制剂的质量控制培训教材

1、目录TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc11401 3.2.P.5 制剂的质量操纵 PAGEREF _Toc11401 3 HYPERLINK l _Toc28482 3.2.P.5.1 质量标准 PAGEREF _Toc28482 3 HYPERLINK l _Toc18506 3.2.P.5.2 分析方法 PAGEREF _Toc18506 4 HYPERLINK l _Toc27982 3.2.P.5.2.1 性状 PAGEREF _Toc27982 4 HYPERLINK l _Toc29403 3.2.P.5.2.2 鉴不 PAGEREF _Toc2940

2、3 4 HYPERLINK l _Toc13716 3.2.P.5.2.3 检查 PAGEREF _Toc13716 4 HYPERLINK l _Toc8121 3.2.P.5.2.4 含量测定 PAGEREF _Toc8121 10 HYPERLINK l _Toc1293 3.2.P.5.3 分析方法的验证 PAGEREF _Toc1293 11 HYPERLINK l _Toc31161 3.2.P.5.3.1 分析方法学验证用样品 PAGEREF _Toc31161 11 HYPERLINK l _Toc15858 3.2.P.5.3.2 有关物质方法学验证 PAGEREF _Toc

3、15858 11 HYPERLINK l _Toc6654 3.2.P.5.3.3 吡啶-3-磺酸方法学验证 PAGEREF _Toc6654 21 HYPERLINK l _Toc7520 3.2.P.5.3.4 含量测定方法学验证 PAGEREF _Toc7520 28 HYPERLINK l _Toc22423 3.2.P.5.3.5 溶出度测定方法学验证 PAGEREF _Toc22423 32 HYPERLINK l _Toc31497 3.2.P.5.3.6 微生物限度检查方法学验证 PAGEREF _Toc31497 44 HYPERLINK l _Toc31968 3.2.P.

4、5.4 批检验报告 PAGEREF _Toc31968 44 HYPERLINK l _Toc19328 3.2.P.5.5 杂质 PAGEREF _Toc19328 45 HYPERLINK l _Toc22818 3.2.P.5.5.1 杂质情况分析 PAGEREF _Toc22818 45 HYPERLINK l _Toc8679 3.2.P.5.5.2 杂质制定依据 PAGEREF _Toc8679 46 HYPERLINK l _Toc6152 3.2.P.5.6 质量标准制定依据 PAGEREF _Toc6152 46 HYPERLINK l _Toc5125 3.2.P.5.6.

5、1 质量标准 PAGEREF _Toc5125 46 HYPERLINK l _Toc21983 3.2.P.5.6.2质量标准制定依据及产品检测结果 PAGEREF _Toc21983 503.2.P.5 制剂的质量操纵3.2.P.5.1 质量标准检验项目方法放行标准限度货架期标准限度性状感观本品为薄膜衣片，除去包衣后显白色或类白色本品为薄膜衣片，除去包衣后显白色或类白色鉴不HPLC法（中国药典2010年版二部附录 D)供试品溶液中沃诺拉赞峰保留时刻应与对比品溶液中沃诺拉赞峰保留时刻一致供试品溶液中沃诺拉赞峰保留时刻应与对比品溶液中沃诺拉赞峰保留时刻一致有关物质HPLC法（中国药典2010年

6、版二部附录 D)杂质：不得过0.4%、杂质：不得过0.4%、杂质：不得过0.4%、杂质：不得过0.4%、杂质：不得过0.4%、杂质：不得过0.4%、其他单杂：不得过0.4%、其他总杂：不得过1.5%杂质：不得过0.5%、杂质：不得过0.5%、杂质：不得过0.5%、杂质：不得过0.5%、杂质：不得过0.5%、杂质：不得过0.5%、其他单杂：不得过0.5%、其他总杂：不得过2.0%吡啶-3-磺酸HPLC法（中国药典2010年版二部附录 D)不得过0.4%不得过0.5%含量均匀度含量均匀度检查法（中国药典2010年版二部附录X E）应符合规定应符合规定溶出度溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录

