防风中的色原酮化合物的高效液相色谱与电喷雾质谱联用研究

1、防风中的色原酮化合物的高效液相色谱与电喷雾质谱联用研究 李丽，刘质净，桂语歌，闫静，刘春明【摘要】目的利用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术研究防风中4种色原酮类化合物。方法实验采用反相18色谱柱，乙腈和2%的醋酸溶剂体系梯度洗脱，别离防风中色原酮化合物，电喷雾质谱采用正离子形式。结果别离并检测了防风中4种色酮类化合物，并获得了化合物的液相保存时间、分子量以及化合物构造信息。结论高效液相色谱与电喷雾质联用技术能快速鉴定防风中色原酮类化合物。【关键词】防风；色原酮类化合物；高效液相色谱与电喷雾质谱联用Keyrds：Sapshnikviadivariata;hrnes;HPL-ESI防风为伞形科多年

2、生草本植物防风Sapshnikviadivariata(Turz.)Shishk的枯燥根。药理研究说明，防风具有解热镇痛、镇静、抗炎、抗菌、抗过敏等多方面的药理作用1，2。防风中主要含有色原酮类、香豆素类以及多糖类等多种化学成分，而主要有效成分为色原酮化合物39。近年来，高效液相色谱法已成为分析防风色原酮类化合物的主要方法69。而防风中色原酮类化合物的别离方法通常采用硅胶或聚酰胺柱层析，这种分析方法通常情况下工作量较大，别离效率不高。而高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术在中药领域的广泛应用，使分析、鉴定中药复杂体系中的化学成分更加简便、快速10，11。有关防风中色原酮类化合物高效液相色谱与电喷雾

3、质谱联用研究已有文献报道12，但该论文只给出有限的质谱信息。本文利用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术分析、鉴定了防风中的4种色原酮类化合物。构造式见图1。1器材与方法1.1仪器及实验条件高效液相色谱实验采用AgilentTehnlgy1100SeriesHPL系统，二极管阵列检测器phtdidearraydetetr，DAD，=254n；AgilentExtend-18色谱柱(2504.6,5)和18保护柱，柱温为25。实验中采用二元线性梯度洗脱，流动相组成为乙腈A,2%的醋酸水溶液B。流速为1.0l/in，样品分析时间为25in。流动相梯度：020in，90%B60%B；2022in,60%

4、B0%B；2225in，0%B90%B。样品进样量为10l。质谱分析采用(FinnganLQin-trap,AT,SanJse,A,USA)电喷雾离子阱质谱。质谱检测采用正离子形式。扫描的质荷比范围为502000。离子阱的条件：壳气(N2)：60bar；辅助气(He)：10bar；喷雾电压：5kV；毛细管电压：-15V；毛细管温度：270；Tubelensffset：-20V；源内碰撞诱导解离(in-sureID)的碰撞能为40%。1.2试剂与材料所用试剂均为分析纯(北京化工厂)；防风S.divariata药材购于北京同仁堂药店(长春分店)。2结果如表1所示，在源内ID实验中,色谱峰1的准分子

5、离子+H+(/z469)主要形成3个主要的分子离子峰，分别为/z307，289和235。/z469离子失去一个质量数为162的中性碎片一分子的葡萄糖基后生成-162+H+(/z307)的离子；/z469离子同时失去一个质量数为162的中性碎片一分子的葡萄糖基和一个质量数为18的中性碎片一个水分子，生成-180+H+(/z289)的离子；/z469离子丧失5位上的H3H和4位上的-Glu基团，生成/z259的碎片离子。该断裂规律符合升麻素苷的构造特点，进一步确定峰1为升麻素苷。化合物2的分子离子峰为+H+(/z307)，因此可确定化合物2的分子量为306，通过与文献35，12比照，与升麻素的分子

6、量一致，与升麻素苷的分子量相差162。在源内ID实验中,色谱峰2的准分子离子+H+(/z307)形成3个主要的分子离子峰，分别为/z289，259和235。/z289和259离子的碎裂规律与化合物1的碎裂规律一致，这进一步肯定了我们前面的推测。而/z307离子从2和3开环生成-72+H+(/z235)的离子。由此进一步确定峰2为升麻素。化合物3的分子离子峰为+H+(/z453)，因此可确定化合物2的分子量为452，通过与文献35，12比照，与5-甲基维斯阿米醇苷的分子量一致。如表1所示，在源内ID实验中，/z453离子形成四个主要的分子离子峰，分别为/z291，273，243和219。/z45

7、3离子失去一个质量数为162的中性碎片一分子的葡萄糖基后生成-162+H+(/z291)的离子；/z453离子同时失去一个质量数为162的中性碎片一分子的葡萄糖基和一个质量数为18的中性碎片一个水分子，生成-180+H+(/z273)的离子；/z453离子丧失5位上的H3H和4位上的-Glu基团，生成/z243的碎片离子；而/z219离子是母离子丧失一分子的葡萄糖基，5位上H3H基团，4位上的羰基开环形成的离子，该断裂规律符合5-甲基维斯阿米醇苷的构造特点，进一步确定峰3为5-甲基维斯阿米醇苷。化合物4的分子离子峰为+H+(/z291)，因此可确定化合物2的分子量为290，通过与文献35，12比照，与5-甲基维斯阿米醇的分子量一致，化合物3和4的分子量相差162葡萄糖基。而/z453离子在二级串联质谱中丧失一个质量数为162的中性碎片一分子的葡萄糖基后生成-162+H+(/z291)的离子，也进一步说明化合物3的分子构造比化合物4多一个葡萄糖基。如表1所示，在源内ID实验中，/z291离子形成3个主要的分子离子峰，分别为/z273，243和219。与/z453离子具有类似的碎裂规律，该断裂规律进一步确定峰4为5-甲基维斯阿米醇。3讨论实验结果说明，通过高效