小鼠胚胎成纤维细胞的分离和培养_第1页
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文档简介

1、 (9) 两套小亂用解刘器械 (包括眼科剪和眼科 ) D葡萄糖酚红 0.1g 注：此步应农胶卷暗盒内操作，然后于 4C 避光保存。 (4) 75%酒精谄毒后，用普通剪刀和镶子剪开下腹皮肤，并用两把弯头止血钳夹住切口处的皮朕向头尾 两側李拉即剥发。 (6) 用眼科住一側子言，分需子言糸朕，服科弯剪剪断子言角和子言颈，将整个子言分禽下来 (9) 将子言移入另一盛有 PBS 的平皿中，用服科弯剪沿子言糸朕打开子言，取出带有於朕的於亂，并用两把服科钱子剔除於朕，取出於魚 (一般有 12 只)。(10) 将於亂移入另一盛有 PBS 的平皿中，用眼科剪和眼科饮去除於亂的头、叨肢和内脏，得魚歴躯 干。 2.

2、 小亂胆於成纤维细胞的原代培养 (组织块培养法 ) 粘稠)。 30 秒(可见 组织块变得较为 匀)。 (9) 培养的头两天不要晃动培养瓶，第三夭可以观痙，可见组织碎块附着于培养瓶底，周囲细胞呈放射状 生长，此时有多种细胞类型，有的是呈梭形的成纤维细胞，有的是星圖形的上皮细胞。如果细胞己全 部长满则可谄化传代，如果未全部长 (4) 疫倒置镜下观寨，当细胞雯圆时即可加入 (5) 将培养物全部吸置尖底禽心管内，特置 用力吹打整个瓶底 (约 30 或御壁，勿直接冲冲击底壁的细胞 )。 培养液终止荫化，并吹打壁底细胞 (应注意逐瓶操作，避免荫化肘间过长而使细胞丢夬 过多)O 靠疫培养瓶的上壁 (6) 计数并调整密度：吸出混悬后的细胞悬液 50ul 用血细胞计数板计数混合后细胞悬液的密度，然后将细 悬液)o 5.饲养层细胞的冻存和复苏实验 1) 细胞：镜松，将处于对数生长期的小亂軀於成纤维细胞用于冻存实验。弃旧培养液，后以 PBS 或新鮮培养液漂冼细 1) 冻融：从低温冰箔中取出冻存细胞

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