7、 C第二法）90%85%微生物限度微生物限度检查法（中国药典2010年版二部附录 J）细菌数不得过1000cfu/g；霉菌和酵母菌数不得过100cfu/g；大肠埃希菌不得检出/g细菌数不得过1000cfu/g；霉菌和酵母菌数不得过100cfu/g；大肠埃希菌不得检出/g含量HPLC法（中国药典2010年版二部附录V D)含（C17H16FN3SO2）应为标示量的93.0%107.0%含（C17H16FN3SO2）应为标示量的90.0%110.0%3.2.P.5.2 分析方法 3.2.P.5.2.1 性状 检查方法：感观具体试验操作：取本品，观看其外观性状。限度：本品应为薄膜衣片，除去包衣后显白

8、色或类白色。3.2.P.5.2.2 鉴不 检查方法：高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录 D)仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、电子分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试药与试剂：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。色谱条件：流淌相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：1.0ml/min 溶剂：流淌相 检测器：紫外检测器 波长：230nm 色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）具体试验操作：在含量测定项下记录的色谱图中，比较供试品溶液中沃诺拉赞峰与对比品溶液中沃诺拉赞峰的保留时刻

9、。限度：供试品溶液中沃诺拉赞峰与对比品溶液中沃诺拉赞峰保留时刻应一致。3.2.P.5.2.3 检查 3.2.P.5.2.3.1 有关物质 检查方法：高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录 D)仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、电子分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试液与试药：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为230nm）； 流淌相：0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液（用三乙胺调节pH值至7.2）-甲醇（52：48）为流淌相A，甲醇为流淌相B，按下表梯度进行洗

10、脱； 溶剂：流淌相A； 流速：1.0ml/min。 梯度如下表：时刻（分钟）流淌相A（%）流淌相B（%）01000231000452080501000601000 具体试验操作：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞25mg），周密称定，置50ml量瓶中，加流淌相A适量，振摇，使充分溶解，加流淌相A稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；周密量取适量，加流淌相A定量稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞2.5g的溶液，作为对比溶液。分不取杂质、工作对比品各适量，周密称定，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5g的溶液，作为杂质对比品溶液。取富马酸沃诺拉赞工作对比品及杂质工作对比品各适

11、量，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞0.5mg及各杂质均为2.5g的混合溶液，作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录 D）试验，用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液（用三乙胺调节pH值至7.2）-甲醇（52：48）为流淌相A，甲醇为流淌相B，按上表梯度进行洗脱，检测波长为230nm。取系统适用性溶液20l注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质、沃诺拉赞、依次出峰，理论板数按沃诺拉赞峰计算应不低于5000，且沃诺拉赞峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。周密量取供试品溶液、对比溶液与杂质对比品溶液各20l，分不注入液相色谱仪，记录色谱

12、图。 计算公式：已知杂质、： （Ax为供试品溶液中已知杂质的峰面积，AS为对比品溶液中已知杂质的峰面积，Wx为已知杂质工作对比品的称样量，Px为已知杂质工作对比品含量，Vx为已知杂质对比品溶液的稀释体积，V为供试品溶液的稀释体积，W为供试品的称样量） （Ai为供试品溶液中其他单个未知杂质的峰面积，At为对比溶液主峰面积） （A总为供试品溶液中所有峰的峰面积和，A主为供试品溶液中沃诺拉赞的峰面积，为供试品溶液中已知杂质的峰面积之和，At为对比溶液中沃诺拉赞的峰面积）限度：供试品溶液色谱图中如显杂质峰（溶剂峰及富马酸峰除外），杂质、按外标法以峰面积计算，不得大于标示量的0.5%；其他单个未知杂质峰

13、面积不得大于对比溶液的主峰面积（0.5%）；其他杂质峰面积的和不得大于对比溶液的主峰面积的4倍（2.0%）。3.2.P.5.2.3.2 吡啶-3-磺酸 检查方法：高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录 D)仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、电子分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试液与试药：磷酸二氢钾、磷酸、甲醇、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为261nm）； 流淌相：0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）为流淌相A，甲醇为流淌相B，按下表梯度进行洗脱； 溶剂：

14、流淌相A； 流速：1.0ml/min。梯度如下表：时刻（分钟）流淌相A（%）流淌相B（%）01000710007.11090910909.11000201000 具体试验操作：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞25mg），周密称定，置50ml量瓶中，加流淌相A适量，振摇，使充分溶解，加流淌相A稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取杂质工作对比品适量，周密称定，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中约含吡啶-3-磺酸2.5g的溶液，作为对比品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录 D）试验，用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至

