若菌数为3670报告菌数应为多少？答：修约原则是4舍6入5留双。即菌数为364报告菌数为360；若菌数为3670报告菌数应为3700；假如是3650，则报告菌数应为3600。47、在平时查验中控制菌查验方法经过考证的控制菌查验可否不做阳性比较？理解：在考证时已做过控制菌供试液，考证时供试液对控制菌无抑菌性，若不过做控制菌（不加供试液）则在培育基合用性时已证明培育基的质量，那么每次试验做阳性比较的意义是什么？或许阳性比较试验怎么做？.答：从理论上来说是能够的，考证试验实质上就是查验时的阳性比较试验。但药典要求控制菌检查时必需同时从阳性比较和阴性比较，这应当是考虑到查验过程的查验系统的偏差吧。自己以为，生产厂家对自己的产品在经考证后，查验时假如每日同一产品批量很大，能够只做一个阳性比较，但对于药检所则一定每批都做，因为对于同一品种，不一样厂家其生产工艺不尽相同，在查验过