15、3.0）为流淌相A，甲醇为流淌相B，按上表梯度进行洗脱，检测波长为261nm。取对比品溶液、供试品溶液各20l注入液相色谱仪，记录色谱图， 计算公式： （Ax为供试品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面积，AS为对比品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面积，Wx为杂质工作对比品的称样量，Px为杂质工作对比品含量，Vx为吡啶-3-磺酸对比品溶液的稀释体积，V为供试品溶液的稀释体积，W为供试品的称样量）限度：供试品溶液色谱图中如显与对比品溶液相对应的杂质峰，按外标法以峰面积计算不得大于标示量的0.5%。3.2.P.5.2.3.3 溶出度检查方法：溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录 C第二法） 高效液相色谱法（

16、中国药典2010年版二部附录 D)仪器与用具：溶出仪、温度计、高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试液与试药：盐酸、磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为230nm）； 流淌相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调pH值至7.2）-甲醇（52:48）； 溶剂：pH1.0盐酸溶液； 流速：1.0ml/min。具体试验操作：取本品，照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C第二法），以pH1.0盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟

17、50转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量滤过，周密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释成每1ml中约含沃诺拉赞11g的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸沃诺拉赞工作对比品适量，用溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞11g的溶液，作为对比品溶液，周密量取供试品溶液与对比品溶液各20l，照含量测定项下的色谱条件测定，计算每片的溶出量。 计算公式：（A供为供试品溶液的主峰面积；A对为对比品溶液主峰面积；M对为对比品的称样量，mg；T对为对比品的含量；V对为对比品溶液的稀释体积；V供为供试品溶液的稀释体积；X为标示量，10mg或20mg）限度：不得低于标示量的85%。3.2.P.5.2.3.

18、4 含量均匀度检查方法：含量均匀度检查法（中国药典2010年版二部附录 E） 高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录 D)仪器与用具：高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试液与试药：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为230nm）； 流淌相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调pH值至7.2）-甲醇（52:48）； 溶剂：流淌相； 流速：1.0ml/min。 具体试验操作： 供试品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg规格）或

19、200ml量瓶（20mg规格）中，加流淌相适量，振摇，使充分溶解，用流淌相稀释至刻度，摇匀，滤过，周密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀释至刻度，摇匀，即得。 对比品溶液：取富马酸沃诺拉赞工作对比品适量（约相当于沃诺拉赞10mg），周密称定，置100ml量瓶中，加流淌相溶解并稀释至刻度，摇匀，周密量取5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀释至刻度，摇匀，即得。 周密量取供试品溶液和对比品溶液各20l，分不注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积分不计算每片中沃诺拉赞的含量。依法测定10片中沃诺拉赞的含量。 计算公式：含量（%）=（W对分不为对比品的称样量，mg；P对为对比品的含量

20、；A样、A对分不为供试品、对比品溶液中沃诺拉赞的峰面积；V样、V对分不为供试品溶液、对比品溶液的稀释体积） 分不测定每片以标示量为100的相对含量，求其均值和标准差以及标示量与均值之差的绝对值：如，则供试品的含量均匀度符合规定；若，则不符合规定；若，且，则应另取20支复试，依照初、复试结果，计算30支的均值、标准差和标示量与均值之差的绝对值：如，则供试品的含量均匀度符合规定；若，则不符合规定。其中： ，限度：应符合规定。3.2.P.5.2.3.5 微生物限度1.试液及培养基：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9

21、%氯化钠溶液。2.仪器与用具：智能生化培养箱、霉菌培养箱、电动吸引器、薄膜过滤器等。3.具体试验操作：用平皿法，依法检查（中国药典2010年版二部附录 J）。（1）细菌、霉菌及酵母菌：供试品配制：按中国药典（2010年版二部）微生物限度检查法（附录XI J）的规定，称取供试品10g，加pH 7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，静置10min，取上部澄清液体作为1：10供试液，备用。直接接种法：取1:10供试品每皿1.0ml，分不加入1ml约含50100cfu/m15株试验菌。立即倾注琼脂培养基1520ml，每株菌平行制备2个平皿，待凝固后置规定温度培养35天观看结果，测定其菌数

22、。菌液组测定试验所加入试验菌的菌数。供试品对比组：取1:10供试液1ml，按试验组供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。（2）操纵菌的检查法大肠埃希菌：试验组取1：10供试液10ml，分不加入100ml、200ml的胆盐乳糖培养基中，加入10100cfu/ml试验菌，35-37培养18-24h；取培养液0.2ml，接种至5mlMUG培养管内，培养5h与24h时，置紫外灯366nm处观看，然后沿培养基管壁加入数滴靛基质试液。阴性菌对比组：取1：10供试液10ml，分不加入100ml、200ml的胆盐乳糖培养基中，加入10100cfu/ml的金黄色葡萄球菌，同试验组方法进行试验。于5、24h在3

23、66nm紫外光下观看，同时用未接种的MUG培养基作本底对比。在紫外光下若管内培养物呈现蓝白色荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。观看后，沿培养管的管壁加人数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对比的MUG和靛基质试验应为阴性。如MUG阳性、靛基质阳性，判检出大肠埃希菌；如MUG阴性、靛基质阴性，判未检出大肠埃希菌。限度：细菌数不得过1000cfu/g；霉菌和酵母菌数不得过100cfu/g；大肠埃希菌不得检出/g3.2.P.5.2.4 含量测定检查方法：高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录 D)仪器与用具：高效液相色谱仪、电子分析天平、十八

24、烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯、PH计。试药与试剂：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。色谱条件：流淌相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：1.0ml/min 检测器：紫外检测器 波长：230nm 溶剂：流淌相 色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm） 具体试验操作：取本品20片，周密称定，研细，周密称取适量（约相当于沃诺拉赞10mg），置100ml量瓶中，加流淌相适量，振摇，使充分溶解，用流淌相稀释至刻度，摇匀，滤过，周密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流淌相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液

25、。周密量取20l，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取富马酸沃诺拉赞工作对比品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。计算公式：含量(%)=（A样为供试品溶液中主峰的面积；A对为对比品溶液中主峰的面积；M对为对比品的称样量，mg；M样为供试品的称样量，mg；T对为对比品的含量；V对为对比品溶液的稀释体积；V样为供试品溶液的稀释体积；为平均片重，mg；X为标示量，10或20mg）限度：应为标示量的90%110%。3.2.P.5.3 分析方法的验证 按照化学药物质量操纵分析方法验证技术指导原则、化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则、化学药物杂质研究技术指导原则等以及中国药典2010年版二部

26、附录中有关的指导原则提供以下方法学验证资料。3.2.P.5.3.1 分析方法学验证用样品批号规格批量（片）试制日期试制地点XA00910mg1552015.1.30山东富创医药科技有限公司XS15030110mg36402015.3.72015030110mg364802015.3.142015.3.152015030210mg361602015.3.162015.3.172015030310mg368402015.3.172015.3.18XB00120mg1452015.2.28XS15030220mg18002015.3.82015.3.92015030420mg184602015.3.

27、182015.3.192015030520mg18520 2015.3.192015.3.202015030620mg185602015.3.202015.3.213.2.P.5.3.2 有关物质方法学验证3.2.P.5.3.2.1 有关物质检查方法学验证总结试验项目验证结果条件选择C18柱，以0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液（用三乙胺调节pH值至7.2）-甲醇（52:48）为流淌相A，甲醇为流淌相B，进行梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为230nm。系统适用性主峰及各已知杂质与相邻杂质分离良好，理论板数符合要求。专属性酸、碱、高温、氧化、光照降解杂质均与主峰分离良好，各已知杂质与相邻峰分离

28、良好，主峰及各已知杂质峰纯度均合格；辅料及其降解产物和梯度峰不干扰本品有关物质的测定。检测限沃诺拉赞检测限为0.18ng；杂质的检测限为0.18ng；杂质的检测限为0.18ng；杂质的检测限为0.17ng；杂质的检测限为0.18ng；杂质的检测限为0.17ng；杂质的检测限为60ng。定量限沃诺拉赞定量限为0.60ng；杂质的定量限为0.59ng；杂质的定量限为0.59ng；杂质的定量限为0.57ng；杂质的定量限为0.61ng；杂质的定量限为0.55ng；杂质的定量限为2.00ng。线性富马酸沃诺拉赞在0.0992.962g/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质在0.0992.962

29、g/ml线性良好，相关系数R2=0.9995杂质在0.0982.943g/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质在0.0942.831g/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质在0.1023.061g/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质在0.0922.752g/ml线性良好，相关系数R2=0.9994杂质在0.13.0g/ml线性良好，相关系数R2=0.9997准确度杂质回收率在98.16%100.46%范围内，准确度良好，RSD=0.72%杂质回收率在98.46%100.69%范围内，准确度良好，RSD=0.73%杂质回收率在98.22%99.62%范围内，准确度良好，

30、RSD=0.44%杂质回收率在98.49%100.98%范围内，准确度良好，RSD=0.82%杂质回收率在98.26%100.17%范围内，准确度良好，RSD=0.70%杂质回收率在98.07%100.24%范围内，准确度良好，RSD=0.79%周密度重复性试验：测得杂质含量RSD=1.74%，杂质含量RSD=2.08%，杂质含量RSD=1.91%，杂质含量RSD=1.86%，测得杂质含量RSD=2.19%，杂质含量RSD=1.61%，其他单杂含量RSD=5.83%，其他总杂含量RSD=5.19%。中间周密度试验：测得杂质含量RSD=1.42%，杂质含量RSD=1.49%，杂质含量RSD=2.

31、23%，杂质含量RSD=1.40%，测得杂质含量RSD=1.63%，杂质含量RSD=1.32%，其他单杂含量RSD=5.18%，其他总杂含量RSD=5.40%。溶液稳定性供试品溶液、对比溶液、杂质对比品溶液室温放置12小时内溶液稳定性良好。耐用性采纳不同色谱柱，不同的流淌相比例、pH、盐浓度等检查本品的有关物质，各已知杂质的分离度均符合要求。各已知杂质测的含量的RSD均小于10%。3.2.P.5.3.2.2 有关物质检查方法学验证内容1、仪器设备岛津LC-20AT高效液相色谱仪、岛津SPD-M20A二极管阵列检测器岛津LC-20AT高效液相色谱仪、岛津SPD-M20A紫外检测器2、色谱条件选择

32、及溶液配制2.1色谱条件选择 同原料药采纳十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液（用三乙胺调节pH值至7.2）-甲醇（52:48）为流淌相A，甲醇为流淌相B，进行梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为230nm；流速为1.0ml/min。梯度表如下：时刻（分钟） 流淌相A（%） 流淌相B（%）010002310004520805010006010002.2 溶液配制 供试品溶液：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞25mg），周密称定，置50ml量瓶中，加流淌相A适量，振摇，使充分溶解，加流淌相A稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。对比溶液：周密量取供试品溶液适量，加

33、流淌相A定量稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞2.5g的溶液，作为对比溶液。分不取杂质、工作对比品各适量，周密称定，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5g的溶液，作为杂质对比品溶液。系统适用性溶液：取富马酸沃诺拉赞工作对比品及杂质工作对比品各适量，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞0.5mg及各杂质均为2.5g的混合溶液，作为系统适用性溶液。3、破坏性试验 破坏试验溶液的配制与处理：溶液稀释步骤处理方法溶剂辅料空白辅料101.23mg20ml无降解处理未破坏原料13.43mg+辅料103.61mg20ml无降解处理高温破坏原料13.51mg+辅料101.77mg20m

34、l水浴100加热13小时高温空白辅料101.82mg20ml水浴100加热13小时光照破坏原料13.44mg+辅料105.01mg20ml光照箱4500LX照耀45小时光照空白辅料103.66mg20ml光照箱4500LX照耀45小时酸破坏原料13.39mg+辅料102.57mg20ml1mol/L盐酸2ml，室温放置42小时酸空白辅料100.94mg20ml1mol/L盐酸2ml，室温放置42小时碱破坏原料13.42mg+辅料100.85mg20ml1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置42小时碱空白辅料104.05mg20ml1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置42小时氧化破坏原料1

35、3.25mg+辅料104.44mg20ml高氯酸1ml，室温放置17小时氧化空白辅料103.38mg20ml高氯酸1ml，室温放置17小时取上述溶液各20l，分不注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表3.2.P.5.3.2-1。（图3.2.P.5.3.2-113，制剂的质量操纵一第6577页）表3.2.P.5.3.2-1 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查破坏试验结果名称沃诺拉赞总峰面积主峰面积/%物料平衡/%分离度峰纯度未 破 坏4.770合格2246747099.924100高温破坏1.652合格2234047196.52098.85光照破坏1.678合格2234663197.64699.39酸

36、破 坏2.189合格2161695791.01296.50碱 破 坏2.236合格2119482394.78794.41氧化破坏4.642合格2164593189.30997.65计算公式：物料平衡%=（破坏后总峰面积/浓度）/（破坏前总峰面积/浓度）结论：溶剂及辅料均不干扰本品的测定，各破坏条件下主峰与相邻杂质峰的分离度符合要求，主峰未检出不纯物，样品破坏前后物料守恒，故该方法测定本品有关物质的专属性良好。4、定量限试验 同原料药，详见3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-2 富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质定量限试验结果名称峰面积平均RSD%定量限/ng123456杂质159014

37、62154616621653179016176.940.57杂质24262707269527072996235926488.660.59沃诺拉赞30593252310030473340320331673.710.60杂质4510510851094607468256914951.178.950.59杂质2579284424362198258523442497.678.980.61杂质4012471144094307407944604329.675.960.55杂质6520646367526003668764966486.834.062.00 结论：此法灵敏度较高，在限度范围内可用于富马酸沃诺拉赞

38、及已知杂质定量检查。5、检测限试验 同原料药，详见3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-3 富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质检测限试验结果名称杂质杂质沃诺拉赞杂质杂质杂质杂质C检测限ng/ml8.498.898.958.839.188.2630.00检测限/ng0.170.180.180.180.180.170.60结论：此法灵敏度较高，可有效检出富马酸沃诺拉赞及已知杂质。6、线性关系试验 同原料药，详见3.2.S.4.3.2。表3.2.P.5.3.2-4 富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质线性试验结果名称浓度范围（g/ml）线性方程R2沃诺拉赞0.0992.962A=93720C-842.

39、280.9999杂质0.0992.962A=94476C-11530.9995杂质0.0982.943A=115542C-2715.90.9999杂质0.0942.831A=63504C-14470.9999杂质0.1023.061A=90488C-1954.70.9999杂质0.0922.752A=70947C-3387.40.9994杂质0.13.0A=100700C-5469.80.99977、周密度试验 7.1 重复性试验取本品（批号：XS150301，规格：10mg）100片，周密称定其重量，求得平均片重为115.23mg。将上述100片样品置于研钵中研细，混匀，作为供试品粉末。分不

40、取杂质、工作对比品各适量，周密称定，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5g的溶液，作为杂质对比品溶液。取供试品粉末约11.5g，取杂质、工作对比品各约7.0mg，杂质工作对比品约8.0mg，杂质工作对比品各约5.0mg，杂质工作对比品各约5.3mg，杂质工作对比品约6.0mg，混合均匀，作为供试品。取供试品适量，加流淌相A充分溶解，再加流淌相A稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞0.5mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；周密量取供试品溶液适量，加流淌相A稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞2.5g的溶液，作为对比溶液。分不周密量取20l，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算各已

41、知杂质的含量；未知单杂以自身对比法计算其含量。重复测定6次，考察周密度。试验结果见表3.2.P.5.3.2-5。（图3.2.P.5.3.2-1431，制剂的质量操纵一第7895页）表3.2.P.5.3.2-5 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查重复性试验结果序号123456平均值RSD%杂质（%）0.5010.5060.5070.4960.5110.4870.5011.74杂质（%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5012.08杂质（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5081.91杂质（%）0.5080.4990.4980.4900.

42、4870.4830.4941.86杂质（%）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5002.19杂质（%）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4971.61其他单杂（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.83其他总杂（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.19结论：试验结果表明，此法重复性良好。7.2中间周密度试验 取重复性项下供试品，由不同试验人员分不在不同日期、不同仪器检查其有关物质，试验结果见表3.2.P.5.3.2-6。（图3.2.P.5.3.2-324

43、9，制剂的质量操纵一第96113页）表3.2.P.5.3.2-6 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查中间周密度试验结果序号123456平均值RSD%杂质（%）0.5010.5060.5070.4960.5110.4870.5011.420.4910.5040.5080.5030.4980.502杂质（%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5031.490.5030.5070.5050.5020.5080.503杂质（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5002.230.4840.4940.4930.4890.5060.493杂质（%）0.

44、5080.4990.4980.4900.4870.4830.4951.400.4900.4970.4900.4990.5000.498杂质（%）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5001.630.5020.4930.4960.4960.5050.505杂质（%）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4961.320.4880.5020.4960.4910.5010.496其他单杂（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.180.0200.0210.0200.0220.0190.021其他总杂（%）0.

45、0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.400.0260.0290.0280.0310.0270.029结论：此法检查本品的有关物质中间周密度良好。溶液稳定性试验供试品溶液：取本品适量（约相当于沃诺拉赞25mg），周密称定，置50ml量瓶中，加流淌相A适量，振摇，使充分溶解，加流淌相A稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。对比溶液：周密量取供试品溶液适量，加流淌相A定量稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞2.5g的溶液，作为对比溶液。分不取杂质、工作对比品各适量，周密称定，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5g的溶液，作为杂质对比品溶液。将上

46、述各溶液于室温下放置12小时，分不于0、3、6、9、12小时，周密量取20l注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积考察溶液稳定性，结果见表3.2.P.5.3.2-79。（图3.2.P.5.3.2-5064，制剂的质量操纵一第114128页）表3.2.P.5.3.2-7 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查溶液稳定性试验结果（供试品溶液）名称/时刻0h3h6h9h12h平均值RSD%未知杂质14059370138863998428239855.39杂质100409532987895141047598884.03沃诺拉赞43546651435460494347302643443924434341014348

47、87500.13杂质2144421347218122210223923221264.74未知杂质28351823676549349957886349.34表3.2.P.5.3.2-8 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查溶液稳定性试验结果（对比溶液）名称/时刻0h3h6h9h12h平均值RSD%沃诺拉赞2235192245612241462242572242102241390.17表3.2.P.5.3.2-9 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查溶液稳定性试验结果（杂质对比品溶液）峰面积/时刻0h3h6h9h12h平均值RSD%杂质2323312324032327992325382300542320250.4

48、8杂质2505242507642511062512642501232507560.18杂质1546791543441533191536441542831540540.36杂质2228152220392240302235972224712229900.37杂质1943491906411885701852351807211879032.77杂质2448022465392502332468582375312451931.92结论：供试品溶液、对比溶液、杂质对比品溶液12h内稳定性良好。准确性试验杂质对比品溶液：分不取杂质（含量73.14%）、（含量72.46%）、（含量62.67%）、（含量99.4

49、4%）、（含量94.37%）、（含量84.59%）工作对比品各适量，周密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5g的溶液，作为杂质对比品溶液。供试品溶液：取20140701批原料适量（约相当于沃诺拉赞25mg），周密称定，置50ml量瓶中，加流淌相A适量，使充分溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；按外标法计算各已知杂质的百分含量。表3.2.P.5.3.2-10 富马酸沃诺拉赞各已知杂质的测定结果名称杂质杂质杂质杂质杂质杂质测得含量%0.0150.031未检出未检出未检出未检出回收率溶液：1）取杂质、工作对比品各约11.0mg，杂质工作对比品约12.8mg，杂质工作对比品各约

50、8.0mg，杂质工作对比品各约8.5mg，杂质工作对比品约9.5mg，周密称定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀释至刻度，摇匀；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料约13.36mg，周密称定，置同一20ml量瓶中，按处方比例加入辅料，加流淌相A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率（80%浓度）溶液。同法配制3份。2）取杂质、工作对比品各约13.7mg，杂质工作对比品约16.0mg，杂质工作对比品各约10.0mg，杂质工作对比品各约10.6mg，杂质工作对比品约11.8mg，周密称定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀释至刻度，摇匀；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料约13.3

51、6mg，周密称定，置同一20ml量瓶中，按处方比例加入辅料，加流淌相A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率（100%浓度）溶液。同法配制3份。3）取杂质、工作对比品各约16.5mg，杂质工作对比品约19.1mg，杂质工作对比品各约12.0mg，杂质工作对比品各约12.7mg，杂质工作对比品约14.2mg，周密称定，置200ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀释至刻度，摇匀；周密量取1ml，置20ml量瓶中，取原料约13.36mg，周密称定，置同一20ml量瓶中，按处方比例加入辅料，加流淌相A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率（120%浓度）溶液。同法配制3份。分不周密量取上述溶液各20l注入液相色谱仪

52、，记录色谱图，结果见表3.2.S.4.3.2-10、11。（图3.2.P.5.3.2-6575，制剂的质量操纵一第129139页）按外标法以峰面积计算供试品溶液中各杂质的量。再按下式计算回收率：回收率（%）=式中：M测得量为回收率溶液中已知杂质的测得量； M供试品中的量为回收率溶液中供试品的已知杂质的量； M加入量为回收率溶液中已知杂质的加入量；表3.2.S.4.3.2-11 富马酸沃诺拉赞杂质测定回收率试验结果编号M加入量/gM测得量/gM供试品/mg杂质%M供试品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.298.3313.420.0150.002100.4699.330.7228.22

53、8.1713.390.00299.3738.358.2513.450.00298.78410.1410.1513.370.002100.08510.2010.0913.410.00298.90610.1510.1313.290.00299.78712.0511.9913.270.00299.49812.1011.9813.250.00298.99912.0911.8713.30.00298.16编号M加入量/gM测得量/gM供试品/mg杂质%M供试品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.358.2413.420.0310.00498.6399.320.7328.588.5513.390

54、.00499.6038.578.5213.450.00499.37410.5210.5013.370.00499.77510.9110.8013.410.00498.96610.6810.5213.290.00498.46712.4512.5413.270.004100.69812.2412.2213.250.00499.80912.5112.3413.300.00498.61编号M加入量/gM测得量/gM供试品/mg杂质%M供试品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%17.877.8413.42未检出099.6298.850.4427.917.8213.39098.8637.917.821

55、3.45098.8649.959.8113.37098.5959.989.9013.41099.2069.969.8213.29098.59711.9711.7913.27098.50811.8211.7313.25099.24911.8211.6113.30098.22编号M加入量/gM测得量/gM供试品/mg杂质%M供试品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.138.1713.42未检出0100.49100.110.8228.058.0213.39099.6338.148.2213.450100.98410.2410.1813.37099.4159.949.7913.41098.4

56、969.849.9113.290100.71711.9511.9413.27099.92811.6711.7713.250100.86912.0912.1513.300100.50编号M加入量/gM测得量/gM供试品/mg杂质%M供试品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.808.8013.42未检出0100.0099.100.7028.838.7913.39099.5538.648.5013.45098.38410.6310.5113.37098.8759.709.6413.41099.38610.4210.2813.29098.66710.8910.7013.27098.26811

57、.2511.1013.25098.67911.6511.6713.300100.17编号M加入量/gM测得量/gM供试品/mg杂质%M供试品中的量/mg回收率/%平均/%RSD/%18.057.9513.42未检出098.7699.320.7928.027.9013.39098.5038.028.0313.450100.12410.4210.3313.37099.14510.3710.3313.41099.61610.0310.0513.290100.20711.8611.7713.27099.24812.2512.2813.250100.24911.9111.6813.30098.07结论：

58、此方法测定杂质准确性良好。 10、耐用性试验 为考察色谱系统在轻微变化时的耐用性情况，通过改变流淌相比例、流淌相pH值、流淌相盐浓度、流速等色谱因素进行试验，计算含杂质的量。分不取杂质、工作对比品各适量，周密称定，加流淌相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5g的溶液，作为杂质对比品溶液。取重复性项下供试品。取供试品约115.0mg，周密称定，置20ml量瓶中，加流淌相A溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。周密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，加流淌相A稀释制成至刻度，摇匀，作为对比溶液。周密量取上述溶液各20l注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算

59、各杂质含量，结果见表3.2.P.5.3.2-1213。（图3.2.P.5.3.2-76102，制剂的质量操纵一第140166页）表3.2.P.5.3.2-12 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查耐用性试验结果1耐用性研究项目方法及条件耐用范围沃诺拉赞杂质杂质杂质杂质杂质杂质分离度分离度分离度分离度分离度分离度分离度色谱原条件5.5245.5242.2465.931 2.2462.11263.805流速0.955.6605.6602.0456.0462.0451.98761.9881.055.4955.4951.9145.6661.9141.98068.939流淌相比例54-465.4705.4704

60、.2196.0902.8554.37352.25050-505.3585.3581.4395.1141.4391.47979.057pH值7.15.4315.4313.3245.5743.3243.47662.6977.35.9635.9631.3296.5271.3291.36561.412盐浓度0.0455.3415.3412.6975.4432.6972.93067.9400.0555.5385.5382.5315.7682.5312.57862.714表3.2.P.5.3.2-13 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查耐用性试验结果2耐用性研究项目方法及条件耐用范围杂质%杂质%杂质%杂质%杂质